Напишите нам

Поиск по сайту

Наш блог

Как я заболел во время локдауна?

Это странная ситуация: вы соблюдали все меры предосторожности COVID-19 (вы почти все время дома), но, тем не менее, вы каким-то образом простудились. Вы можете задаться...

5 причин обратить внимание на средиземноморскую диету

Как диетолог, я вижу, что многие причудливые диеты приходят в нашу жизнь и быстро исчезают из нее. Многие из них это скорее наказание, чем способ питаться правильно и влиять на...

7 Фактов об овсе, которые могут вас удивить

Овес-это натуральное цельное зерно, богатое своего рода растворимой клетчаткой, которая может помочь вывести “плохой” низкий уровень холестерина ЛПНП из вашего организма....

В какое время дня лучше всего принимать витамины?

Если вы принимаете витаминные и минеральные добавки в надежде укрепить свое здоровье, вы можете задаться вопросом: “Есть ли лучшее время дня для приема витаминов?”

Ключ к счастливому партнерству

Ты хочешь жить долго и счастливо. Возможно, ты мечтал об этом с детства. Хотя никакие реальные отношения не могут сравниться со сказочными фильмами, многие люди наслаждаются...

Как получить сильные, подтянутые ноги без приседаний и выпадов

Приседания и выпады-типичные упражнения для укрепления мышц нижней части тела. Хотя они чрезвычайно распространены, они не могут быть безопасным вариантом для всех. Некоторые...

Создана программа предсказывающая смерть человека с точностью 90%Смерть научились предсказывать

Ученые из Стэнфордского университета разработали программу предсказывающую смерть человека с высокой точностью.

Зарплата врачей в 2018 году превысит средний доход россиян в два разаЗП докторов

Глава Минздрава РФ Вероника Скворцова опровергла сообщение о падении доходов медицинских работников в ближайшие годы. Она заявила об этом на встрече с журналистами ведущих...

Местная анестезия развивает кардиотоксичностьАнестетики вызывают остановку сердца

Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения озвучила тревожную статистику. Она касаются увеличения риска острой кардиотоксичности и роста сопутствующих осложнений от...

Закон о праве родителей находиться с детьми в реанимации внесен в ГосдумуРебенок в палате

Соответствующий законопроект внесен в палату на рассмотрение. Суть его заключается в нахождении одного из родителей в больничной палате бесплатно, в течении всего срока лечения...


Jaber и соавт. [210], Hughes-Jones и Gardner [201], используя поли- и моно-клональные анти-К-антитела, меченные радиоактивным йодом-125, подсчита­ли количество К-антигенных участков, приходящихся на 1 эритроцит. В зависи­мости от использованных реагентов число антигенных участков варьировало. Необработанные реагенты выявляли 2,5-3,5 тыс. копий К-антигена на эритроцитах К+к+ и 4-6,2 тыс. копий - на эритроцитах К+к-. Специфические Fab-фрагменты, выделенные из 3 моноклональных анти-К-антител, выявляли 4—8 тыс. антиген­ных участков, а Fab-фрагменты из 4 моноклональных антител - до 18 тыс. анти­генных участков на одном эритроците [303]*;От 4 до 18 тыс. К-антагенных участ­ков на одну клетку обнаружили Merry и соавт. [281]. Авторы также использова­ли Fab-фрагменты моноклональных анти-К-антител, которые, очевидно, были на­правлены к разным эпитопам К-гликопротеина и в совокупности выявляли боль­шее число антигенных участков, чем нативные поли- и моноклональные реагенты.

е исключено также, что Fab-фрагменты, как более мелкие структурные единицы по сравнению с цельной молекулой анти-К-иммуноглобулина, легче проникают к труднодоступным антигенным участкам и таким образом выявляют большее их ко­личество.

Таким образом, максимальное количество К-антигенных участков составляет 18 тыс. на 1 эритроцит. Для сравнения: максимальное количество hr1 (с)-антигенных участков системы резус составляет 85 тыс., rhf (С)-антигенных участков - 56 тыс., Rho (О)-антигенных участков - 31 тыс., rh" (Е)-антигенных участков - 25 тыс. на эри­троцит. По иммуногенности указанные антигены располагаются в последовательно­сти: D>K>c>E>C, которая свидетельствует о том, что между количеством анти­генных участков на клетке и их иммуногенной активностью нет строгой корреляции.

Количество антигенов Kell (число копий на 1 клетке) может, по-видимому, зависеть от того, в какой позиции (цис или транс) наследуются гены KEL, а так­же от других причин общего характера, влияющих на синтез Kell-полипептида. В одной из ранних работ Allen и Lewis [87] отметили, что антиген к ослаблен в фенотипе Кк Кр(а+), когда гены к и Кра находятся в положении цис. Антиген К слабо выражен у лиц с фенотипом К Ge(a-), что обусловлено подавлением ген­ного комплекса KEL генами Gerbich (эффект эпистазии).

Структура очищенного от углеводов Kell-полипептида исследована Lee и со­авт. [242, 243]. Этот белок является мембранным протеином II типа, имеет мол. массу 82,8 кДа и состоит из 732 аминокислот (рис. 5.2).

Аминокислотная последовательность Kell-протеина по Lee и соавт. [242,243 ]. Полужирным шрифтом выделен гидрофобный участок трансмембранного домена, полу¬жирным шрифтом с подчеркиванием - участки N-гликозилирования.

Аминокислотная последовательность Kell-протеина по Lee и соавт. [242,243 ]. Полужирным шрифтом выделен гидрофобный участок трансмембранного домена, полу­жирным шрифтом с подчеркиванием - участки N-гликозилирования.

Аминокислотная последовательность, обусловливающая специфичность Kell-антигенов, имеет большое сходство с аминокислотной последовательностью цин-ксвязывающих эндопептидаз [135, 234], найденных почти у всех животных [214]. Эти эндопептидазы, широко представленные в клетках и тканях, участвуют в пре­вращении, главным образом инактивации пептидных гормонов, таких как энцефа-лин, нейротензин, ангиотензин, окситоцин, брадикинин. В противоположность эн-допептидазам, присутствующим во многих клетках, Kell-протеин экспрессиру-ется только в эритроидных клетках [244], осуществляя, возможно, некое предста­вительство цинксвязьшающих эндопептидаз на эритроцитах. Не исключено, что указанное сходство обеспечивает определенные физиологические функции Kell-полипептида на мембране эритроцитов, связанные с транспортом гормонов.

Белок Kell практически повторяет аминокислотную последовательность эндотелин-конвертирующего энзима 1 и 2 (ЭКЭ-1 и ЭКЭ-2) и нейтральной эн-допептидазы-24-11 (CD 10). Эти белки образуют подсемейство мембранных металлопротеиназ М13. Структурная модель Kell-гликопротеина, представ­ленная выше (см. рис. 5.1), построена на основе структурной модели ЭКЭ-1.

Kell-полипептид имеет небольшой гидрофобный внутримембранный домен, высокогидрофильный Af-терминальный цитоплазматический домен, состоящий из 27-47 аминокислот, и большой С-терминальный экстрацеллюлярный домен, состоящий из 665 аминокислот.

Внеклеточная часть Kell-полипептида содержит 6 гликозилируемых участ­ков (позиции 94, 115, 191, 345, 627 и 724), хотя считается, что аспарагин 724 не пригоден для гликозилирования на участке 6, поскольку расположенный рядом пролин 725 ингибирует гликозилирование.

В экстрацеллюлярном домене Kell-полипептида имеется 15 цистеиновых остатков, предполагающих наличие 7 дисульфидных связей, что согласуется с имеющимися данными о высокой чувствительности антигенов Kell к тиоловым реагентам (Branch и соавт. [109]). В трансмембранной области имеется допол­нительный цистеиновый остаток.

Redman и Lee [322] считают, что цистеиновые остатки, располагающиеся вдоль молекулы, нужны для поддержания вторичной структуры Kell-протеина. Согласно концепции авторов, экстрацеллюлярная часть Kell-протеина состоит из двух доменов, соединенных между собой дисульфидными связями и отделя­ющихся один от другого длинным пептидным сегментом. Цистеиновый оста­ток в позиции 72 Kell-протеина обеспечивает сцепление с цистеиновым остат­ком в позиции 347 Кх-протеина [333], формируя таким образом Kell-иммуноген полной длины. В то же время антитела к Kell-протеину удалось получить имму­низацией кроликов коротким пептидом, состоящим из 30 аминокислот, который был синтезирован с помощью кДНК клеток костного мозга человека.

Redman и соавт. [320, 325] с помощью иммунопреципитации выделили из мем­браны меченных радиоактивным йодом эритроцитов гликопротеины с мол. мас­сой 93 кДа. Для этого авторы адсорбировали на эритроцитах антитела анти-К, анти-к, aHTH-Jsb и анти-К22, после чего оболочку эритроцитов растворяли трито­ном Х-100. Далее белковый субстрат и адсорбированные на нем антитела разделяли. Выделенные гликопротеины оказались гликопротеинами Kell, поскольку содержали Kell-антигены. Аналогичные гликопротеины выделили Wallas и соавт. [389], добавляя анти-К-антитела к растворенным тритоном Х-100 мембранам эритроцитов К+.

При электрофорезе редуцированного (сульфгидрированного) иммунопреципи-тата в полиакриламидном геле (ПААГ) Redman и соавт. наблюдали полосу, мечен­ную радиоактивным йодом, образованную субстратом с мол. массой 93 кДа. При электрофорезе в ПААГ нередуцированного иммунопреципитата авторы получили несколько полос, образованных субстратами с мол. массой 85-90 кДа, 115-130 кДа и еще более высокомолекулярным субстратом, который не проникал в 7,5 % ПААГ. Вырезав каждую из этих полос и повторно подвергнув электрофорезу субстрат в редуцирующих условиях, авторы показали, что каждая полоса содержала компо­нент 93 кДа. Результаты эксперимента указывали на то, что белок Kell связан дис-ульфидными связями с другим белком, имеющим мол. массу около 40 кДа. Когда Redman и соавт. [326] установили, что белок Кх имеет мол. массу 37 кДа, было вы­сказано мнение, что Кх ковалентно связан с бежом Kell, и это вскоре было под­тверждено исследованиями Parsons и соавт. [303], Jaber и соавт. [210], Khamlichi [224], которые испожзоваж для иммунопреципитации наряду с пожклональными человеческими антителами моноклонажные мышиные Kell-антитела.

Kell-гликопротеины отсутствовали в иммунопреципитатах из эритроцитов К при использовании различных пож- и моноклональных Kell-антител, в том числе антител, полученных иммунизацией мышей и кроликов очищенным Kell-гжкопротеином [211,320].

Kell-антитела слабо реагировали с изолированным Kell-гликопротеином в иммуноблоттинге, хотя мышиные и кроличьи моноклональные антитела, полу­ченные иммунизацией животных Kell-гликопротеином, выявляж гликопротеин с мол. массой 93 кДа [211,310].

Далее было показано, что все Kell-антигены, за исключением К24, распола­гаются на Kell-гликопротеине [210,213,215,269,307, 310].

Другой из выделенных гликопротеинов был охарактеризован как Кх-протеин. Последний тесно связан в мембране с Kell-гликопротеином и преципитируется вместе с ним в виде гетерожмера [224]. Оба белка соединены дисульфидными связями через цистеин 72, расположенный на Kell-гликопротеине и ожовременно занимающий позицию 347 на Кх-протеине [111,333] (см. рис. 5.1). вМагеп и Redman [268], Redman и соавт. [323] предположили, что Kell-антигены размещаются на гликопротеине с N-гликанами, поскольку обработка Kell-гликопротеина N-гликаназой редуцировала Kell-гликопротеин до 79 кДа, отщепляя от него цепь с мол. массой около 15 кДа. В то же время О-гликаназа практически не редуцировала Kell-гликопротеин.

В иммуноблотгинге К-активный гликопротеин мигрировал быстрее, чем k-активные гликопротеиновые молекулы. Считается, что первый субстрат менее гликозилирован, чем второй. Этим различием в гликозилировании объясняют более сильную иммуногенность К по сравнению с другими антигенами системы Kell [141].

Carbonnet и соавт. [120, 121] отметили, что Kell-гликопротеины фосфорили-руются, но не пальмитируются. Примерно 12 % массы Kell-гликопротеина со­ставляют углеводы - N-связанные олигосахариды, размещающиеся на экстра-целлюлярной части гликопротеина [210]. О-связанные олигосахариды практи­чески отсутствуют. Остальная часть Kell-гликопротеина представлена белком.

Трансформация К- в К+, К+ в К~

McGinniss и соавт. [278] описали пациента, эритроциты которого К-к+ вследствие сепсиса приобрели K-подобный антиген и стали определяться как К+к+. Перелитые ему эритроциты К- также становились К+. Сепсис был вы­зван грамположительными бактериями Streptococcus faecium. Авторы обнару­жили^ что эритроциты К-, инкубированные in vitro с лизатом Streptococcus fae­cium, преобразовывались в К+. Трансформация не происходила, если использо­вали взвесь неповрежденных бактерий.

При аутоиммунной гемолитической анемии, вызванной анти-К-аутоанти-телами, последние блокируют К-антигенные участки на эритроцитах, делая их недоступными для тестовых реактивов. Одновременно с продукцией аутоантител снижается экспрессия антигена К на поверхности клеток. Оба фактора в совокуп­ности приводят к тому, что пациента К+ типируют как К-. В период ремиссии, когда аутоантитела исчезают и экспрессия антигена К восстанавливается, пациен­та вновь типируют как К+ (см. Аутоантитела к антигенам Kell).

Химические свойства

Kell-гликопротеин хотя и является трансмембранной структурой, большая часть его в противоположность антигенам резус представляет внемембранное образование, далеко выступающее над поверхностью эритроцита. Считается, что он состоит из двух протяженных разветвленных цепей, соединенных меж­ду собой дисульфидными мостиками. Экстрацеллюлярная часть Kell-протеина ковалентно присоединена к Кх-протеину мембраны эритроцитов также дисуль-фидной связью [322, 341].

Kell-гликопротеин имеет 15 цистеиновых остатков в экстрацеллюлярном до­мене (см. рис. 5.1), и дисульфидные связи между цистеиновыми остатками уси­ливают несущий каркас полипептида. Разрушение дисульфидных связей суль-фгидрильными реагентами приводит к инактивации всех 24 Kell- и napa-Kell-антигенов, в частности антигены Kell разрушаются 6 % АЕТ (2-аминоэтилизо-тиоурониумбромидом) при рН 8 [109, 263, 289,341], 100-2000 мМ ДТТ (дитио-трейтолом) [109]; меркаптоэтанол менее эффективен.

Обработка эритроцитов глицин-НС1-ЭДТА разрушает антигены Kell и Kell-антитела IgG (см. Judd [216]).

Антигены Jsa и Jsb инактивируются при существенно более низкой концентрации дитиотрейтола - 2 мМ (Branch и соавт. [109]), поскольку, как полагают Lee и соавт. [240], 2 цистеиновых остатка, разделяемых ДТТ, расположены непосредственно в участке аминокислотных замен, обусловливающих специфичность Jsa и Jsb

Отщепляя гликопротеин Kell от экзофациальной части мембраны эритроци­тов, сульфгидрильные реагенты существенно увеличивают выраженность анти­гена Кх на поверхности эритроцитов, что может быть использовано для моде­лирования фенотипа Ко.

Подобно натуральным Ко*эритроцитам искусственные Ко-клетки, полу­ченные после обработки АЕТ, имеют выраженную экспрессию Кх-антигена (Advani [85], Branch и соавт. [111]). Искусственные К -эритроциты применяют для дифференцировки антител анти-Kell и анти-Кх. Для скрининга антиэритро-цитарных антител, включая анти-Kell, их не используют, так как АЕТ разруша­ет антигены системы Lutheran, Cartwright, Dombrock, LW (Landsteiner - Wiener), Knops, JMH (Jhon Milton Hagen) и другие.

Обработка эритроцитов протеолитическими ферментами по-разному сказы­вается на серологической активности антигенов Kell.

В| Ферменты растительного (папаин, фицин, бромелин) и животного происхождения (трипсин) не только не уменьшают выраженность антигенов Kell, но, напротив, существенно ее усиливают (Branch и соавт. [Ill], Schenkel-Brunner [341], СИ. Донсков и др. [26]).                                                                                     ^ ^

По нашим наблюдениям [26], обработанные 0,5-1 % раствором фицина эри­троциты К1+ непосредственно агглютинировались в солевой среде поликло-нальными сыворотками, содержащими неполные IgG анти-К 1-антитела, подоб­но тому, как энзимированные эритроциты Rh+ агглютинируются под действием неполных Rh-антител. В контрольных тестах (без обработки ферментом) непол­ные анти-К 1-антитела не агглютинировали эритроциты К1 +.

Обработка эритроцитов трипсином в меньшей степени усиливала реакцию Kell-антител по сравнению с обработкой эритроцитов папаином.

Daniels [59], Judson и Anstee [218] отметили, что сочетанное воздействие на эритроциты смеси трипсина и а-химотрипсина или последовательная обработка эритроцитов одним ферментом, а потом другим (порядок не имеет значения) де­лает клетки нереактивными к антителам системы Kell. К такому же инактивиру-ющему Kell-антигены эффекту приводит сочетанная обработка эритроцитов ди-тиотрейтолом и папаином, активированным цистеином (реагент ZZAP) [ПО, 341].

Обработка эритроцитов только одним химотрипсином или только одной прона-зой давала различные результаты [142]. Осталось неясным, связаны ж вариации усиления или ослабления активности Kell-антигенов со свойствами использован­ных антител или со способом и интенсивностью энзимирования эритроцитов.

Parsons и соавт. [303] отметили, что некоторые моноклональные реагенты к антигенам системы Kell продолжали реагировать с энзимированными эритро­цитами, утратившими способность реагировать с человеческими поликлональ-ными антителами. Не исключено, что отдельные МКА анти-Kell могут одновре­менно проявлять слабую анти-Кх-активность.

Подобно большинству других мембранных белков Kell-протеин гликозили-руется. Как показали Redman и соавт. [321], дегликозилирование с помощью N-гликозидазы уменьшает его мол. массу до 79-80 кДа. О-гликаназа дает сла­бый эффект. Эти результаты свидетельствуют о том, что углеводная составляю­щая Kell-гликопротеина представлена N-гликанами.

Некоторые варианты антигена К не являются парциальными, но, несо­мненно, имеют отношение к этой категории антигенов как переходные фор­мы от К-дефицитных фенотипов, лишенных многих эпитопов Kell, к нормаль­ным Kell-фенотипам и далее к Kell-фенотипам, включающим качественно но­вые Kell-антигены. Очевидно существуют гены KEL, кодирующие продукцию уменьшенного количества копий нормального антигена К. Они не относятся к вариантным, а скорее к К-дефицитным формам, поскольку антиген К количе­ственно, а не качественно отличается от нормального К.

Hawley и соавт. [194] при попытке подобрать совместимую кровь больному имеющему анти-К-антитела, выявили донора, эритроциты которого не агглюти­нировались сывороткой пациента, но адсорбировали анти-К-антитела, содержа­щиеся в его сыворотке. Исследование элюата подтвердило, что антитела имели специфичность анти-К. Эритроциты донора не давали видимой положительной реакции с другими сыворотками анти-К.

Kline и соавт. [226] описали ослабленную экспрессию антигена К, ассоции­рованную с нормальной экспрессией других антигенов Kell, у представителей 4 поколений одной семьи. Авторы выявили женщину, на эритроцитах которой антиген К был выражен очень слабо. Другие антигены (k, Kpb? Jsb и Кх) име­ли нормальный уровень активности. У матери упомянутой женщины, дочери и внука также обнаруживали слабый К. Эритроциты со слабо экспрессиро-ванным антигеном К адсорбировали анти-К-антитела из всех использованных анти-К-сывороток. Адсорбированные антитела присутствавали в элюатах.

Uchikawa и соавт. [374] обследовали 4 человек с фенотипом Kmod, у которых антиген К можно было выявить только с помощью метода адсорбции - элю-ции антител. Другие часто встречающиеся антигены Kell были слабо выраже­ны, k-антиген отсутствовал. Все 4 были гомозиготны по ££Х-мутации, коди­рующей Thr 193 Arg. Авторы указывают, что подобно замене Thr 193 Met, ха­рактеризующей специфичность К, замена Thr 193 Arg не сопровождалась N-гликозилированием в позиции Asn 191. Ослабление других К-антигенов яви­лось результатом уменьшения количества Kell-гликопротеина.

Слабую экспрессию антигена К наблюдали Marsh и соавт. [271] у лиц с феноти­пом McLeod, а также Muller и соавт. [292] - у лиц, не имеющих антигена Gerbich, Ge:-2,-3. Экспрессия антигенов к и Кра у лиц Ge:-2,-3 также была снижена.

По оценке Jaber и соавт. [211], эритроциты K+k+ Ge:-2,-3 несут почти в 2 раза меньше участков антигена К, чем эритроциты K+k+ Ge:2,3.

Слабая экспрессия антигена к обусловлена мутацией С 1388 Т в экзоне 11 гена KEL, которая кодирует замену Ala 423 Val [231].

Описано транзиторное ослабление антигена К и других Kell-антигенов у не­которых больных (чаще инфекционных), у которых в период ослабления Kell-антигенов появлялись свободно циркулирующие и фиксированные на эритро­цитах аутоиммунные анти-К-антитела, выявляемые соответственно с помощью непрямой и прямой антиглобулиновой пробы [101, 192, 208, 308, 344, 380, 397] (см. Лутоантытела к Kell-антигенам).

Описано несколько пробандов с парциальной формой антигена К [276,348].

Приведенные McDowell и соавт. [276] наблюдения убеждает в том, что лица К+, так же как К-, могут вырабатывать анти-К-антитела, реагирующие со всеми образцами эритроцитов К+, за исключением собственных. Другие случаи [348] свидетельствуют о том, что большинство сывороток анти-К содержат парциаль­ные анти-К-антитела, не реагирующие с некоторыми эпитопами антигена К.

Skradski и соавт. [348] описали белого мужчину, эритроциты которого К+к+ реагировали с 8 из 72 использованных анти-К-реагентов. С помощью адсорбции - элюции авторы показали, что эритроциты обследуемого адсорби­ровали анти-К-антитела, с которыми давали видимую агглютинацию и кото­рые затем обнаруживали в элюате. Анти-К-реагенты, с которыми не было ви­димой реакции, на эритроцитах не адсорбировались и в элюатах отсутствова­ли. Антигены k, Kpb, Jsb, Ku, Kll, К12, К13, К14, К18, К19 и К22 на эритро­цитах обследуемого были выражены нормально, антигены Кра, Крс, Jsa, UP, Wka и К23 отсутствовали. Три сестры обследуемого имели эритроциты К+, которые также несли на себе вариантную форму К. Парциальный антиген К, обнаруженный в этой семье, был слабее, чем на контрольных эритроцитах К+ неродственных доноров.

Из 8 образцов анти-К-антител, которые реагировали с эритроцитами об­следуемого, 3 были поликлональные IgG, 4 - моноклональные IgM. Авторы точно не указали, что послужило иммуногенным стимулом для образова­ния реагирующих антител. У 6 лиц они, по-видимому, имели аллоиммунное происхождение, поскольку были выявлены с помощью непрямой пробы Кумбса. У одной женщины титр анти-К-антител значительно повысился при беременности плодом К-.

При исследовании эритроцитов более 50 ООО человек одной из 8 реагирую­щих сывороток не было обнаружено ни одного образца, который подобно эри­троцитам пробанда и трех его сестер реагировал с упомянутой сывороткой, но при этом не реагировал с другими сыворотками анти-К.

McDowell и соавт. [276] описали женщину с фенотипом К+к+, у которой имелись антитела, охарактеризованные авторами как К-подобные. Антитела не агглютинировали ни собственные эритроциты, ни эритроциты К+к+ ее до­чери, но реагировали с эритроцитами К+к+ ее сына и мужа. Элюат, снятый с эритроцитов сына после адсорбции ими сыворотки матери, содержал анти-К-антитела, которые по-прежнему не реагировали с эритроцитами самой женщи­ны и эритроцитами дочери. Выраженность антигена К на эритроцитах матери и дочери была существенно слабее, чем сына и мужа. Каких-либо аномалий дру­гих антигенов системы Kell на эритроцитах женщины, ее мужа и детей указан­ные авторы не отметили.

Исходя из представленных данных, можно сделать 2 основных вывода.

Во-первых, парциальные антигены К, не выявляющиеся обычными сыво­ротками анти-К, крайне редки. Напротив, парциальные анти-К-антитела встре­чаются часто. Исходя из данных Skradski и соавт. [348], 88 % сывороток анти-К (64 из 72) не содержат фракции антител, направленных к определенным эпито-пам К-антигена. В то же время практически все поли- и моноклональные анти-К-реагенты содержат антитела к иммуногенному, трансфузионно опасному эпи-топу К, который содержится, за редчайшим исключением, во всех эритроцитах К+, и выявляют его даже при слабой экспрессии.

Во-вторых, парциальные антигены К обусловлены редким вариантным ал­лелем KEL, который, будучи в гомозиготной форме, кодирует продукцию неко­торых, но не всех эпитопов нормального антигена К. Парциальные антигены К отличаются от нормального К не только качественно, но и количественно.

И последнее, носителей парциальных К-антигенов следует рассматривать как К-отрицательных реципиентов, но как К-положительных доноров.

К15

На эритроцитах К о Обнаружен Другой антиген, Кх (см. система Кх), который присутствует и на нормальных эритроцитах, но скрыт под более разветвленной структурой Келл-гликопротеина. Отсутствие антигенов Kell и одновременное присутствие антигена Кх послужили основанием причислить Кх к системе Келл, и он получил обозначение К15. Однако постепенно выяснилось, что Келли-антигены и Кх-антиген, хотя структурно и связаны, но относятся к разным антигенным системам. Антиген Кх находится на иных мембранных компонентах эритроцитов, чем гликопротеин, который несет на себе антигены системы Келл. Продукция Кх кодируется локусом ХК, расположенным на Х-хромосоме, в то время как локус KEL находится на хромосоме 7. В связи с этим обозначение К15 было упразднено, антиген Кх получил статус системы, КОТОРОЙ присвоен
номер ISBT 019 [141].

В 1976 г. Марш [цит. по 204] описал K-подобный антиген, получивший номер К16, который выявляли на эритроцитах 99,8% людей. Ранее Марш и Аллен отметили, что K-подобный антиген присутствует на эритроцитах к + и отсутствует на эритроцитах к-. Различие между антигенами к и К16 заключалось лишь в том, что эритроциты фенотипа Маклеод имели слабовыраженный к-антиген, K + W , но при этом были К16-. Осталось невыясненным: была ли разница количественной или качественной. Других сообщений об исследовании антигена К16 не было, и он продолжает оставаться в номенклатуре ISBT.

К18

Антиген К18 - единственный из всех антигенов, наследственную передачу которого не удалось проследить, поскольку все тестированные люди являлись носителем этого антигена, т. е. были К18 +. Исключение составили 2 человека (женщина и мужчина), эритроциты которых не содержали антигена К18, а в сыворотке их крови имелись анти-К18-антитела [98, 307]. Среди 54 450 доноров не найдено ни одного К18- (Barrasso и соавт. [97]).

Первый образец сыворотки анти-К18 нашли Barrasso и соавт. [98] в 1975 г. у женщины, имевшей 8 беременностей и 1 трансфузию крови. Сыворотка содержала смесь антител анти-К1 и антител IgG, получивших наименование анти-К18. Последние реагировали со всеми исследованными эритроцитами (2000 образцов К-), включая редкие фенотипы: К12-, К13- и др, но не реагировали с эритроцитами К. о и эритроцитами самой женщины. Авторы отметили, что антиген К18 сильнее экспрессирован на эритроцитах Кр (Ь +), чем Кр (Ь-), а также сильнее выражен на эритроцитах К13 +, чем К13-. Экспрессия антигена К18 на эритроцитах фенотипа Маклеод была самой слабой.

В 1983 г., через 8 лет после своей находки, Barrasso и соавт. [97] опубликовали дополнительные данные о К18-антителах и их вероятном клиническом значении. Антитела анти-К18 представляли собой комбинацию иммуноглобулинов в основном субкласса IgG4 и небольшого количества IgGl и, как предполагалось, не должны были вызывать сильного разрушения эритроцитов в естественных условиях. Однако пробная инъекция эритроцитов К1-К18 +, меченных Сг 51 , показала, что более 60% перелитых клеток разрушались в кровотоке пациентки в течение первых 24 ч после введения. Проба с фагоцитозом в моноцитарном монослое также свидетельствовала о несовместимости эритроцитов К18 + и возможности их быстрого выведения из циркуляции. Полученные результаты побудили лечащих врачей отказаться от трансфузии эритроцитов и изменить тактику лечения.

Второй образец К18-антител обнаружили Pehta и соавт. [307] в 1990 г. у мужчины 78 лет, получившего трансфузию. В его сыворотке, так же как у описанной выше женщины, присутствовали антитела анти-К1 и анти-К18. Авторы указали на интересную особенность: эритроциты пациента не реагировали с сыворотками aHTH-Yt и aHTH-Yt б , т. е. были Yt (погло-). По этому поводу Issitt, Anstee [204] дали комментарий, что это второй из известных случаев Картрайт отрицательного фенотипа. Первый был обусловлен транзи-торным подавлением экспрессии антигенов системы Картрайт. Пробанд Yt (погло-), описанный Pehta и соавт. [307], представлял собой, по-видимому, такой же феномен.

В методе проточной цитометрии эритроциты К18 + сына пациента реагировали слабее, чем эритроциты К18 + других лиц, что, как считают авторы, подтверждает принадлежность этого Напа-Келл-антигена к системе Келл. Отсутствие антигена К18 у отца отразилось в силу эффекта дозы на слабой выраженности антигена К18 у сына.

Ли и соавт. [231] показали, что, несмотря на серологическую идентичность обоих пробандов, фенотип К18- сочетался с различными нуклеогидными заменами в одном и том же кодоне экзона 4: в первом случае - С 508 Т, приводящая к замещению Arg 130 Thr; во втором - G 509 А, приводящая к замещению Arg 130 Джин.

К19

Первые анти-К19-антитела обнаружили Сабо и соавт. [337] в 1997 г. в сыворотке белой женщины сорока лет, имевшей 7 беременностей, одна из которых закончилась рождением живого ребенка, 6 - самопроизвольными выкидышами при сроках от 2 до 5 мес. Сыворотка женщины содержала, помимо К19-антител, слабые К1-антитела и реагировала со всеми эритроцитами, имевшими обычный фенотип по антигенам системы Келл, а также с эритроцитами, не содержавшими ряда общих антигенов Kell и напа-Келли. Сыворотка не реагировала с эритроцитами гомозигот К , собственными эритроцитами и эритроцитами трех ее сибсов.

Экспрессия к, Kp б , Js б и других часто встречающихся антигенов системы Келл и напа-Келл на эритроцитах К19- была нормальной в отличие от фенотипа К13-, для которого характерна сниженная экспрессия указанных антигенов.

Антиген К19, как и антиген К18, был сильнее экспрессирован на эритроцитах Кр (Ь +), чем Кр (Ь-), а также сильнее выражен на эритроцитах К13 +, чем К13-. На эритроцитах фенотипа Маклеод экспрессия антигена К19 была наименьшей.

Среди 7294 обследованных доноров Сабо и соавт, [337] не нашли ни одного К19-.

Второй случай К19-антител в том же 1979 г. описали Марш и соавт. [260] у 47-летнего мужчины (негра), которому произвели несколько трансфузий крови в связи с кровотечением. Авторы наблюдали отсроченную трансфузионную реакцию за счет анти-К 19-антител, которая проявилась в том, что все перелитые эритроциты К19 + (4 дозы) через 10 дней после переливания исчезли из кровяного русла реципиента. Убыль эритроцитов К19 + в кровотоке реципиента обусловливалась также самим кровотечением. Попытка авторов найти совместимого донора не привела к успеху: из 3463 обследованных не удалось найти человека К19-.

В итоге из 10 757 человек, в основном представителей белой расы, не оказалось ни одного К19-.

Ли [231] при исследовании молекулярной основы фенотипа К19- нашел, что оба пробанда К19- имели транзицию G 1595 А в экзоне 13, кодирующую Arg 492 Джин.

К22

Антиген К22, часто встречающийся (общий), обнаружен в 1982 г. Бар Шани и соавт. [96]. Лица, не содержащие этого антигена (К22-), найдены только среди евреев персидского происхождения. Первую сыворотку анти-К22 Бар Шани и соавт. получили от женщины израильтянки, когда она сдавала кровь в качестве донора. Женщина никогда не имела трансфузий, ни у одного из ее 4 овей, имевших фенотип К22 +, признаков ГБН при рождении не зарегистрировано. Антитела реагировали со всеми образцами эритроцитов общих и редких Келл-фенотипов, в том числе с одним образцом эритроцитов Маклеод. Со вторым образцом эритроцитов Маклеод сыворотка визуально не реагировала, но, как потом выяснилось, анти-К22-антитела адсорбировались на этих эритроцитах. Антитела не реагировали с эритроцитами гомозигот К , собственными клетками женщины и эритроцитами одной из трех ее сестер. При обследовании более 500 израильских доноров (в основном представителей смешанных рас) лиц К22-, кроме носительницы К22-антител и ее сестры, обнаружено не было.

Второй образец К22-антител обнаружили Мэнни и соавт. в 1985 г. [256]. Как и в первом случае, антитела образовались у женщины, еврейки из Ирана, живущей в Израиле. Анти-К22-антитела были выявлены во время ее 4-й беременности. У ребенка после рождения отмечали небольшую желтуху, прямая проба Кумбса была положительная.

Уместно подчеркнуть, что обследованная была D- К-. После 1-й беременности она получила трансфузию крови, четверо ее детей имели группу крови D +, один из них был К +, тем не менее образовавшиеся антитела имели только анти-К22-специфичность. Многие сыворотки, содержащие аллоиммунные антитела к часто встречающимся антигенам Келли и напа-Келл, также содержат анти-К и другие антитела. Описанный Мэнни и соавт. случай является исключением.

Четвертая и две последующие беременности этой женщины были описаны в более поздней публикации Левин и соавт. [247]. Авторы нашли, что 4-я и 5-я беременность сопровождалась анти-К22-антителами IgGl. У обоих детей при рождении прямая проба Кумбса положительная. Купирование легкой степени ГБН в обоих случаях ограничилось фототерапией. При рождении 6-го ребенка также наблюдали положительную прямую пробу Кумбса с эритроцитами пуповинной крови. Антитела имели изотип IgGl и IgG3. Ребенок был тяжело болен, и для его лечения произведено обменное переливание отмытых эритроцитов матери.

Исследование семьи 2-го пробанда (родителей и 5 детей, включая обследуемую) позволило Мэнни и соавт. придти к заключению, что антиген К22 связан с системой Келли. От родителей, имеющих фенотип К + к + К22 +, ген К22 передавался вместе с К 9 а К22- (молчащий ген) - вместе с к. Иными словами, пробанд и 2 ее сибса были К-к + К22- а другие 2 сибса - К + к + К22 +. Как указывают авторы, родители обследованной были кровными родственниками. Тестирование 217 не связанных родством людей из этнической группы евреев (выходцев из Ирана) не выявило лиц К22-.

Антиген К22 нормально экспрессирован на эритроцитах Кр (а + Ь-) и К13- в отличие от других антигенов (к, Kp б , Js б , Ku, К12, К18 и К19), которые на эритроцитах Кр (а + Ь ~) и особенно К13- выражены слабо.

Антиген К22 находится на гликопротеине с мол. массой 93 кДа. Три не связанных родством лица К22- имели нуклеотидную замену С 1085 Т, кодируюiHjfK> Ala322Val (Lee [231]).

1987 г. Марш и соавт. [270] нашли редко встречающийся антиген, полу-ивший обозначение К23. Сыворотка, выявляющая этот антиген, принадлежала женщине, итальянке по происхождению, имевшей 4 беременности. У ее 3-го ребенка при рождении прямая проба Кумбса резко положительная, однако симптомы ГБН отсутствовали. Сыворотка крови женщины и антитела, элюирован-ные с эритроцитов ребенка, реагировали с эритроцитами двух ее детей, эритроцитами мужа и свекрови. В то же время сыворотка не реагировала со стандартными эритроцитами, содержавшими в различных комбинациях часто и редко встречающиеся антигены Келл, а также не реагировала ни с одним из 2116 образцов эритроцитов обычных доноров.

Эритроциты мужа утрачивали серологическую активность после обработки АЕТ или Zzap. Гликопротеин, выделенный из них посредством иммунопреци-питации антителами обследуемой, имел мол. массу 93 кДа, и, как потом было установлено, реагировал с кроличьими антителами к гликопротеину Келли. Антиген К23 не имеет антитетичного партнера.

Два члена семьи, гетерозиготные по антигену К23 (К23 + / К23-), имели замещение А 1265 G, кодирующее Gin 382 Arg и создающее участок рестрикции #cwI (Lee [231]). 

VLAN (К25)

Первый и единственный образец aHTH-VLAN-антител с изотипом IgGl + IgG2 обнаружили Jongerius и соавт. [215] при проведении пробы на совместимость. Сыворотка крови больного 60 лет (выходца из Голландии), содержащая эти антитела, реагировала в непрямой антиглобулиновой пробе только с 4 образцами эритроцитов: эритроцитами донора (датчанина по происхождению), эритроцитами двух его сестер и племянницы. Других лиц VLAN + авторы не нашли, обследовав 1068 доноров.

Попытка обнаружения антигена, антитетичного антигену VLAN, к успеху не привела: aHTH-VLAN-антитела не реагировали ни с одним из образцов стандартных эритроцитов, лишенных того или другого часто и редко встречающегося антигена.

Обработка эритроцитов АЕТ вызывала инактивацию антигена VLAN.

Для того чтобы установить локализацию антигена VLAN, авторы использовали метод конкурентного связывания антител (MAIEA): сравнивали блокирующий эффект VLAN-антител по отношению к 6 моноклональным антителам, направленным против различных эпитопов гликопротеина Келли. Эксперименты показали, что антиген VLAN располагается на гликопротеине Келл с мол. массой 93 кДа примерно в том же участке, где Расположены антигены Кр а , Кр ь и Кр с . Высказано предположение что ген, кодирующий продукцию VLAN, является 4-м аллелем субпокуса Кр а Кр ь Кр с .

Полученные Jongerius и соавт. данные позволили причислить VLAN к редким антигенам системы Kell. Ему был присвоен номер К25.

Ли и соавт. [235] нашли, что антиген VLAN обусловлен мутацией G 863 А, приводящей к аминокислотной замене Arg 248 Джин.

ТУ (K26)

Антиген ТУ, имеющий частоту встречаемости более 99,99%, обнаружен и изучен Джонс и соавт. [213].

Первый образец ТУ-антител найден в сыворотке крови мужчины 47 лет (коренного американца), обследованного в связи с операцией на бедре. Пациент до обследования трансфузий крови не получал.

Сыворотка анти-ТУ реагировала с эритроцитами всех общих фенотипов системы Келл, слабо реагировала с эритроцитами фенотипа Маклеод, Келл Kp (+ b-) и К13-, имеющими подавленную экспрессию антигенов Kell, но не реагировала с эритроцитами гомозигот К и нормальными эритроцитами , обработанными дитиотрейтолом, разрушающим антигены Келл.

С помощью метода MAIEA (метод конкурентного связывания антител) авторы установили, что антиген ТУ локализован на гликопротеине Келли.

Второй образец ТУ-антител (обозначенный сначала анти-УПА) были найден в сыворотке крови женщины (испанки по происхождению), госпитализированной на предмет удаления придатков. Сыворотка УПА не реагировала с эритроцитами ТУ, а сыворотка ТУ не реагировала с эритроцитами УПА.

Пациентка, как и в случае упомянутом выше, не получала трансфузий, но имела 2 беременности. Ее сыворотка реагировала с эритроцитами сына и 3 сибсов.

Несмотря на то что наследование антигена ТУ (УПА) не было прослежено в семьях в виде сцепленного комплекса с антигенами Келл, принадлежность его к этой системе была очевидна, и ему был присвоен номер К26.

Эксперименты с моноцитарным монослоем позволили Джонс и соавт. [213] заключить, что анти-ТОи-антитела не имеют клинического значения.

У 3 ТУ-отрицательных лиц из 2 семей наблюдали одинаковую транзицию G 1337 Авэкзоне 11, кодирующую Arg 406 Gin

RAZ (К27)

В 1994 г. Дэниелс и соавт. [148] обнаружили еще 1 общий антиген эритроцитов -RAZ, который получил номер К27. AHTH-RAZ-антитела присутствовали в сыворотке женщины кенийско-индийского происхождения, родители которой были двоюродным братом и сестрой. Тридцатью годами ранее женщина перенесла операцию на сердце, и в связи с этим ей могли перелить кровь. Срок выживания эритроцитов RAZ +, меченных Сг 51 , в кровяном русле пациентки был существенно сокращен: через 3 часа после инъекции меченых клеток половина их разрушилась, а через сутки после инъекции они в кровотоке отсутствовали. Для оказания трансфузионной помощи у больной было взято и при операции перелито 5 доз аутокрови.

Других Раз-отрицательных лиц, кроме указанной женщины - ^ носительницы RAZ-антител, не обнаружено. Таким образом, все люди являются RAZ-положительными.

Несмотря на то что антиген RAZ присутствовал на эритроцитах всех исследованных, ряд признаков позволил авторам причислить его к системе Келла.

  1. Антиген RAZ отсутствовал на эритроцитах К, а также на эритроцитах, обработанных АЕТ, т. е. нормальных эритроцитах, Которые с помощью АЕТ искусственно превращены в К о .
  2. На эритроцитах лиц с фенотипами Маклеод и Келл мод , для которых характерна низкая экспрессия антигенов Kell, антиген RAZ выражен так же слабо.
  3. Обработка эритроцитов моноклональными антителами против эпитопов Келл блокировала связывание RAZ-антител, равно как обработка эритроцитов RAZ-антителами блокировала связывание моноклональных эпитопспецифиче-ских Келл-антител. Указанное обстоятельство свидетельствовало о том, что антиген RAZ располагается на том же гликопротеине, что и Келли-антигены.

Ли и соавт. [235] показали, что описанная Дэниелс и соавт. Раз-отрицательная женщина была гомозиготна по замещению G 865 А, которое кодировало замену Glu 249 Lys.

 

Новости медицины

Рассматривая статины?

Много миллионов человек в мире принимают статины, но исследования показывают, что только 55% из тех, кому рекомендуется принимать статины, принимают их. Это большая проблема, потому что исследования также показывают, что те из группы...

Высокое АД во время беременности может повлиять на сердце женщины в долгосрочной перспективе

Связанное с беременностью высокое кровяное давление может привести к долгосрочным сердечным рискам, показывают новые исследования.

Отмена приема опиоидов по рецепту имеет болезненные последствия для пациентов

Кэролин Консия, столкнулась с более серьезными последствиями репрессий против назначения опиоидов, когда узнала, почему сын ее подруги покончил с собой в 2017 году.

Психическое заболевание не является причиной массовых расстрелов

Новое исследование показывает, что психические заболевания не являются фактором большинства массовых расстрелов или других видов массовых убийств.




Тесты для врачей

Наши партнеры