Категория: Система Kell

Опубликовано: 20 апреля 2014

Структура очищенного от углеводов Kell-полипептида исследована Lee и со­авт. [242, 243]. Этот белок является мембранным протеином II типа, имеет мол. массу 82,8 кДа и состоит из 732 аминокислот (рис. 5.2).

Аминокислотная последовательность Kell-протеина по Lee и соавт. [242,243 ]. Полужирным шрифтом выделен гидрофобный участок трансмембранного домена, полу­жирным шрифтом с подчеркиванием - участки N-гликозилирования.

Kell-полипептид имеет небольшой гидрофобный внутримембранный домен, высокогидрофильный Af-терминальный цитоплазматический домен, состоящий из 27-47 аминокислот, и большой С-терминальный экстрацеллюлярный домен, состоящий из 665 аминокислот.

Внеклеточная часть Kell-полипептида содержит 6 гликозилируемых участ­ков (позиции 94, 115, 191, 345, 627 и 724), хотя считается, что аспарагин 724 не пригоден для гликозилирования на участке 6, поскольку расположенный рядом пролин 725 ингибирует гликозилирование.

В экстрацеллюлярном домене Kell-полипептида имеется 15 цистеиновых остатков, предполагающих наличие 7 дисульфидных связей, что согласуется с имеющимися данными о высокой чувствительности антигенов Kell к тиоловым реагентам (Branch и соавт. [109]). В трансмембранной области имеется допол­нительный цистеиновый остаток.

Redman и Lee [322] считают, что цистеиновые остатки, располагающиеся вдоль молекулы, нужны для поддержания вторичной структуры Kell-протеина. Согласно концепции авторов, экстрацеллюлярная часть Kell-протеина состоит из двух доменов, соединенных между собой дисульфидными связями и отделя­ющихся один от другого длинным пептидным сегментом. Цистеиновый оста­ток в позиции 72 Kell-протеина обеспечивает сцепление с цистеиновым остат­ком в позиции 347 Кх-протеина [333], формируя таким образом Kell-иммуноген полной длины. В то же время антитела к Kell-протеину удалось получить имму­низацией кроликов коротким пептидом, состоящим из 30 аминокислот, который был синтезирован с помощью кДНК клеток костного мозга человека.

Категория: Система Kell

Опубликовано: 20 апреля 2014

Redman и соавт. [320, 325] с помощью иммунопреципитации выделили из мем­браны меченных радиоактивным йодом эритроцитов гликопротеины с мол. мас­сой 93 кДа. Для этого авторы адсорбировали на эритроцитах антитела анти-К, анти-к, aHTH-Js^b и анти-К22, после чего оболочку эритроцитов растворяли трито­ном Х-100. Далее белковый субстрат и адсорбированные на нем антитела разделяли. Выделенные гликопротеины оказались гликопротеинами Kell, поскольку содержали Kell-антигены. Аналогичные гликопротеины выделили Wallas и соавт. [389], добавляя анти-К-антитела к растворенным тритоном Х-100 мембранам эритроцитов К+.

При электрофорезе редуцированного (сульфгидрированного) иммунопреципи-тата в полиакриламидном геле (ПААГ) Redman и соавт. наблюдали полосу, мечен­ную радиоактивным йодом, образованную субстратом с мол. массой 93 кДа. При электрофорезе в ПААГ нередуцированного иммунопреципитата авторы получили несколько полос, образованных субстратами с мол. массой 85-90 кДа, 115-130 кДа и еще более высокомолекулярным субстратом, который не проникал в 7,5 % ПААГ. Вырезав каждую из этих полос и повторно подвергнув электрофорезу субстрат в редуцирующих условиях, авторы показали, что каждая полоса содержала компо­нент 93 кДа. Результаты эксперимента указывали на то, что белок Kell связан дис-ульфидными связями с другим белком, имеющим мол. массу около 40 кДа. Когда Redman и соавт. [326] установили, что белок Кх имеет мол. массу 37 кДа, было вы­сказано мнение, что Кх ковалентно связан с бежом Kell, и это вскоре было под­тверждено исследованиями Parsons и соавт. [303], Jaber и соавт. [210], Khamlichi [224], которые испожзоваж для иммунопреципитации наряду с пожклональными человеческими антителами моноклонажные мышиные Kell-антитела.

Kell-гликопротеины отсутствовали в иммунопреципитатах из эритроцитов К при использовании различных пож- и моноклональных Kell-антител, в том числе антител, полученных иммунизацией мышей и кроликов очищенным Kell-гжкопротеином [211,320].

Kell-антитела слабо реагировали с изолированным Kell-гликопротеином в иммуноблоттинге, хотя мышиные и кроличьи моноклональные антитела, полу­ченные иммунизацией животных Kell-гликопротеином, выявляж гликопротеин с мол. массой 93 кДа [211,310].

Далее было показано, что все Kell-антигены, за исключением К24, распола­гаются на Kell-гликопротеине [210,213,215,269,307, 310].

Другой из выделенных гликопротеинов был охарактеризован как Кх-протеин. Последний тесно связан в мембране с Kell-гликопротеином и преципитируется вместе с ним в виде гетерожмера [224]. Оба белка соединены дисульфидными связями через цистеин 72, расположенный на Kell-гликопротеине и ожовременно занимающий позицию 347 на Кх-протеине [111,333] (см. рис. 5.1). вМагеп и Redman [268], Redman и соавт. [323] предположили, что Kell-антигены размещаются на гликопротеине с N-гликанами, поскольку обработка Kell-гликопротеина N-гликаназой редуцировала Kell-гликопротеин до 79 кДа, отщепляя от него цепь с мол. массой около 15 кДа. В то же время О-гликаназа практически не редуцировала Kell-гликопротеин.

В иммуноблотгинге К-активный гликопротеин мигрировал быстрее, чем k-активные гликопротеиновые молекулы. Считается, что первый субстрат менее гликозилирован, чем второй. Этим различием в гликозилировании объясняют более сильную иммуногенность К по сравнению с другими антигенами системы Kell [141].

Carbonnet и соавт. [120, 121] отметили, что Kell-гликопротеины фосфорили-руются, но не пальмитируются. Примерно 12 % массы Kell-гликопротеина со­ставляют углеводы - N-связанные олигосахариды, размещающиеся на экстра-целлюлярной части гликопротеина [210]. О-связанные олигосахариды практи­чески отсутствуют. Остальная часть Kell-гликопротеина представлена белком.

Категория: Система Kell

Опубликовано: 20 апреля 2014

Подобно натуральным К_о*эритроцитам искусственные К_о-клетки, полу­ченные после обработки АЕТ, имеют выраженную экспрессию Кх-антигена (Advani [85], Branch и соавт. [111]). Искусственные К -эритроциты применяют для дифференцировки антител анти-Kell и анти-Кх. Для скрининга антиэритро-цитарных антител, включая анти-Kell, их не используют, так как АЕТ разруша­ет антигены системы Lutheran, Cartwright, Dombrock, LW (Landsteiner - Wiener), Knops, JMH (Jhon Milton Hagen) и другие.

Обработка эритроцитов протеолитическими ферментами по-разному сказы­вается на серологической активности антигенов Kell.

В| Ферменты растительного (папаин, фицин, бромелин) и животного происхождения (трипсин) не только не уменьшают выраженность антигенов Kell, но, напротив, существенно ее усиливают (Branch и соавт. [Ill], Schenkel-Brunner [341], СИ. Донсков и др. [26]).                                                                                     ^ ^

По нашим наблюдениям [26], обработанные 0,5-1 % раствором фицина эри­троциты К1+ непосредственно агглютинировались в солевой среде поликло-нальными сыворотками, содержащими неполные IgG анти-К 1-антитела, подоб­но тому, как энзимированные эритроциты Rh+ агглютинируются под действием неполных Rh-антител. В контрольных тестах (без обработки ферментом) непол­ные анти-К 1-антитела не агглютинировали эритроциты К1 +.

Обработка эритроцитов трипсином в меньшей степени усиливала реакцию Kell-антител по сравнению с обработкой эритроцитов папаином.

Daniels [59], Judson и Anstee [218] отметили, что сочетанное воздействие на эритроциты смеси трипсина и а-химотрипсина или последовательная обработка эритроцитов одним ферментом, а потом другим (порядок не имеет значения) де­лает клетки нереактивными к антителам системы Kell. К такому же инактивиру-ющему Kell-антигены эффекту приводит сочетанная обработка эритроцитов ди-тиотрейтолом и папаином, активированным цистеином (реагент ZZAP) [ПО, 341].

Обработка эритроцитов только одним химотрипсином или только одной прона-зой давала различные результаты [142]. Осталось неясным, связаны ж вариации усиления или ослабления активности Kell-антигенов со свойствами использован­ных антител или со способом и интенсивностью энзимирования эритроцитов.

Parsons и соавт. [303] отметили, что некоторые моноклональные реагенты к антигенам системы Kell продолжали реагировать с энзимированными эритро­цитами, утратившими способность реагировать с человеческими поликлональ-ными антителами. Не исключено, что отдельные МКА анти-Kell могут одновре­менно проявлять слабую анти-Кх-активность.

Подобно большинству других мембранных белков Kell-протеин гликозили-руется. Как показали Redman и соавт. [321], дегликозилирование с помощью N-гликозидазы уменьшает его мол. массу до 79-80 кДа. О-гликаназа дает сла­бый эффект. Эти результаты свидетельствуют о том, что углеводная составляю­щая Kell-гликопротеина представлена N-гликанами.

Категория: Система Kell

Опубликовано: 20 апреля 2014

Hawley и соавт. [194] при попытке подобрать совместимую кровь больному имеющему анти-К-антитела, выявили донора, эритроциты которого не агглюти­нировались сывороткой пациента, но адсорбировали анти-К-антитела, содержа­щиеся в его сыворотке. Исследование элюата подтвердило, что антитела имели специфичность анти-К. Эритроциты донора не давали видимой положительной реакции с другими сыворотками анти-К.

Kline и соавт. [226] описали ослабленную экспрессию антигена К, ассоции­рованную с нормальной экспрессией других антигенов Kell, у представителей 4 поколений одной семьи. Авторы выявили женщину, на эритроцитах которой антиген К был выражен очень слабо. Другие антигены (k, Kp^b_? Js^b и Кх) име­ли нормальный уровень активности. У матери упомянутой женщины, дочери и внука также обнаруживали слабый К. Эритроциты со слабо экспрессиро-ванным антигеном К адсорбировали анти-К-антитела из всех использованных анти-К-сывороток. Адсорбированные антитела присутствавали в элюатах.

Uchikawa и соавт. [374] обследовали 4 человек с фенотипом K_mod, у которых антиген К можно было выявить только с помощью метода адсорбции - элю-ции антител. Другие часто встречающиеся антигены Kell были слабо выраже­ны, k-антиген отсутствовал. Все 4 были гомозиготны по ££Х-мутации, коди­рующей Thr 193 Arg. Авторы указывают, что подобно замене Thr 193 Met, ха­рактеризующей специфичность К, замена Thr 193 Arg не сопровождалась N-гликозилированием в позиции Asn 191. Ослабление других К-антигенов яви­лось результатом уменьшения количества Kell-гликопротеина.

Слабую экспрессию антигена К наблюдали Marsh и соавт. [271] у лиц с феноти­пом McLeod, а также Muller и соавт. [292] - у лиц, не имеющих антигена Gerbich, Ge:-2,-3. Экспрессия антигенов к и Кр^а у лиц Ge:-2,-3 также была снижена.

По оценке Jaber и соавт. [211], эритроциты K+k+ Ge:-2,-3 несут почти в 2 раза меньше участков антигена К, чем эритроциты K+k+ Ge:2,3.

Слабая экспрессия антигена к обусловлена мутацией С 1388 Т в экзоне 11 гена KEL, которая кодирует замену Ala 423 Val [231].

Описано транзиторное ослабление антигена К и других Kell-антигенов у не­которых больных (чаще инфекционных), у которых в период ослабления Kell-антигенов появлялись свободно циркулирующие и фиксированные на эритро­цитах аутоиммунные анти-К-антитела, выявляемые соответственно с помощью непрямой и прямой антиглобулиновой пробы [101, 192, 208, 308, 344, 380, 397] (см. Лутоантытела к Kell-антигенам).

Категория: Система Kell

Опубликовано: 20 апреля 2014

Описано несколько пробандов с парциальной формой антигена К [276,348].

Приведенные McDowell и соавт. [276] наблюдения убеждает в том, что лица К+, так же как К-, могут вырабатывать анти-К-антитела, реагирующие со всеми образцами эритроцитов К+, за исключением собственных. Другие случаи [348] свидетельствуют о том, что большинство сывороток анти-К содержат парциаль­ные анти-К-антитела, не реагирующие с некоторыми эпитопами антигена К.

Skradski и соавт. [348] описали белого мужчину, эритроциты которого К+к+ реагировали с 8 из 72 использованных анти-К-реагентов. С помощью адсорбции - элюции авторы показали, что эритроциты обследуемого адсорби­ровали анти-К-антитела, с которыми давали видимую агглютинацию и кото­рые затем обнаруживали в элюате. Анти-К-реагенты, с которыми не было ви­димой реакции, на эритроцитах не адсорбировались и в элюатах отсутствова­ли. Антигены k, Kp^b, Js^b, Ku, Kll, К12, К13, К14, К18, К19 и К22 на эритро­цитах обследуемого были выражены нормально, антигены Кр^а, Кр^с, Js^a, UP, Wk^a и К23 отсутствовали. Три сестры обследуемого имели эритроциты К+, которые также несли на себе вариантную форму К. Парциальный антиген К, обнаруженный в этой семье, был слабее, чем на контрольных эритроцитах К+ неродственных доноров.

Из 8 образцов анти-К-антител, которые реагировали с эритроцитами об­следуемого, 3 были поликлональные IgG, 4 - моноклональные IgM. Авторы точно не указали, что послужило иммуногенным стимулом для образова­ния реагирующих антител. У 6 лиц они, по-видимому, имели аллоиммунное происхождение, поскольку были выявлены с помощью непрямой пробы Кумбса. У одной женщины титр анти-К-антител значительно повысился при беременности плодом К-.

При исследовании эритроцитов более 50 ООО человек одной из 8 реагирую­щих сывороток не было обнаружено ни одного образца, который подобно эри­троцитам пробанда и трех его сестер реагировал с упомянутой сывороткой, но при этом не реагировал с другими сыворотками анти-К.

McDowell и соавт. [276] описали женщину с фенотипом К+к+, у которой имелись антитела, охарактеризованные авторами как К-подобные. Антитела не агглютинировали ни собственные эритроциты, ни эритроциты К+к+ ее до­чери, но реагировали с эритроцитами К+к+ ее сына и мужа. Элюат, снятый с эритроцитов сына после адсорбции ими сыворотки матери, содержал анти-К-антитела, которые по-прежнему не реагировали с эритроцитами самой женщи­ны и эритроцитами дочери. Выраженность антигена К на эритроцитах матери и дочери была существенно слабее, чем сына и мужа. Каких-либо аномалий дру­гих антигенов системы Kell на эритроцитах женщины, ее мужа и детей указан­ные авторы не отметили.

Исходя из представленных данных, можно сделать 2 основных вывода.

Во-первых, парциальные антигены К, не выявляющиеся обычными сыво­ротками анти-К, крайне редки. Напротив, парциальные анти-К-антитела встре­чаются часто. Исходя из данных Skradski и соавт. [348], 88 % сывороток анти-К (64 из 72) не содержат фракции антител, направленных к определенным эпито-пам К-антигена. В то же время практически все поли- и моноклональные анти-К-реагенты содержат антитела к иммуногенному, трансфузионно опасному эпи-топу К, который содержится, за редчайшим исключением, во всех эритроцитах К+, и выявляют его даже при слабой экспрессии.

Во-вторых, парциальные антигены К обусловлены редким вариантным ал­лелем KEL, который, будучи в гомозиготной форме, кодирует продукцию неко­торых, но не всех эпитопов нормального антигена К. Парциальные антигены К отличаются от нормального К не только качественно, но и количественно.

И последнее, носителей парциальных К-антигенов следует рассматривать как К-отрицательных реципиентов, но как К-положительных доноров.

Категория: Система Kell

Опубликовано: 20 апреля 2014

К15

На эритроцитах К _о Обнаружен Другой антиген, Кх (см. система Кх), который присутствует и на нормальных эритроцитах, но скрыт под более разветвленной структурой Келл-гликопротеина. Отсутствие антигенов Kell и одновременное присутствие антигена Кх послужили основанием причислить Кх к системе Келл, и он получил обозначение К15. Однако постепенно выяснилось, что Келли-антигены и Кх-антиген, хотя структурно и связаны, но относятся к разным антигенным системам. Антиген Кх находится на иных мембранных компонентах эритроцитов, чем гликопротеин, который несет на себе антигены системы Келл. Продукция Кх кодируется локусом ХК, расположенным на Х-хромосоме, в то время как локус KEL находится на хромосоме 7. В связи с этим обозначение К15 было упразднено, антиген Кх получил статус системы, КОТОРОЙ присвоен
номер ISBT 019 [141].

В 1976 г. Марш [цит. по 204] описал K-подобный антиген, получивший номер К16, который выявляли на эритроцитах 99,8% людей. Ранее Марш и Аллен отметили, что K-подобный антиген присутствует на эритроцитах к + и отсутствует на эритроцитах к-. Различие между антигенами к и К16 заключалось лишь в том, что эритроциты фенотипа Маклеод имели слабовыраженный к-антиген, K + ^W , но при этом были К16-. Осталось невыясненным: была ли разница количественной или качественной. Других сообщений об исследовании антигена К16 не было, и он продолжает оставаться в номенклатуре ISBT.

К18

Антиген К18 - единственный из всех антигенов, наследственную передачу которого не удалось проследить, поскольку все тестированные люди являлись носителем этого антигена, т. е. были К18 +. Исключение составили 2 человека (женщина и мужчина), эритроциты которых не содержали антигена К18, а в сыворотке их крови имелись анти-К18-антитела [98, 307]. Среди 54 450 доноров не найдено ни одного К18- (Barrasso и соавт. [97]).

Первый образец сыворотки анти-К18 нашли Barrasso и соавт. [98] в 1975 г. у женщины, имевшей 8 беременностей и 1 трансфузию крови. Сыворотка содержала смесь антител анти-К1 и антител IgG, получивших наименование анти-К18. Последние реагировали со всеми исследованными эритроцитами (2000 образцов К-), включая редкие фенотипы: К12-, К13- и др, но не реагировали с эритроцитами К. _о и эритроцитами самой женщины. Авторы отметили, что антиген К18 сильнее экспрессирован на эритроцитах Кр (Ь +), чем Кр (Ь-), а также сильнее выражен на эритроцитах К13 +, чем К13-. Экспрессия антигена К18 на эритроцитах фенотипа Маклеод была самой слабой.

В 1983 г., через 8 лет после своей находки, Barrasso и соавт. [97] опубликовали дополнительные данные о К18-антителах и их вероятном клиническом значении. Антитела анти-К18 представляли собой комбинацию иммуноглобулинов в основном субкласса IgG4 и небольшого количества IgGl и, как предполагалось, не должны были вызывать сильного разрушения эритроцитов в естественных условиях. Однако пробная инъекция эритроцитов К1-К18 +, меченных Сг ⁵¹ , показала, что более 60% перелитых клеток разрушались в кровотоке пациентки в течение первых 24 ч после введения. Проба с фагоцитозом в моноцитарном монослое также свидетельствовала о несовместимости эритроцитов К18 + и возможности их быстрого выведения из циркуляции. Полученные результаты побудили лечащих врачей отказаться от трансфузии эритроцитов и изменить тактику лечения.

Второй образец К18-антител обнаружили Pehta и соавт. [307] в 1990 г. у мужчины 78 лет, получившего трансфузию. В его сыворотке, так же как у описанной выше женщины, присутствовали антитела анти-К1 и анти-К18. Авторы указали на интересную особенность: эритроциты пациента не реагировали с сыворотками aHTH-Yt и aHTH-Yt ^б , т. е. были Yt (погло-). По этому поводу Issitt, Anstee [204] дали комментарий, что это второй из известных случаев Картрайт отрицательного фенотипа. Первый был обусловлен транзи-торным подавлением экспрессии антигенов системы Картрайт. Пробанд Yt (погло-), описанный Pehta и соавт. [307], представлял собой, по-видимому, такой же феномен.

В методе проточной цитометрии эритроциты К18 + сына пациента реагировали слабее, чем эритроциты К18 + других лиц, что, как считают авторы, подтверждает принадлежность этого Напа-Келл-антигена к системе Келл. Отсутствие антигена К18 у отца отразилось в силу эффекта дозы на слабой выраженности антигена К18 у сына.

Ли и соавт. [231] показали, что, несмотря на серологическую идентичность обоих пробандов, фенотип К18- сочетался с различными нуклеогидными заменами в одном и том же кодоне экзона 4: в первом случае - С 508 Т, приводящая к замещению Arg 130 Thr; во втором - G 509 А, приводящая к замещению Arg 130 Джин.

К19

Первые анти-К19-антитела обнаружили Сабо и соавт. [337] в 1997 г. в сыворотке белой женщины сорока лет, имевшей 7 беременностей, одна из которых закончилась рождением живого ребенка, 6 - самопроизвольными выкидышами при сроках от 2 до 5 мес. Сыворотка женщины содержала, помимо К19-антител, слабые К1-антитела и реагировала со всеми эритроцитами, имевшими обычный фенотип по антигенам системы Келл, а также с эритроцитами, не содержавшими ряда общих антигенов Kell и напа-Келли. Сыворотка не реагировала с эритроцитами гомозигот К , собственными эритроцитами и эритроцитами трех ее сибсов.

Экспрессия к, Kp ^б , Js ^б и других часто встречающихся антигенов системы Келл и напа-Келл на эритроцитах К19- была нормальной в отличие от фенотипа К13-, для которого характерна сниженная экспрессия указанных антигенов.

Антиген К19, как и антиген К18, был сильнее экспрессирован на эритроцитах Кр (Ь +), чем Кр (Ь-), а также сильнее выражен на эритроцитах К13 +, чем К13-. На эритроцитах фенотипа Маклеод экспрессия антигена К19 была наименьшей.

Среди 7294 обследованных доноров Сабо и соавт, [337] не нашли ни одного К19-.

Второй случай К19-антител в том же 1979 г. описали Марш и соавт. [260] у 47-летнего мужчины (негра), которому произвели несколько трансфузий крови в связи с кровотечением. Авторы наблюдали отсроченную трансфузионную реакцию за счет анти-К 19-антител, которая проявилась в том, что все перелитые эритроциты К19 + (4 дозы) через 10 дней после переливания исчезли из кровяного русла реципиента. Убыль эритроцитов К19 + в кровотоке реципиента обусловливалась также самим кровотечением. Попытка авторов найти совместимого донора не привела к успеху: из 3463 обследованных не удалось найти человека К19-.

В итоге из 10 757 человек, в основном представителей белой расы, не оказалось ни одного К19-.

Ли [231] при исследовании молекулярной основы фенотипа К19- нашел, что оба пробанда К19- имели транзицию G 1595 А в экзоне 13, кодирующую Arg 492 Джин.

К22

Антиген К22, часто встречающийся (общий), обнаружен в 1982 г. Бар Шани и соавт. [96]. Лица, не содержащие этого антигена (К22-), найдены только среди евреев персидского происхождения. Первую сыворотку анти-К22 Бар Шани и соавт. получили от женщины израильтянки, когда она сдавала кровь в качестве донора. Женщина никогда не имела трансфузий, ни у одного из ее 4 овей, имевших фенотип К22 +, признаков ГБН при рождении не зарегистрировано. Антитела реагировали со всеми образцами эритроцитов общих и редких Келл-фенотипов, в том числе с одним образцом эритроцитов Маклеод. Со вторым образцом эритроцитов Маклеод сыворотка визуально не реагировала, но, как потом выяснилось, анти-К22-антитела адсорбировались на этих эритроцитах. Антитела не реагировали с эритроцитами гомозигот К , собственными клетками женщины и эритроцитами одной из трех ее сестер. При обследовании более 500 израильских доноров (в основном представителей смешанных рас) лиц К22-, кроме носительницы К22-антител и ее сестры, обнаружено не было.

Второй образец К22-антител обнаружили Мэнни и соавт. в 1985 г. [256]. Как и в первом случае, антитела образовались у женщины, еврейки из Ирана, живущей в Израиле. Анти-К22-антитела были выявлены во время ее 4-й беременности. У ребенка после рождения отмечали небольшую желтуху, прямая проба Кумбса была положительная.

Уместно подчеркнуть, что обследованная была D- К-. После 1-й беременности она получила трансфузию крови, четверо ее детей имели группу крови D +, один из них был К +, тем не менее образовавшиеся антитела имели только анти-К22-специфичность. Многие сыворотки, содержащие аллоиммунные антитела к часто встречающимся антигенам Келли и напа-Келл, также содержат анти-К и другие антитела. Описанный Мэнни и соавт. случай является исключением.

Четвертая и две последующие беременности этой женщины были описаны в более поздней публикации Левин и соавт. [247]. Авторы нашли, что 4-я и 5-я беременность сопровождалась анти-К22-антителами IgGl. У обоих детей при рождении прямая проба Кумбса положительная. Купирование легкой степени ГБН в обоих случаях ограничилось фототерапией. При рождении 6-го ребенка также наблюдали положительную прямую пробу Кумбса с эритроцитами пуповинной крови. Антитела имели изотип IgGl и IgG3. Ребенок был тяжело болен, и для его лечения произведено обменное переливание отмытых эритроцитов матери.

Исследование семьи 2-го пробанда (родителей и 5 детей, включая обследуемую) позволило Мэнни и соавт. придти к заключению, что антиген К22 связан с системой Келли. От родителей, имеющих фенотип К + к + К22 +, ген К22 передавался вместе с К ₉ а К22- (молчащий ген) - вместе с к. Иными словами, пробанд и 2 ее сибса были К-к + К22- а другие 2 сибса - К + к + К22 +. Как указывают авторы, родители обследованной были кровными родственниками. Тестирование 217 не связанных родством людей из этнической группы евреев (выходцев из Ирана) не выявило лиц К22-.

Антиген К22 нормально экспрессирован на эритроцитах Кр (а + Ь-) и К13- в отличие от других антигенов (к, Kp ^б , Js ^б , Ku, К12, К18 и К19), которые на эритроцитах Кр (а + Ь ~) и особенно К13- выражены слабо.

Антиген К22 находится на гликопротеине с мол. массой 93 кДа. Три не связанных родством лица К22- имели нуклеотидную замену С 1085 Т, кодируюiHjfK> Ala322Val (Lee [231]).

1987 г. Марш и соавт. [270] нашли редко встречающийся антиген, полу-ивший обозначение К23. Сыворотка, выявляющая этот антиген, принадлежала женщине, итальянке по происхождению, имевшей 4 беременности. У ее 3-го ребенка при рождении прямая проба Кумбса резко положительная, однако симптомы ГБН отсутствовали. Сыворотка крови женщины и антитела, элюирован-ные с эритроцитов ребенка, реагировали с эритроцитами двух ее детей, эритроцитами мужа и свекрови. В то же время сыворотка не реагировала со стандартными эритроцитами, содержавшими в различных комбинациях часто и редко встречающиеся антигены Келл, а также не реагировала ни с одним из 2116 образцов эритроцитов обычных доноров.

Эритроциты мужа утрачивали серологическую активность после обработки АЕТ или Zzap. Гликопротеин, выделенный из них посредством иммунопреци-питации антителами обследуемой, имел мол. массу 93 кДа, и, как потом было установлено, реагировал с кроличьими антителами к гликопротеину Келли. Антиген К23 не имеет антитетичного партнера.

Два члена семьи, гетерозиготные по антигену К23 (К23 + / К23-), имели замещение А 1265 G, кодирующее Gin 382 Arg и создающее участок рестрикции #cwI (Lee [231]). 

VLAN (К25)

Первый и единственный образец aHTH-VLAN-антител с изотипом IgGl + IgG2 обнаружили Jongerius и соавт. [215] при проведении пробы на совместимость. Сыворотка крови больного 60 лет (выходца из Голландии), содержащая эти антитела, реагировала в непрямой антиглобулиновой пробе только с 4 образцами эритроцитов: эритроцитами донора (датчанина по происхождению), эритроцитами двух его сестер и племянницы. Других лиц VLAN + авторы не нашли, обследовав 1068 доноров.

Попытка обнаружения антигена, антитетичного антигену VLAN, к успеху не привела: aHTH-VLAN-антитела не реагировали ни с одним из образцов стандартных эритроцитов, лишенных того или другого часто и редко встречающегося антигена.

Обработка эритроцитов АЕТ вызывала инактивацию антигена VLAN.

Для того чтобы установить локализацию антигена VLAN, авторы использовали метод конкурентного связывания антител (MAIEA): сравнивали блокирующий эффект VLAN-антител по отношению к 6 моноклональным антителам, направленным против различных эпитопов гликопротеина Келли. Эксперименты показали, что антиген VLAN располагается на гликопротеине Келл с мол. массой 93 кДа примерно в том же участке, где Расположены антигены Кр ^а , Кр ^ь и Кр ^с . Высказано предположение что ген, кодирующий продукцию VLAN, является 4-м аллелем субпокуса Кр ^а Кр ^ь Кр ^с .

Полученные Jongerius и соавт. данные позволили причислить VLAN к редким антигенам системы Kell. Ему был присвоен номер К25.

Ли и соавт. [235] нашли, что антиген VLAN обусловлен мутацией G 863 А, приводящей к аминокислотной замене Arg 248 Джин.

ТУ (K26)

Антиген ТУ, имеющий частоту встречаемости более 99,99%, обнаружен и изучен Джонс и соавт. [213].

Первый образец ТУ-антител найден в сыворотке крови мужчины 47 лет (коренного американца), обследованного в связи с операцией на бедре. Пациент до обследования трансфузий крови не получал.

Сыворотка анти-ТУ реагировала с эритроцитами всех общих фенотипов системы Келл, слабо реагировала с эритроцитами фенотипа Маклеод, Келл _1Р Kp (+ b-) и К13-, имеющими подавленную экспрессию антигенов Kell, но не реагировала с эритроцитами гомозигот К и нормальными эритроцитами , обработанными дитиотрейтолом, разрушающим антигены Келл.

С помощью метода MAIEA (метод конкурентного связывания антител) авторы установили, что антиген ТУ локализован на гликопротеине Келли.

Второй образец ТУ-антител (обозначенный сначала анти-УПА) были найден в сыворотке крови женщины (испанки по происхождению), госпитализированной на предмет удаления придатков. Сыворотка УПА не реагировала с эритроцитами ТУ, а сыворотка ТУ не реагировала с эритроцитами УПА.

Пациентка, как и в случае упомянутом выше, не получала трансфузий, но имела 2 беременности. Ее сыворотка реагировала с эритроцитами сына и 3 сибсов.

Несмотря на то что наследование антигена ТУ (УПА) не было прослежено в семьях в виде сцепленного комплекса с антигенами Келл, принадлежность его к этой системе была очевидна, и ему был присвоен номер К26.

Эксперименты с моноцитарным монослоем позволили Джонс и соавт. [213] заключить, что анти-ТОи-антитела не имеют клинического значения.

У 3 ТУ-отрицательных лиц из 2 семей наблюдали одинаковую транзицию G 1337 Авэкзоне 11, кодирующую Arg 406 Gin

RAZ (К27)

В 1994 г. Дэниелс и соавт. [148] обнаружили еще 1 общий антиген эритроцитов -RAZ, который получил номер К27. AHTH-RAZ-антитела присутствовали в сыворотке женщины кенийско-индийского происхождения, родители которой были двоюродным братом и сестрой. Тридцатью годами ранее женщина перенесла операцию на сердце, и в связи с этим ей могли перелить кровь. Срок выживания эритроцитов RAZ +, меченных Сг ⁵¹ , в кровяном русле пациентки был существенно сокращен: через 3 часа после инъекции меченых клеток половина их разрушилась, а через сутки после инъекции они в кровотоке отсутствовали. Для оказания трансфузионной помощи у больной было взято и при операции перелито 5 доз аутокрови.

Других Раз-отрицательных лиц, кроме указанной женщины - ^ носительницы RAZ-антител, не обнаружено. Таким образом, все люди являются RAZ-положительными.

Несмотря на то что антиген RAZ присутствовал на эритроцитах всех исследованных, ряд признаков позволил авторам причислить его к системе Келла.

1. Антиген RAZ отсутствовал на эритроцитах К, а также на эритроцитах, обработанных АЕТ, т. е. нормальных эритроцитах, Которые с помощью АЕТ искусственно превращены в К _о .
2. На эритроцитах лиц с фенотипами Маклеод и Келл _мод , для которых характерна низкая экспрессия антигенов Kell, антиген RAZ выражен так же слабо.
3. Обработка эритроцитов моноклональными антителами против эпитопов Келл блокировала связывание RAZ-антител, равно как обработка эритроцитов RAZ-антителами блокировала связывание моноклональных эпитопспецифиче-ских Келл-антител. Указанное обстоятельство свидетельствовало о том, что антиген RAZ располагается на том же гликопротеине, что и Келли-антигены.

Ли и соавт. [235] показали, что описанная Дэниелс и соавт. Раз-отрицательная женщина была гомозиготна по замещению G 865 А, которое кодировало замену Glu 249 Lys.