Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

Химеры вследствие диспермии*

Эритроцитарный химеризм у детей из разнополых близнецовых пар (табл. 4.36) сопровождался присутствием в некоторой части лимфоцитов одно­временно обеих гетерохромосом - X и Y. Подобную картину наблюдали при хи­мерах, вызванных диспермией (табл. 4.37).

При диспермии наблюдают химеризм почти во всех тканях, включая поло­вые железы. У таких лиц часто регистрируется гермафродитизм.

Van Dijk и соавт. [677] полагают, что эритроцитарный химеризм у человека яв­ление не столь редкое, как это было принято считать. Химеры, при которых соот­ношение разногруппных эритроцитов 15/85-5/95 %, обычные методы серологи­ческого исследования не распознают, в связи с чем существующие данные о ча­стоте кровяного химеризма не совсем точны. Авторы применили для учета хи­мер чувствительный люминесцентный метод, позволяющий распознавать в крови менее 1 % иногруппных эритроцитов. При исследовании этим методом 415 пар близнецов-двоен и 57 пар близнецов-троен частота химер составила 32 (8 %) и 12 (21 %) соответственно, что существенно выше, чем регистрировалось ранее. К этому следует добавить, что химеризм может проявляться в двух формах:

• присутствие в кровяном русле человека 2 популяций эритроцитов, отли­чающихся по групповым антигенам. Такую химеру можно диагности­ровать с помощью серологических методов исследования;
• присутствие в кровяном русле человека 2 популяций эритроцитов, не отличающихся по групповым антигенам, однако принадлежащих гене­тически разным росткам. Такую химеру невозможно зарегистрировать серологическими методами исследования. Она может быть распознана только с помощью молекулярно-генетических методов.

Если исследовать обе указанные формы химеризма не только у близнецов и гематологических больных, но и у доноров, то истинная частота химер, очевид­но, превысит частоту регистрируемую.
* Диспермия - редкое явление, при котором организм развивается из яйцеклетки, опло­дотворенной двумя сперматозоидами, или из двух слившихся оплодотворенных яйце­клеток.

Прогресс в М изучении эритроцитарного химеризма достигнут благо­даря трансплантации аллогенного костного мозга (Л.С. Любимова [76], Л.П. Порешина и др. [88, 89], Е.А. Зотиков и др. [58], Ren и соавт. [560]). В ли­тературе обсуждаются 2 типа трансплантационных химер. Первый тип - пол­ные химеры - полная замена эритроцитов реципиента на эритроциты донора. В буквальном смысле полная замена это уже не химера, поскольку присутству­ет только одна популяция эритроцитов донорского фенотипа. Второй тип - сме­шанные, или истинные, химеры - частичная замена эритроцитов реципиента на эритроциты донора.

Оригинальная классификация трансплантационных химер предложе­на Л.П. Порешинной и соавт. [88, 89]. Авторы отметили вариабельность эри­троцитарного химеризма и выделили несколько типов, подтипов, вариантов и подвариантов химер. Варианты химер по антигенам Rh отражают характер при­живления костного мозга.

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

Таблица 4.34

Распределение D-антигена у больных анемией*

* По М.А. Умновой, Ю.И. Лорие и Ф.Э. Файнштейну [115].

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

Нами [28, 30] была исследована ассоциативная связь резус-принадлежности с предрасположенностью к опухолевым заболеваниям. Проанализировали дан­ные обследования 1457 онкологических больных и 18 090 здоровых лиц (кон­трольная группа).

Частота антигена Rh_o(D) в большинстве обследованных групп больных не отличалось от таковой у здоровых (табл. 4.32). Исключение составили больные с опухолями толстой кишки, кожи, щитовидной железы, желудка (мужчины) и гемобластозами. Среди них чаще встречались Rh-отрицательные (16,26-25,76%).

Распределение антигенов Rh-Hr у больных с злокачественными опухолями

Фенотипирование эритроцитов больных по минорным антигенам - G, С, с, Е, е, D^u - позволило выявить некоторые особенности их распределения
(см. табл. 4.32). Так, антиген Е встречался с низкой частотой у мужчин, больных раком желудка и толстой кишки (25,6 и 20,9 % соответственно, при норме
37,17%).

По сравнению со здоровыми людьми больные с опухолями реже имели фено­тип ccDEE (2,99 % при норме 4,35 %). Среди больных женщин очень редко встре­чался антиген который был обнаружен лишь в 2 случаях среди 1854 больных с гормонально-зависимыми опухолями (рак матки, яичника, молочной железы, тол­стой кишки). Среди здоровых лиц антиген D^u имеет частоту 1,37 % (табл. 4.33).

Вместе с тем у больных с опухолями желудка, толстой кишки, легких и брон­хов чаще определялись сочетания CcDee (31,85%), ccDee (2,92%) и Ccddee (1,39 %), гаплотипы cDe (4,16 %), Cde (2,68 %).

Распределение фенотипов Rh-Hr у больных с злокачественными опухолями

* Различия достоверны: p < 0,001-0,05.

Таким образом, выявленные различия частоты антигенов системы Rh связа­ны главным образом с распределением минорных специфичностей Rh и редких генных комплексов cDe и Cde. Среди большинства обследованных групп боль­ных реже встречалось сочетание генов cDE. Можно предположить, что лица с этим гаплотипом менее склонны к накоплению мутаций, приводящих в итоге к опухолевому росту. Полученные нами данные не противоречат гипотезе транс­формации нормальной клетки в опухолевую в результате многоступенчатого процесса накопления генетических изменений (Ю.Н. Кобзев, Е.В. Флейшман [66]). К патогенетическим факторам мутаций относят транспозоны ретрови-русного происхождения. Такие мобильные элементы, несущие онкогены, встра­иваясь в клеточную ДНК вблизи протоонкогенов, могут активировать их экс­прессию. В частности, изменение функций антионкогена АВЫ в позиции 9.q.34.1 (рядом с локусом генов ABO, 9.q.34.2) при образовании гибридно­го гена BCR/ABL способствует развитию миело- и лимфолейкоза (Г.И. Абелев [2]). Утрата антионкогена р73 в позиции 1р.36.3 локуса RH (1р.36.1-1р34.3) в 47 % случаев связана с возникновением гемобластоза, а также рака молочной железы, прямой кишки, легких, нейробластомы (И.Б. Зборовская [57]). Эти дан­ные позволяют предположить, что изменения структуры генов RH могут быть ассоциированы с возникновением некоторых видов онкопатологии. Вместе с тем следует признать, что гены, контролирующие синтез эритроцитарных ан­тигенов, к процессу канцерогенеза могут иметь лишь косвенное отношение.

Показатель относительного риска (RR) онкологических заболеваний, рассчи­танный нами для лиц, имеющих гены cDe и Cde, составляет 2,06 и 2,98 соот­ветственно. Это несравненно ниже, чем риск возникновения болезни Бехтерева, синдрома Рейтера, ювенильного ревматоидного артрита у носителей гена HLA-B27, где величина RR достигает 90 (Ю.М. Зарецкая [54], В.Н. Шабалин, Л.Д. Серова [128]). Таким образом, выявленные нами коррелятивные связи можно квалифицировать как слабые ассоциативные. Вместе с тем они являются статистически значимыми и могут служить основанием для разработки профи­лактических мероприятий.

Н.Д. Герасимова [29] отметила интересную особенность онкологических больных. Способность вырабатывать антиэритроцитарные антитела у них ока­залась наиболее низкой (индекс аллоиммунизации 0,15 %) из всех категорий об­следованных, включая здоровых лиц - доноров крови.

Van der Schroeff и соавт. [676] выявили генетическую связь между вариа­бельной эритродермией (заболеванием, имеющим аутосомно-доминантный ха­рактер наследования) и локусом RH. Наследственная передача этого заболева­ния у большой группы детей была связана с генным комплексом cde. Среди 27 обследованных детей только у одного ребенка c^fe-комплекс и эритродермия на­следовались раздельно.

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

У монголов частота антигена KEL1 0,4 %, у хакасов - в 10 раз больше (4 %), что приближает их к европеоидам, у которых частота этого антигена 6-9 %.

Относительно высокую частоту фактора D регистрируют среди азербайд­жанцев (94,2 %), хотя они не являются монголоидами, а относятся к тюркским народам, стоящим ближе к европеоидным расам. В то же время частота антиге­на hr* (с) у азербайджанцев (62,1 %) самая низкая среди сравниваемых популя­ций и практически соответствует частоте этого фактора у монголов (66,0 %).

По данным за 2004 г. (см. табл. 4.31) среди жителей Москвы (доноров кро­ви СПК ГНЦ) количество резус-отрицательных лиц возросло по сравнению с 1967 г. с 14 до 19 %. Это, по-видимому, связано не с изменением соотноше­ния генов RHD и RHCE в московской популяции за период с 1967 г. по 2004 г. (см. табл. 4.31), а с активным привлечением к донорству резус-отрицательных лиц, кровь которых нередко является дефицитной.

Близкие значения частоты антигенов Rh-Hr наблюдают у русских, коми и ар­мян, хотя они также имеют свои особенности (см. табл. 4.31).

Wagner и соавт. [695] привели данные о распределении групповых факторов крови среди 70 тыс. обследованных жителей Юго-Западной Германии. Частота гаплотипов RH составила: cde - 0,394; CDe - 0,431; cDE - 0,136; cDe - 0,021; Cde - 0,011. Антиген D категории VI встречался с частотой 0,02 %.

По данным Yan и соавт. [726], у китайцев народности хан частота гомо­зигот С/С составляет 43,8 %, гомозигот Е/Е - 5,7 %, гомозигот с/с - 9,0 %. Аналогичные показатели у европейцев существенно ниже: С/С - 20 %, Е/Е -2 %, а с/с выше - 80 %.

Интересные данные получены Jeremiah и Odumodu [380] при обследовании представителей отдельных этнических групп нигерийцев (Калабар, Нигерия). Оказалось, что все 528 человек из племен ибибио, эфик и ибо являются носите­лями антигена с (hr^f). В то же время антиген С (rh') у представителей этих пле­мен встречается редко или вовсе отсутствует. Среди ибибио частота антигена С (rh^f) - 3,6 %, среди ибо - 2,8 %, среди эфик - 0 %.

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

Антителогенез у больных СПИДом

Считается, что люди, инфицированные вирусом иммунодефицита человека (синдром приобретенного иммунодефицита), не способны вырабатывать антитела к антигенам эритроцитов. Вирус угнетает функцию Т-лимфоцитов CD4+ и таким образом разрывает цепь кооперированного клеточного взаимодействия, присущего нормальному иммунному ответу. При таких условиях продукция иммунных анти­тел затруднена. Иллюстрацией этого положения могут служить наблюдения Boctor и соавт. [176]. Авторы исследовали сыворотку крови 8 резус-отрицательных боль­ных СПИДом, получавших множественные переливания резус-положительных эритроцитов в связи с развившейся у них анемией. Скрининг антител проводили спустя 8-65 недель после трансфузий. Ни у одного из больных не выработалось aHra-D-антител, несмотря на то, что им было перелито от 2 до 11 доз эритроцитов каждому. В то же время 6 больных D-, лечившихся по поводу других заболеваний, получили от 1 до 9 трансфузий эритроцитов D+. У всех больных в течение 7—19 не­дель после трансфузий выработались анти-О-антитела.

Онтогенез и филогенез антигенов Rh

Rh-антигены формируются у человека в раннем периоде внутриутробного развития: как только в тканях эмбриона появляются эритроидные клетки.

Первые работы об обнаружении антигенов резус в тканях абортированных эмбрионов относятся к началу 1940-х годов. Bornstein и Israel в 1942 г., Stratton

в 1943 г, Chown в 1955 г. нашли антигены резус у 6-9-недельных эмбрионов, а Bergstrom и соавт. [165] — у 38-дневного эмбриона*

П.Н. Косяков и Л.Н. Муравьева [71] выявили 5 антигенов резус - С, с, D, Е и е -у всех 94 обследованных ими плодов 10-28-недельного возраста. Таким образом, к моменту рождения все Rh-детерминанты полностью сформированы.

Раннее формирование антигенов резус у плода имеет медицинское значение. Искусственное прерывание беременности в срок 10-12 недель может привести к аллоиммунизации женщины и невозможности для нее в дальнейшем родить здоровых детей. Пагубное влияние на закладку тканей эмбриона могут оказы­вать резус-антитела матери, стимулированные предыдущими родами. В этом случае гемолитическая болезнь плода выражена в особо тяжелой форме, несо­вместимой с жизнью (водянка головного мозга, уродства).

Ballas и соавт. [152], Sieff и соавт. [6111] установили, что экспрессия веще­ства Rh увеличивается по мере дифференцировки эритроидных предшествен­ников в зрелые эритроциты.

Mazumdar [468] отметил, что эритроидные клетки способны агглютиниро­ваться сыворотками антирезус на стадии нормобластов.

Green и Daniels [312] применили экспериментальную модель, воспроизво­дящую in vitro стадии эритропоэза. Авторы выделили клетки CD34 из пупо-винной крови, используя для этого ферромагнетики, конъюгированные с анти­телами, и магнитные колонки. Далее взвесь культивировали в сывороточной среде с эритропоэтином. Культуральные клетки исследовали методом про­точной цитометрии с моно- и поликлональными антителами анти-D, анти-С, анти-с и анти-е. Поверхностные группоспецифические мембранные протеины и гликопротеины появились в такой Последовательности: на 4-й день культи­вирования - CD47 и RhAG (Rh-ассоциированный гликопротеин), на 7-й день Щ гликофорин А, на 10-12-й день - Rh-полипептиды. Эпитопы epD6/7 выявляли несколько раньше, чем эпитопы epDl-epD9 и антигены С, с и е.

Rh-антигены в процессе эмбриогенеза формируются в определенной по­следовательности. В начале нормобластной фазы эритропоэза появляются Rh-гликопротеины, затем Rh-полипептиды, не несущие еще Rh-специфичности. Через некоторое время, к концу нормобластной фазы, на полипептидах начина­ют появляться эпитопы антигенов D и С.

Серологически активный субстрат Rh, в противоположность групповым суб­станциям полисахаридной природы не растворяется в воде. Он присутствует исключительно в мембране эритроцитов и их предшественников [281].

Антигены Rh обнаружены в клетках раковых опухолей и в метастазах у резус-положительных больных (П.Н. Косяков [69]). Раковые клетки резус-отрицательных больных не содержали антигенов Rh.

В других органах и тканях, а также жидкостях организма Rh-антигены от­сутствуют. Специально проведенные исследования не выявили Rh-антигенов в слюне, амниотической и семенной жидкости, лейкоцитах, тромбоцитах. Rh-антигены отсутствовали также в культивируемых клетках амниона [293] и спер­матозоидах [426, 269, 540].

Rh-антигены находят только у человека и некоторых видов обезьян, в основном человекообразных [120,486, 487, 710]. Однако, как показали Moore и соавт. [Abstracts 14^th Congr. ISBT, 1975, P. 58], эритроциты шимпанзе, бабуинов и зеленых мартышек не адсорбируют антитела анти-Нг/Нг_о, т. е. не содержат характерного для людей Нг_о-антигена.

Интересные находки описали Blancher и соавт. [170]. Авторы использовали на­бор моноклональных анти-О-антител (70 серий IgG и 27 серий IgM) для сравни­тельного исследования эритроцитов человекообразных обезьян - шимпанзе, го­рилл, орангутанов, гиббонов - и нечеловекообразных обезьян - макак и бабуинов. Положительные реакции с эритроцитами обезьян сыворотки IgM давали реже, чем сыворотки IgG. Эритроциты африканских обезьян реагировали в основном с сыворотками IgG. Большинство анти-Б-антител IgG (61 из 70) реагировали с эритроцитами горилл, подтверждая таким образом, что антиген, присутствую­щий в эритроцитах горилл, подобен D-антигену человека. Большинство анти-D-антител, не реагирующих с эритроцитами шимпанзе, не взаимодействовали так­же с эритроцитами людей, которые содержали парциальный антиген D™. В то же время сыворотки, агглютинирующие эритроциты D^Ivb человека, давали положи­тельные реакции почти со всеми образцами эритроцитов шимпанзе. Результаты, наблюдаемые с сыворотками антирезус других (не анти-D) специфичностей, под­твердили, что шимпанзе, гориллы и гиббоны экспрессируют с-подобный (c-like) антиген. Антигены С, Е и е у всех видов исследованных приматов отсутствовали.

Shaw [608] исследовал эритроциты приматов тремя моноклональными сыво­ротками aHTH-LW^ab и несколькими сериями сывороток с различной специфич­ностью антирезус. Первая из анти-Ь\¥^аЬ-сывороток реагировала с эритроцита­ми горилл и макак-резус, но не реагировала с эритроцитами орангутанов, бабу­инов и мартышек. В противоположность этому 2 другие сыворотки реагирова­ли с эритроцитами всех указанных обезьян. Эритроциты шимпанзе реагировали только с третьей из использованных сывороток aHTH-LW^ab.

Неодинаковое реагирование эритроцитов обезьян свидетельствовало о том, что использованные анти-Ь\^^аЬ-антитела распознают разные эпитопы антигена LW на эритроцитах обследованных животных. У некоторых обезьян LW-антиген экспрессирован в виде парциальных вариантов, не встречающихся у людей.

Моноклональные сыворотки анти-D реагировали по-разному: одни агглюти­нировали эритроциты человека, гориллуи шимпанзе, другие - эритроциты всех исследованных групп приматов, включая человека.

Далее Blancher и соавт. [171] исследовали 53 моноклональные анти-D-гооротки с панелью эритроцитов шимпанзе. Панель включала образцы, содер­жащие различные комбинации антигенов R, С, Е и F, которые считаются гомо­логами антигенов системы Rh-Hr человека. Результаты реакций с эритроцита­ми шимпанзе и человека иногда совпадали, однако не позволяли идентифици­ровать шимпанзе как резус-положительных и резус-отрицательных подобно че­ловеку. Установлено, что эритроциты обоих сравниваемых видов (человека и шимпанзе) содержат эпитопы epD5, epD6/7 и epD8 и в то же время эритроциты шимпанзе не содержат эпитопов epDl, epD2, epD3 и epD4, как это имеет место в эритроцитах человека, содержащих парциальные антигены D^ivb и D^Vc.

Поликлональные сыворотки анти-D не реагировали с эритроцитами макак-резус [620].

Socha и соавт. [619], используя 49 анти-О-моноклональных реагентов IgG и IgM, отметили, что антитела IgM сильнее и чаще реагировали с эритроцитами нечеловекообразных обезьян как Старого, так и Нового Света. Эритроциты че­ловекообразных обезьян Нового Света, наоборот, реагировали лучше с IgG, но хуже с IgM. Некоторые эпитопы, выявляемые этими антителами на эритроцитах макак, напоминали D-антиген человека.

иКак показали Roubinet и соавт. [579], число участков антигена D на эритро­цитах человека и шимпанзе приблизительно одинаково. У горилл оно отлича­ется большой вариабельностью - от 48 до 230 тыс. на 1 эритроцит. Авидность анти-О-антител по отношению к эритроцитам шимпанзе и горилл несколь­ко ниже, чем по отношению к эритроцитам человека. Интересно отметить, что обработка эритроцитов шимпанзе папаином усиливает реакцию с IgG анти-О-антителами, а обработка этим ферментом эритроцитов горилл угнетает реакцию вследствие разрушения D-подобных эпитопов, которые имеют эти обезьяны.

При хромосомном картировании ^/-подобного локуса шимпанзе, проведенном Calvas и соавт. [191], установлено, что этот локус располагается на хромосоме 1 в области 1р36.1-р34.2, т. е. практически в той же области генома, что и у человека.

Наряду с антигенным сходством эритроцитов человека и обезьян было выявлено их существенное различие. Blancher и соавт. [169] использовали 18 серий моноклональных антител к эритроцитам человека, продуцируемых гетерогибридомами макака х мышь. Все серии антител давали одинаковые положительные реакции с эритроцитами человека любого фенотипа, за ис­ключением эритроцитов Rh_null. Одни сыворотки содержали антитела, реаги­рующие с антигенами Kell и Rh, другие - антитела к антигенам CD55, CD44, CD59 или к гликофоринсвязанным антигенам системы Diego (Wr^b), системы Gerbich (Ge4) и других.

Westhoff и соавт. [703] сравнили геномную организацию Rh-локуса челове­ка и гомологичную Rh-структуру мышей Mus musculus. Для сравнения исполь­зовали мРНК из библиотеки кДНК спленоцитов мыши. Оказалось, что мыши несут только один ген RH. Полипептид, кодируемый этим геном, отличается от

Rh-полипептида человека на одну аминокислотную последовательность. Rh-полипептид мыши состоит из 418 аминокислот, Rh-полипептид человека - из

417. Нуклеотидная последовательность генов и последовательность аминокис­лот в Rh-полипептиде мыши и человека на 85 % были идентичны. Rh-белок, экспрессируемый на поверхности эритроцитов мышей, имеет мол. массу 32 кДа, сопоставимую с Rh-полипептидом человека (30-32 кДа). Предполагают, что рассматриваемые виды млекопитающих отделились от общего предка в процессе эволюции около 80 миллионов лет назад.

Несмотря на большое структурное сходство Rh-белка мыши и человека эри­троциты мыши не реагируют с анти-Б-антителами человека в серологических реакциях. Авторы объясняют это тем, что одинаковые Rh-полипептидные по­следовательности, экспрессированные на эритроцитах человека и мыши, раз­мещаются на разных экстрацеллюлярных петлях полипептида. Размещение D-подобных эпитопов мыши не соответствует конфигурации рецепторов анти-D-антител человека.

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

Полученные данные свидетельствуют о том, что резус-отрицательные лица более склонны вырабатывать антитела не только к аллоантигенам, но и к гете-роантигенам (в данном случае к стафилококковому анатоксину).

Таблица 4.29

Распределение Rh+ и Rh- среди лиц, иммунизированных стафилококковым анатоксином

Разные соотношения резус-положительных и резус-отрицательных лиц в по­пуляции и среди людей, имеющих антилимфоцитарные, антиэритроцитарные и антистафилококковые антитела, дают основание предполагать существование определенной связи между генами RH и генами иммунного ответа /г, несмотря на то, что они располагаются на разных хромосомах.

Поскольку в отсутствие гена D выработка антител происходила в 2 раза чаще, чем при его наличии, можно предположить, что способность к гумораль­ному иммунному ответу на аллоантигены связана с геном RHce.

Полученные нами фактические данные о неодинаковой способности лиц Rh+ и Rh- вырабатывать антитела, помимо теоретического интереса, могут быть использованы в прикладных целях: при заготовке сывороток HLA, отборе респондеров для искусственной иммунизации с целью получения диагностиче­ских и лечебных сывороток.