Система GIL

О выявлении aHTH-GIL-антител, открывающих одноименный часто встреча­ющийся антиген, сообщили Frederick и соавт. [2] в 1981 г. Антиген традиционно получил обозначение по имени женщины, у которой впервые были обнаружены упомянутые антитела. Позднее были выявлены еще 4 женщины GIL-, имевшие анти-01Ь-антител (Daniels и соавт. [1]).

К настоящему времени система представлена одним антигеном GIL и двумя фенотипами: GIL+ и GIL-.

В 2002 г. Rodier и соавт. [4] установили локализацию детерминант GIL, кото­рые расположены на акваглицеропорине-3 (AQP3).

Синтез вещества GIL контролируется геном AQP3, который картирован на хромосоме 9 в позиции 9р13 и не зависит от других групповых антигенных си­стем эритроцитов.

Серология

Daniels и соавт. [1] провели детальное серологическое обследование 5 жен­щин GIL-, европеек, имевших aHTH-GIL-антитела.

Наблюдение 1. Миссис Gil, американка, группа крови А(П), гемотрансфузий не было. Эритроциты ее первого ребенка давали слабоположительную реакцию в прямой антиглобулиновой пробе. Каких-либо проявлений ГБН не наблюдалось. У второго ребенка прямая проба Кумбса при рождении была отрицательной, однако его эритроциты реагировали invitroс сывороткой крови матери. Три сибса мис­сис Gil имели фенотип GIL+, родители не были кровными родственниками.

Наблюдение 2. Миссис Boi, француженка, группа крови 0(1). После пере­ливания крови во время хирургического вмешательства у нее развилась гемо­литическая трансфузионная реакция, обусловленная, как позже выяснилось, aHTH-GIL-антителами. Интересно отметить, что эритроциты женщины реаги­ровали в прямой антиглобулиновой пробе. Через 3 мес. после трансфузион-ной реакции титр aHTH-GIL-антител снизился с 1 : 1024 до 1 : 2. Эритроциты 2 сибсов женщины и 6 детей реагировали с сывороткой ее крови. Ни у одно­го из детей признаков ГБН не отмечалось. Эритроциты миссис Boi не реаги­ровали с сывороткой Gil в антиглобулиновой пробе. Отсутствие на них анти­гена GIL подтверждалось отрицательными результатами адсорбции - элюции. Вместе с тем активность сыворотки миссис Boi полностью устранялась путем адсорбции аллогенными эритроцитами GIL+.

Реализации анти-А-антител группоспецифической субстанцией А не реа­гировала с эритроцитами Gil+.

Эритроциты миссис Boi, исследованные 13 годами позже, давали слабополо­жительную реакцию с сывороткой Gil, а также с элюатом сыворотки Hun.

Наблюдение 3. Миссис Hun, немка, группа крови 0(1). После родов в сы­воротке ее крови обнаружены антитела с высокой частотой реагирования. Эритроциты новорожденного давали сильную (3+) реакцию в прямой ан-тиглобулиновой пробе, однако симптомов гемолитического заболевания у ребенка не было. Девять лет спустя антитела в сыворотке миссис Hun по-прежнему выявлялись. В очередной раз их выявили в другой лаборатории после рождения еще одного здорового ребенка. Эритроциты миссис Hun не реагировали с сывороткой Gil, а эритроциты Gil не реагировали с сыворот­кой миссис Hun.

Наблюдение 4. Миссис Gou A(II), в анамнезе четыре беременности, гемо-трансфузий не было. Ее сыворотка давала слабоположительную реакцию с эри­троцитами миссис Hun, но не реагировала с эритроцитами миссис Gil.

Наблюдение 5. Миссис Mil, американка, 78 лет, в анамнезе одна беремен­ность. За 5 недель до обнаружения антител ей перелили две дозы эритроци­тов. Антитела до трансфузий отсутствовали. Эритроциты миссис Mil не реаги­ровали с aHTH-Gil-антителами. Элюаты, полученные с эритроцитов GIL+ после контакта с сывороткой миссис Mil, не реагировали с эритроцитами миссис Gil и эритроцитами миссис Gou. Адсорбция сыворотки миссис Mil эритроцитами GIL- не влияла на ее активность.

Перекрестная адсорбция указанных пяти сывороток эритроцитами GIL+, специально отобранными для этой цели, показала, что в четырех из них при­сутствовали aHTH-GIL-антитела, пятая сыворотка (Mil) содержала анти-GIL-антитела и сопутствующие им анти-Pj -антитела.

Детальное изучение двух образцов aHTH-GIL-антител позволило установить принадлежность их к субклассам IgG. Так, антитела сыворотки миссис Gil от­носились к субклассу IgGl, антитела сыворотки миссис Hun были представле­ны смесью IgGl и IgG2.

Антитела сыворотки миссис Boi (женщины, перенесшей гемолитическую постгрансфузионную реакцию) обладали способностью связывать комплемент. Другие aHTH-GIL-антитела комплемент не связывали. Ни один из образцов ан­тител не обладал агглютинирующей способностью по отношению к эритро­цитам GIL+. Все образцы антител обладали сенсибилизирующими эритроци­ты свойствами и их можно было выявить только в непрямой антиглобулиновой пробе. Реакция усиливалась при энзимировании эритроцитов.

Антиген GIL устойчив к действию папаина, фицина, трипсина, химотрип-сина. протеазы и сульфгидрильных реагентов (Reid и Lomas-Francis [3]). Активность антител не ингибировалась плазмой и сывороткой крови, слюной, молозивом, мочой, а также группоспецифическими субстанциями Lewis.

К коллекции 208 отнесены три антигена: 2 часто встречающихся (Ег^а и ЕгЗ) I), встречающийся крайне редко (табл. 28.1). Известен нулевой фенотип-ir(a b ). Антигены Ег^а и Ег^ь - антитетичны. Коллекция Ег не получила статус групповой антигенной системы, поскольку не установлена хромосомная лока­лизация генов ER.

Таблица 28.1 Антигены Ег

Серология антигенов Ег

Антиген Ег³ описали Daniels и соавт. [2] в 1982 г., обнаружив у одного из паци­ентов не идентифицированные ранее антитела. Антитела такой же специфичности находили и другие исследователи. В соответствии с их обозначениями антиген Ег^а именовался как Rosebush, Ros, Min и Rod (Reid, Lomas-Francis [9). Сравнение анти­тел показало, что они реагируют с одним и тем же антигеном - Ег³.

В 1988 г. Hamilton и соавт. [5] нашли у женщины, имевшей пять беременно­стей, антитела с очень низкой частотой реагирования. Они взаимодействовали с пятью из шести образцов эритроцитов Ег(а-). Открываемый ими антиген полу­чил обозначение Ег^ь.

Интересна семья Rod., в которой были обнаружены анти-Ег^ь-антитела. В двух поколениях этой семьи были лица Ег(а+Ь+), Ег(а-Ь+) и Ег(а-Ь-), и это позволи­ло Hamilton и соавт. показать, что гены Ег^аи Ег^ьнаследуются кодоминантно, а редкий нулевой фенотип является следствием гомозиготности по молчащему ал-лелю ER, также передаваемому по наследству в соответствии с законом Менделя.

Следует упомянуть еще одну работу, дополняющую серологическую характе­ристику коллекции 208. Arriaga и соавт. [1] обнаружили индивида Ег(а-Ь-), сыво-рота® крови которого реагировала с эритроцитами как Ег(а-Ь+), так и Ег(а+Ь-). Алргела не удавалось разделить путем дифференциальной адсорбции, в связи с чем они были первоначально обозначены как анти-Ег^аЬ (далее анти-ЕгЗ), а анти­ген, открываемый ими, - ЕгЗ. Родители указанного выше носителя редкого фено­типа и антител являлись кровными родственниками. Других лиц, имеющих нуле­вой фенотип Ег:-1,-2,-3, среди европеоидов не найдено.

Необычный фенотип Ег(а-) в японской семье описали Naoki и соавт. [8]. Эритроциты трех сестер Ег(а-) агглютинировались тремя из восьми сывороток анти-Ег⁸, найденных в Европе. Одна из сестер имела анти-Ег^а-антитела, что ука­зывает на существование либо двух вариантов антигена Ег^а, либо еще одного, четвертого, антигена этой коллекции, отличающегося от Ег^а. Известны и дру­гие образцы сывороток анти-Ег^а, которые реагировали с эритроцитами Ег(а-). Результаты перекрестных реакций при сравнении этих сывороток в разных ла­бораториях не всегда совпадали, однако во всех случаях свидетельствовали о гетерогенности вещества Ег и анти-Ег-антител.

Лиц, имеющих фенотип Ег(а-), крайне мало. Daniels и соавт. [2], Gale и со­авт. [4] и Thompson и соавт. [11] не нашли ни одного Ег(а-) из 63 762 обследо­ванных европейцев. Naoki и соавт. [8] обследовали 13 521 японца и также не нашли ни одного Ег(а-), за исключением упомянутой выше уникальной наход­ки. Среди 605 обследованных доноров 4 имели фенотип Ег(Ь+).

По расчетным данным, генная частота аллеля Ег^асоставляет 0,9967, аллеля Ег^ь - 0,0033. Частота фенотипа Ег(а-) у европеоидов соответствует 1 на 100 тыс.

Популяционные, в том числе посемейные, исследования показали, что ан­тигены Ег не связаны с группами крови ABO, MN, P, Duffy, Kidd и Dombrock (Daniels и соавт. [2], Hamilton и соавт. [5], Naoki и соавт. [8]).

Антиген Ег^а полностью развит к моменту рождения, устойчив к действию трипсина, химотрипсина, папаина, фицина, проназы и сульфгидрильных реа­гентов (Daniels и соавт. [2, 3], Liew, Uchikawa [6]). Экспозиция эритроцитов в ЭДТА с глициновым буфером приводила к утрате эритроцитами антигена Ег^а. Полное исчезновение Ег^а наблюдалось при рН 2,0; при рН 2,5 утрата носила ча­стичный характер (Liew, Uchikawa [6]).

Антиген Er^b также оказался устойчивым к действию протеаз и сульфги­дрильных реагентов (Hamilton и соавт. [5]).

Анти-Ег-антитела

В анамнезе всех без исключения носителей анти-Ег^а-антител были гемо-трансфузии или беременности (Daniels и соавт. [2], Lylloff и соавт. [7], Naoki и соавт. [8], Rowe [10], Thompson и соавт. [11]). Антитела относились к клас­су IgG, способностью связывать комплемент не обладали (Daniels и соавт. [2], Naoki и соавт. [8], Thompson и соавт. [11]). У 2 реципиентов, имевших анти-| после переливания им эритроцитов Ег(а+) наблюдали положи­тельную прямую антиглобулиновую пробу, однако признаков гемолиза invivoне ИИН1 (Daniels и соавт. [2], Thompson и соавт. [11]). Эксперименты с моно-ИД моноцитов показали, что указанные антитела не относятся к клинически значимым. У 2 новорожденных, матери которых имели анти-Ег^а-антитела, была положительная прямая проба Кумбса, однако симптомов гемолитической болезни не наблюдали.

Для более полной оценки степени значимости и места Холодовых антител в по­вседневной практике приведем высказывания современных классиков иммуносе-рологии P. Issitt и D. Anstee: «.. .Хотя только примерно один из 10 000 взрослых лю­дей имеет фенотип i, сыворотки всех людей содержат антитела анти-1. Часто необ­ходима постановка реакции при 4 °С, чтобы выявить аутоанти-1-антитела, если об­разцы крови не были охлаждены до отделения сыворотки, иначе может показать­ся, что антитела анти-1 в исследуемом образце отсутствуют. Это связано с тем, что слабые аутоанти-1-антитела могут быть полностью адсорбированы собственными эритроцитами I+. Иногда аутоанти-1-антитела могут быть выявлены в тестах, вы­полненных при комнатной температуре. Хотя такие антитела могут создать пробле­мы при выполнении пробы на совместимость, существует естественный выход из положения. Скрининг антител и пробы на совместимость при комнатной тем­пературе не являются необходимыми, нет проблемы в том, что клинически незна­чимые холодовые антитела присутствуют у пациента и могут быть не выявлены. Редко клинически незначимые формы аутоанти-1-антител могут искажать результа­ты тестов, выполненных при температуре выше комнатной. Если у больного нет признаков болезни Холодовых агглютининов, т. е. антитела доброкачественные (не агрессивны invivo), то основания для беспокойства отсутствуют. Антитела этого типа могут быть удалены из сыворотки пациента с помощью аутоадсорбции. Более эффективной, чем обычные методы, может быть аутоадсорбция с использованием эритроцитов больного, предварительно обработанных филином, папаином или бро-мелином. Те варианты аутоанти-1-антител, которые вызывают болезнь Холодовых агглютининов, иногда очень трудно удалить из сыворотки путем аутоадсорбции.

По-видимому, клинически незначимые (доброкачественные) холодовые агглюти­нины, включая анти-1, продуцируются в наибольших количествах в возрасте от 11 до 25 лет, затем уровень их продукции снижается. Существует определенная корреляция между уровнем IgM и количеством Холодовых агглютининов у здоровых людей, но намного сильнее она выражена при наличии патологических Холодовых аутоантител.

Когда у взрослого человека с фенотипом i в сыворотке есть антитела анти-1, для трансфузии традиционно намереваются использовать кровь доноров с фе­нотипом i. Однако всегда ли обязательна такая процедура. В то время как было показано, что один из образцов анти-1 от человека с фенотипом i по своей при­роде относился к классу IgM и мог фиксировать комплемент при 37 °С, иссле­дования на приживление эритроцитов invivoне проводились. В другом случае, когда у взрослого больного с фенотипом i в сыворотке имелись анти-1-антитела, введенные эритроциты 1+ случайно выбранного донора были быстро элимини­рованы из кровотока (99 % эритроцитов элиминировано в течение 30 мин при первом исследовании, 92 % эритроцитов элиминировано за 90 мин при повтор­ном исследовании через 10 мес. с использованием тех же донорских эритроци­тов I+). Однако эритроциты дочери больного (фенотип 1+) сохранялись в кро­ви больного в течение времени, близкого к нормальному. Не вполне ясно, яв­ляется ли этот случай исключением или правилом? Авторы этого наблюдения расценили обнаруженное явление быстрого удаления эритроцитов 1+ как «на­столько неожиданное», что стали искать объяснение в разрушении эритроци­тов антителами анти-1, но признаков разрушения не нашли. В других случаях наблюдалось несколько человек с фенотипом i, у которых анти-1-антитела при­сутствовали и не отличались по температурному оптимуму и титру от образ­цов анти-1-антител, полученных от лиц I+. Таким образом, имеющиеся в насто­ящее время данные позволяют полагать, что взрослые с фенотипом i и наличи­ем анти-1-антител в сыворотке не всегда нуждаются в переливании эритроци­тов i, но это положение не может быть принято безоговорочно. Серологические эдактеристики анти-1-антител, особенно температурные границы активности, должны быть оценены в каждом конкретном случае.

Связь с заболеваниями

Эритроциты больных с нарушениями эритропоэза часто имеют повышенную экс­прессию антигена i (Т.Н. Горская и соавт. [1, 2], Pruzanski и Delmage [121], Giblett и соавт. [58], Crookston [22], Reid и Bird [128], Navenot и соавт. [106]). Это наблюдает* ся при талассемии, серповидно-клеточной анемии, дизэритропоэтической анемии П типа (HEMPAS), синдроме Даймонда - Блекфена (В₁₂-дефицитная анемия), ми-елобластном и сидеробластическом эритропоэзе, рефрактерных анемиях, холодо-вой пароксизмальной гемоглобинурии и острых лейкозах. Эритроциты с повышен­ной экспрессией антигена i обнаруживали в периферической крови лиц, подвергну­тых повторным флеботомиям. Экспрессия антигена I у них при этом не изменялась (Hillman, Giblett [69], Crookston [22]). В тех случаях, когда в процессе эритропоэза об­разуется недостаточное количество эритроцитов, пролиферативный стресс приво­дит к ускоренному созреванию эритроидных предшественников до того, как они мо­гут появиться в периферической крови. Количество клеток с повышенной экспресси­ей антигена i в периферической крови может быть подсчитано (Giblett и соавт. [58], Crookston [22], Hillman, Giblett [69]). При пароксизмальной холодовой гемоглобину­рии усиление экспрессии антигена i было выявлено как на измененных (CD59~), так и на нормальных (CD59⁺) эритроцитах. Navenot и соавт. [106] рассматривают усиле­ние экспрессии антигена i как симптом гематопоэтического стресса.

При хроническом лимфолейкозе экспрессия антигена i на лимфоцитах сни­жена (Shumak и соавт. [154]), при остром лимфобластозе - в норме. Ослабление антигена i отмечено у больных острым миелолейкозом (Shumak и соавт. [155]). Лимфобласты можно отличить от миелобластов по экспрессии антигена i. Этот прием используют при дифференциальной диагностике острого лимфолейкоза и хронического миелойкоза (Shumak и соавт. [153]).

Другие холодовые агглютинины

Помимо антител анти-I и анти-i идентифицировано много других Холодовых агглютининов (табл. 27.2) (Roelcke и соавт. [131, 133], Gottsche и соавт. [63]). Все они соответствуют характеристикам Холодовых антител и, за исключением анти^-антител, относятся к моноклональным антителам IgMic.

После антител анти-I наиболее распространенными являются анти-Рг-антитела. Они реагируют с чувствительными к протеазам детерминантами, рас­положенными в области О-связанных три- и тетрасиалосахаридов эритроцитар-иых сиалогликопротеинов. Последние входят в состав гликофоринов А сущих антигены системы MNS.

Агглютинины Pr подразделяют на анти-Pr,, анти-Рг₂ и анти-Рг₃, ко-торш отличаются по способности реагаровать с эритроцитами, модифицирован-нщи с помощью различных методов (Roelcke [131]). Антитела анти-Рг и анти-Рг₃ в свою очередь подразделяют на анти-Рг_]1п и анти-Рг_зь по способности реаги­ровать с эритроцитами различных видов: анти-Рг_1Ь и анти-Рг₃₁₁ реагируют только с эритроцитами человека, в то время как анти-Рг_135т и анти-Рг_19т агглютинируют также эритроциты собак (Roelcke [131]). Холодовые^гглютинины анти-Sa, так же как и анти-Рг₂, выявляют антиген на гликофорине А и некоторых ганглиозидах (Dahr и соавт. [23], Uemura и соавт. [174]). Некоторые антитела анти-Рг и анти-Sa представляли собой IgAK (Pereira и соавт. [115], Roelcke и соавт. [136]). Антитела анти-Рг выявлены у больных краснухой (инфицированных вирусами Rubella). У одного из них отмечался выраженный гемолиз (Konig и соавт. [88]).

Таблица 27.2 Характеристика Холодовых агглютининов

Примечание, вз - взрослые, нов - новорожденные, вз i - лица с фенотипом «взрослый i», пап ! папаинизированные эритроциты, сиа - эритроциты, обработанные сиалидазой, « + » -реакция положительная, ел - слабоположительная,« - » - отрицательная.