Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

Описаны случаи появления аутоантител анти-D у лиц с частичным D-фенотипом при первичной иммунизации в результате гемотрансфузии или беремен-сти [216, 375, 454]. Нередко продукция аутоанти-О-антител предшествует одукции аллоанти-О-антител или сопровождает ее.

То что аутоантитела анти-D представляют собой, как теперь полагают, истинные анти-О-антитела, а не мимикрирующие, они не имеют значе­ния в трансфузиологии, поскольку, вопреки ожиданиям, не вызывают лизиса пе­релитых эритроцитов D+ в кровяном русле реципиента. В некоторых случаях они проявляют слабое гемолитическое действие в отношении собственных эритроци­тов, что все-таки свидетельствует об их некотором сходстве с истинными аллоан-тителами, одновременно присутствующими в кровяном русле реципиента.

В одних случаях сначала появлялись аутоанти-О-антитела, которые за­тем трансформировались в аллоантитела и далее не реагировали с собствен­ными эритроцитами, а также с эритроцитами лиц, имеющих такой же парци­альный D-антиген, в других - анти-О-антитела реагировали in vitro с собствен­ными эритроцитами, но in vivo были клинически безвредны. Во всех случаях аутоанти-О-антитела имели транзиторный характер.

Клинический случай. Приводим одно из наблюдений последних лет (Flegel и соавт., 2000 [288]). Пациенту 72 лет, D-, перелили эритроциты нескольких доно­ров, один из которых, как потом выяснилось, имел слабый антиген D II типа. Через 19 дней у реципиента наблюдали положительную прямую пробу Кумбса и выяви­ли анти-О-антитела в сыворотке и элюате, снятом с его эритроцитов. Через 10 мес. в сыворотке крови пациента присутствовали только аллоанти-О-антитела, аутоантите-ла не определялись. Донор имел фенотип ccDEe со слабым D. Анализ нуклеотидной последовательности его геномной ДНК экзона 9, подтвердил, что донор имел слабый D, обусловленный аллелем слабый D тип 2. Как установили авторы, экспрессия ан­тигена D у донора соответствовала 450 участкам на 1 эритроцит (в норме не менее 10 000). Аналогичный случай аллоиммунизации слабым антигеном D I типа опубли­ковали Mota и соавт. [491].

Приведенное наблюдение подтверждает положение о том, что процесс алло­иммунизации может сопровождаться продукцией аутоантител и свидетельству­ет о том, что даже серологически слабовыраженные парциальные антигены с низкой экспрессией могут проявлять иммуногенность.

Поскольку результаты ДНК-типирования пациента авторы не привели, оста­ется не совсем понятным, каким образом специфические анти-О-антитела в ау­тоиммунном варианте могут связываться, как в рассмотренном случае, с эри­троцитами пациента D-. Может быть, пациент все же содержал единичные эпи­топы D, образовавшиеся в результате неполной делеции гена RHD.

Тем не менее переключение продукции аутоанти-О-антител на продукцию аллоанти-О-антител у лиц с парциальными D-антигенами факт установленный.

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

CD^Ive/cDe антиген D выражен нормально и маскирует парциальный D^IV, кото­рый при этом серологически установить не удается. О наличии такого антиге­на у родителей можно судить по передаче его детям при условии, что они по­лучат генотип CD^Ive/cde. Однако о присутствии парциального D^1V у челове­ка CD^lve/cDe можно судить на основании того, что его эритроциты являются Go(a+) и могут нести также другие редкие антигены, связанные с парциаль­ным D этой категории: Riv, FPTT или Evans. В такой же мере маркером эри­троцитов (C)D(e), (c)D(e) с ослабленными формами антигенов С, с и е могут служить антигены Rh32, Rh35, Rh48 (JAL), Rh36 (Be^a).

Таблица 4.17

Редкие антигены, ассоциированные с гаплотипом CDe

Примечание. Норма - активность антигена не изменена, I - антиген слабо выражен, | - антиген сильно выражен.

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

ранее было известно, что некоторые сыворотки анти-D^w содержат несепари-руемый компонент, слабо реагирующий с антигеном R^N(Rh32). Сыворотки, полу­ченные Reid и соавт., давали одинаково сильные реакции с эритроцитами D^w+ и эритроцитами R^N+ и, по-видимому, выявляли комплексный антиген D^W/R^N.

Rouillac и соавт. [581, 582], Beckers и соавт. [158, 160], считают, что амино­кислотные замены, приводящие к образованию парциальных антигенов D^Va, R^N, R_o^Har, D^DBT обусловлены сходными конверсиями гена D и СЕ в экзонах 4 и 5. результатом указанных конверсии, очевидно, и является продукция антигенов D^w, R^N, а также D^W/R^N, идентифицируемых с помощью антител affra-D^w/R^N.

BARC (Rh52)

Антиген BARC, который обнаружили Green и соавт. [314], выявляют только на эритроцитах лиц, имеющих гаплотип CD⁷¹ е. На эритроцитах лиц, имеющих гаплотип CD ^VIE, антиген BARC отсутствует. Из 78 образцов эритроцитов лиц CDⁿe/cde 76 были BARC+; в группе обследованных людей cDⁿE/cde (21 чело­век) все оказались BARC-.

Mouro и соавт. [498] делят антигены категории D^ на 2 генетических типа. Гаплотип cDⁿE, кодирующий только антиген D^, является типом 1. Гаплотип CDⁿe, который кодирует антигены D^ и BARC, представляет собой тип 2. Не исключено, что образцы эритроцитов лиц CD^VIe/cde BARC- и лиц CDⁿe/cde BARC+ представляют собой еще одну разновидность фенотипов в рамках кате­гории D^, помимо 2 указанных выше типов. Образование генов CDⁿe и CD^VIE обусловлено конверсией.

Tar (Rh40)

Редко встречающийся антиген Таг обнаружили Lewis и соавт. [437] на неко­торых эритроцитах D+ и эритроцитах с частичным D. Категория D-антигенов, реагирующих с сывороткой анти-Tar (Rh40), по предложению Lomas и соавт. [444], обозначена D^¹. Антиген D на эритроцитах Таг+ дает более слабую, чем в норме, реакцию с поликлональными сыворотками анти-D. Лица Таг+ вырабаты­вают анти-О-антитела против недостающих у них D-эпитопов [444].

FPTT (Rh50)

В 1994 г. Lomas и соавт. [445], используя панель моноклональных эпитоп-специфических сывороток анти-D, открыли новый парциальный D-антиген, на­званный DFR. Этот антиген присутствовал у 17 человек D+, двое из которых имели анти-О-антитела. В результате семейных исследований установлено, что антиген DFR чаще наследуется в комбинации с аллелем Се, чем сЕ. Авторы отметили, что на всех образцах эритроцитов DFR присутствует антиген FPTT (Rh50), не встречающийся на других эритроцитах. Оба антигена (DFR и FPTT) ||§вязаны друг с другом. Определив один антиген на эритроцитах, можно с боль­шой долей вероятности полагать, что исследуемые эритроциты содержат и вто­рой антиген.

Антиген FPTT сопровождает также некоторые фенотипы с подавленной экспрессией антигенов Rh: R_o^Har(Rh33), D^IVa(C)-, D(C)(e) (табл. 4.17>§
Эритроциты DFR (и FPTT) несут половину (15 из 30) эпитопов антигена D.

R^N(Rh32)

Редко встречающийся антиген Rh32 считается продуктом гаплотипа R^N у не­гров и гаплотипа (C)D(e) у белых. Оба гаплотипа кодируют ослабленную форму антигена С и е [130, 224]. Установлено, что этот антиген присутствует на эри­троцитах, содержащих парциальный D-антиген, известный как DBT.

Антиген Rh32 фенотипически выражен только при отсутствии гена D в обе­их позициях, цис и транс. Однако эритроциты Rh32+ вряд ли можно отнести к резус-отрицательным, поскольку они содержат включения антигена D.

Эритроциты R^N (Rh32+) характеризуются слабой выраженностью антигенов С и е, а также отсутствием в них антигена с (hr^f) и широко распространенного антигена Sec (Rh46).

Молекулярно-генетическое обследование 3 доноров R^N(Rh32+), проведен­ное Rouillac и соавт. [582], показало, что этот антиген является продуктом ги­бридного гена RHCe-D-Ce, в котором экзон 4 (в одном случае часть экзона 3) гена RHCe заменен эквивалентной частью гена RHD.

Гибридный полипептид, кодируемый геном R^N, отличается от протеина, ко­дируемого нормальным геном RHCe, наличием седьмого или восьмого амино­кислотного остатка, специфичного для RHD-протеина.

Как полагает Schenkel-Brunner [597], 3 аминокислоты (Met 169, Met 170 и Не 172), расположенные в 3-й экстрацеллюлярной петле гибридного полипептида, обусловливают присутствие антигена Rh32 и соответственно отсутствие антигена Sec (Rh46).

Ген Dennis

Приводим описание варианта гена R^N- гена Dennis. Chown и соавт. [224] на­блюдали семью с необычным распределением генов RH. Мать CDe/CDe, отец CDe/cDE имели 7 детей, 4 из которых были CDe/CDe, 2 — CDe/cDE и 1 по имени Dennis, - cD^uE/C^ue^u.

Эритроциты Dennis'a имели нормально реагирующие антигены cD^uE, но дава­ли слабую или отрицательную реакцию с сыворотками анти-С и анти-е. Их фено­тип мог быть обозначен как cD^uE- или c(C)D^uE(e). Вместе с тем они реагировали с сывороткой Bill, которая содержала антитела, способные связываться с эритроци­тами D^u. Эритроциты родителей Dennis'a и его 6 братьев и сестер не реагировали с сывороткой Bill. Обследование 4 сестер матери Dennis'a и 212 лиц, так или иначе связанных родством с наблюдаемой семьей, показало, что все они дают отрицатель­ную реакцию с сывороткой Wiel, т. е. не содержат антигена R^N (Rh32).

Оказалось, что Dennis содержит простую дозу антигенов с и Е, а его мать ц 4 братьев и сестер - двойную дозу антигенов С и е. На основании этого авторы предположили, что мать Dennis'а имеет гаплотипы CD^ue/CDe и не несет анти­генов С^ии е^и, которые, будучи ассоциированными с CD^ue, реагируют с сыворот­ками Wiel, Troll и Reynolds. У представителей другой семьи наблюдали эритро­циты CD^ue/C^ue^u, реагирующие с указанными тремя сыворотками.

Появилось сомнение: не является ли Dennis чужим ребенком. Однако тща­тельное изучение обстоятельств рождения Dennis'а, исследование документов роддома, где он родился, опрос персонала, серологическое обследование двух детей, родившихся в тот же день, и их родителей, позволило установить, что Dennis является ребенком упомянутой выше супружеской пары. Щ Эритроциты Dennis'a давали слабые или негативные реакции с сыворотка­ми анти-С и анти-е, но в то же время реагировали с сывороткой Wiel, обнару­живающей присутствие антигена, ассоциированного с D^u, а также с двумя сы­воротками (Troll и Reynolds), которые не реагировали с эритроцитами D^u. Следовательно, эритроциты Dennis'a содержали антиген, который не мог яв­ляться антигеном Wiel. Из этого также следовало, что фенотип Dennis'a не явля­ется продуктом генного комплекса cD^uE, а является продуктом другого гена, ко­торый авторы назвали геном Dennis.

Указанные 3 сыворотки позволили выделить три группы людей:

1. Wiel+Troll (Reynolds)+. Этот фенотип очень редко встречается среди ев­ропеоидов и в 1 % у негроидов. Он обнаружен у женщин по имени Charlie By и Co-Gar, а также у мужчины-негра по имени Harper (см. ниже).
2. Wiel+Troll (Reynolds)-. Этот фенотип редок у европеоидов. Он встречает­ся у 4 % резус-положительных негроидов.
3. Wiel-Troll (Reynolds)-. Частота этого фенотипа более 99 % у европеоидов и 98 % среди негроидов.

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

КI категории D-антигенов был отнесен обычный D-антиген. Люди с антиге­ном категории DI анти-О-антител не вырабатывают.

Ко II категории отнесен антиген D, содержащийся у людей, которые проду­цируют антитела против D-антигенов I, III, IV и V категории. К D-антигенам II и VI категории такие люди антител не вырабатывают.

К III категории отнесен антиген D, встречающийся у лиц, продуцирующих антитела против D-антигенов I, II и IV категории.

Антиген D IV категории отличается от антигена D лиц первых трех ка­тегорий. Люди, имеющие этот антиген, способны вырабатывать антитела к D-антигенам всех категорий, за исключением IV.

Отличительные признаки D-антигенов V и VI категории сводятся к тому, что люди, имеющие эти антигены, способны продуцировать антитела к антигенам D других категорий, но лишены этой способности в отношении собственного D-антигена.

Эритроциты, содержащие антигены D разных категорий, различаются по ча­стоте реагирования со стандартными сыворотками анти-D, полученными от лю­дей D-. Образцы эритроцитов, отнесенные к категории IV, агглютинировались 96 % сывороток анти-D, категории V - 74 %. Эритроциты категории VI реагиро­вали только с 35 % сывороток анти-D.
Из данных, представленных в табл. 4.12, можно заключить, что не все эпито­пы D одинаково иммуногенны. По-видимому, эпитопы, отсутствующие на эри­троцитах D^VI, как раз и являются более иммуногенными, поскольку их отсут­ствие обусловливает низкий процент реагирующих с этими эритроцитами сы­вороток. Напротив, высокая частота реагирования Dⁿ, D^IH, D^IVсвидетельству­ет о том, что они лишены менее иммуногенных эпитопов. Если судить по дан­ным табл. 4.14, к более иммуногенным следует отнести все эпитопы от epDl до epD9, а к менее иммуногенным - те, которые «прячутся» за знаком минус (от­сутствие сильного эпитопа).

Вторую, обновленную версию своей классификации Tippett и Sanger опу­бликовали в 1977 г. [660]. Она включала 5 категорий парциальных D-антигенов (табл. 4.13). Категория I была исключена, так как выяснилось, что некоторые об­разцы крови, отнесенные к этой категории в первоначальной версии, содержали транзиторные анти-О-антитела. Категории III, IV и V подразделены на субкате­гории: Ша, Illb, Шс; IVa, IVb и т. д. Новая версия не внесла принципиальных из­менений в первоначальную, но, как комментировали Issitt и Anstee [374]: «дала элегантный серологический прогноз тех особенностей, которые позднее были об­наружены с помощью моноклональных эпитопспецифических aHTH-D-антител, а также в результате исследования генов, кодирующих частичные D-антигены». Позднее субкатегория Vc была упразднена, так как с помощью моноклональных aHTH-D-антител было показано, что антигены D^Vc и D^ivb представляют одну груп­пу. Кроме того, были детализированы другие позиции (см. табл. 4.13).

Таблица 4.13

Взаимодействие эритроцитов и сывороток людей, содержащих парциальные D-антигены и парциальные анти-О-антитела*

* По Tippett, Sanger [660] и другим источникам.

Лица, имеющие эритроциты категории D^HI (a, b и с), содержат 2 разных анти-О-антитела. Об этом свидетельствует тот факт, что эритроциты D¹¹, D¹¹¹ и дру­гих категорий реагируют с этими сыворотками неодинаково. В частности, анти-О-антитела людей D^IIIb агглютинируют эритроциты D¹¹, D¹¹¹³"^. В то же время эритроциты D^IIIa и D^lllc сыворотками лиц D^IIIb практически не агглютинируют­ся. Такая же двойная специфичность характерна для антител, продуцируемых лицами D^VI. Так, лица и D™' продуцируют 2 типа антител, один из которых реагирует с эритроцитами D^IVb, D^Va и D^Vc, а другой с этими эритроцитами не ре­агирует. Анти-О-антитела, вырабатываемые лицами D^IVa и D^Ivb практически од­нотипны, так же как и антитела, вырабатываемые лицами D^Va, D^vb и D^Vc.

Эритроциты D^IIIb представлены двумя группами. К одной группе отно­сят эритроциты, содержащие антиген G (G+), к другой Ё не содержащие этого антигена (G-). Некоторые образцы эритроцитов категории D^IVa не содержат ан­тигена Go^a (Go⁸-), другие содержат (Go^a+).       Щ'

Моноклональные антитела анти-D, будучи узконаправленными, более контро-астно дифференцируют отдельные эпитопы D-антигена в отличие от поликло-нальных парциальных антител, часто комбинированных с другими антителами.

В табл. 4.14 приведена характеристика парциальных антигенов, состав­ленная на основании данных, полученных разными авторами с помощью мето­да конкурентного связывания [384,385,445,446,659].

Новые обнаруженные фенотипы (DFR [445], DHR [385], DBT, DNU, DHMi, DHMii [384], DTI [513] и др.) пока не отнесены к какой-либо категории.
Обращает на себя внимание тот факт, что эритроциты категории D^IIIa, D^IIIbи D^IIIC несут на себе все 9 эпитопов D. В то же время известно, что лица с эритроцитами категории D¹¹¹ способны вырабатывать аллоиммунные анти-О-антитела [660, 661]. Это обстоятельство со всей очевидностью указывает на то, что в эритроцитах D¹¹¹ отсутствуют какие-то неизвестные эпитопы D, которые не внесены в таблицу 4.14. Антитела к этим эпитопам пока не най­дены. Аналогично ведут себя эритроциты категории Dⁿ,D^IV, D^vhD^VI1, кото­рые в одних случаях реагируют с сыворотками анти-D, а в других не реаги­руют в зависимости от совпадения специфичности парциальных антигенов и парциальных антител.
Castilho и соавт. [198], обследовав 130 больных серповидно-клеточной ане­мией, обнаружили у 12 из них парциальный антиген D^IIIa. Авторы отмечают, что повышенная частота этого антигена при данной патологии увеличивает риск аллоиммунизации пациентов, основным методом лечения которых являются трансфузии эритроцитов. Кроме того, интересен сам факт повышенной частоты антигена D^IIIa при указанном заболевании. Возможно, неправильная форма эри­троцитов и отсутствие в их мембране отдельных структурных элементов (эпи­топов антигена D) каким-то образом связаны.

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

В 1953 г. Don и соавт. [369] обнаружили редкую форму анти-О-антител, ко­торые в солевой среде агглютинировали эритроциты A(II) D+, но не реагиро­вали с эритроцитами 0(1) D+ и A(II) D-. Двойная специфичность подобно­го свойства многие годы оставалась загадкой, пока не появились сообщения Мооге и соавт. [481, 483] о том, что в процессе иммунопреципитации одновре­менно с Rh-полипептидами выделяются гликопротеины, которые за это их свой­ство (сопровождать Rh-полипептиды) были названы Rh-ассоциированными. Как показали Мооге и Green [481], иммунопреципитация была специфической. Если иммунопреципитат (гликопротеин) выделяли из эритроцитов А(П) D+, то он содержал антиген А. Если тот же эксперимент проводили с эритроцитами 0(1) D+, то выделенные гликопротеины не содержали антигена А. В тех слу­чаях, когда использовали смесь равного количества эритроцитов А(П) D- и 0(1) D+, иммунопреципитация анти-О-антителами заканчивалась выделением гликопротеина, не содержащего антигена А.

Результаты этих экспериментов, подтвержденных другими авторами [147, 275, 565], указывали на то, что Rh-ассоциированные гликопротеины несут на себе групповые АВО-субстанции.

Теперь, когда установлена связь между Rh-гликопротеинами и Rh-полипептидами, становится более понятной специфичность анти-0,А-антител, описанных Ikin и соавт. [369]. По-видимому, эти антитела образовались вслед­ствие одновременной стимуляции индивидов D-антигеном, находящимся на по­липептидах, и антигеном А, расположенным поблизости на гликопротеинах.

Подобные антитела со специфичностью aHTH-D,S, которые реагировали с эритроцитами, содержащими одновременно антигены D и S, описали в 1990 г. Le Pennec и соавт. (цит. по [374]). Имеются указания [458] на то, что гликофо-рин В, который, как известно, может нести на себе антиген S, связан в мембране эритроцитов с КЬ-гликопротеинами.

Категория: Система RH

Опубликовано: 19 апреля 2014

Okubo и соавт. в 1984 г. [511] обнаружили, что эритроциты некоторых япон­ских доноров не агглютинировались поликлональными сыворотками анти-D и моноклональными антителами анти-D в антиглобулиновом тесте, однако ад­сорбировали на себе некоторое количество анти-О-антител. Антитела выявля­ли в элюатах, снятых с этих эритроцитов после адсорбции сывороток. Фенотип получил обозначение D_el (elution). Вскоре обратили внимание на то, что фено­тип D_el не встречался у лиц, имеющих анти-О-антитела. Среди 172 222 доноров Гонконга (китайцев) 99,71 % были D+. Из остальных 0,29 % лиц, которые по результатам серологического исследования типировались как одна треть, т. е. 0,09 % от всей популяции, имела фенотип D . Таким образом, почти каждый тысячный китаец является носителем D _г

У некоторых людей с эритроцитами D_el выявляли гаплотип Cde [339, 511], на основании чего Hasekura и соавт. [339] предположили, что фенотип D_el - это продукт гена Z)^w, супрессированного локусом С в положении транс.

Молекулярно-биологический анализ RHD-тена. у лиц D _р проведенный Chang и соавт. [205], выявил делецию 1013 пар нуклеотидов между нитронами 8 и 9 и выпадение почти всего экзона 9.

Fukumori и соавт. [294] считают, что японцы с фенотипом D_e] имеют нор­мальный ген Д но его полипептидный продукт на мембране эритроцитов, по неизвестным пока причинам, экспрессирован на очень низком уровне. Авторы исследовали 306 японских доноров, чьи эритроциты типировали как D-. Из них 102 имели эритроциты, адсорбировавшие анти-Б-антитела и высвобож­давшие их в элюат, т. е. доноры были D_el. У всех 102 доноров с помощью ПЦР найдены экзоны 4, 7 и 10 гена D. У остальных 204 доноров, не имевших фе­нотипа D_d, экзоны гена D отсутствовали. Похожую ситуацию наблюдали у не­гров. Анализ ДНК у негров часто подтверждал присутствие фрагментов гена D у лиц D-.

Chen и соавт. [207] исследовали ДНК 294 тайваньцев D- с помощью ПЦР. Из указанного количества 185 человек (62,9%) имели полную делецию гена RHD, 15 человек (5,1 %) - парциальный ген RHD, а 94 человека (32,0 %) отно­сились к категории D_el. У всех 94 человек с фенотипом D_el обнаруживали ну-клеотидную последовательность, характерную для экзона 9 гена RHD, и аллель 1227А. Авторы считают, что 2 указанные особенности молекулярного строения гена RHD являются генетическими маркерами фенотипа D_eI.

В немонголоидных популяциях фенотип D_el пока не описан.

Р.С. Сахаров и соавт. [97] обрабатывали высохшие пятна крови резус-по­ложительных и резус-отрицательных лиц (жителей г. Москвы) анти-Б-анти­телами и затем сравнивали полученные элюаты. Оказалось, что высохшая кровь резус-отрицательных лиц адсорбирует резус-антитела так же как и

резус-положительных. Элюаты с резус-отрицательной и резус-положительной крови имели практически одинаковую активность. Авторы полагают, что резус-антиген присутствует не только у лиц Rh+, но и в небольшом количе­стве у лиц Rh-. По их мнению, у резус-отрицательных людей эпитопы D рас­полагаются в эритроцитах не экстрацеллюлярно, как у резус-положительных, а эндоцеллюлярно. Поскольку работа указанными авторами не завершена, вряд ли можно сделать заключение, что москвичи Rh- имеют фенотип D_eI, хотя и нельзя исключить, что какая-то часть людей в русской популяции явля­ется носителем этого редкого фенотипа. Остается пока неизученным, насколь­ко экспрессированы Rh-антигены на внутриклеточной стороне мембраны эри­троцитов.