Система RH

В 1958 г. Allen и Tippett [131] описали необычные эритроциты у американ­ки европейского происхождения по фамилии Crosby из г. Бостон (США). Их не­обычность состояла в том, что, будучи резус-отрицательными (cde), они агглю­тинировались большинством сывороток анти-CD. Сыворотки анти-D, анти-С, анти-С^w, анти-С^х и анти-Се не агглютинировали ее эритроциты. Элюаты, сня­тые с эритроцитов миссис Crosby после их контакта с сыворотками анти-CD, реагировали с эритроцитами практически всех фенотипов, включающих анти­гены D, С или оба вместе (Cde, cDe, CDe). С эритроцитами cde и cdE элюа­ты не реагировали. Эти наблюдения легли в основу предположения о существо­вании антигена G, присутствующего, как исключение, в эритроцитах миссис Crosby, но имеющегося, как правило, в эритроцитах, несущих антиген D или С. Фенотип миссис Crosby представлял собой r^G (cdeG), а анти-СО-сыворотки, ре­агирующие с ее эритроцитами, содержали антитела анти-D+C+G.

Адсорбция сывороток анти-CD эритроцитами Cde и cDe полностью исто­щала анти-СО-антитела, а элюаты с клеток обоих указанных фенотипов име­ли очевидную анти-СО-специфичность. До открытия антигена G эти необъяс­нимые реакции приписывали сходству между антигенами С и D и связывали с перекрестной реактивностью некоторых сывороток анти-CD. Однако это объяс­нение не было убедительным в достаточной степени, поскольку моноспецифи­ческие сыворотки анти-С и анти-D перекрестной реактивностью не обладали. Кроме того, другие образцы сывороток анти-CD вели себя предсказуемо: при адсорбции обнаруживали разделяемые анти-С- и анти-О-антитела, т. е. не со­держали сопутствующих aHTH-G-антител.

Открытие антигена G позволило объяснить и другие парадоксы, наблюдае­мые ранее иммуносерологами. До 1960-х годов оставалось непонятным: почему при иммунизации лиц D- эритроцитами R_o (cDe) наряду с антителами анти-D, что было вполне ожидаемым, появлялись антитела анти-СО-специфичности. Такие же анти-СО-антитела находили у резус-отрицательных лиц, иммунизиро­ванных эритроцитами r^f (Cde). Так, Jacobowicz с коллегами [377, 378] наблюда­ли анти-СО-антитела у женщин cde/cde, чьи дети имели фенотип Cde, и антите­ла фактически были не анти-CD, а анти-С+G.

RC. Сахаров и др. [98, 99] описали несколько случаев искусственной имму­низации доноров cde/cde эритроцитами cDe/cDe. У всех доноров выработались, антител анти-D, антитела анти-С. SternnBerger [627] сообщили о появлении сильных антител анти-D и слабых антикС у Человека cde/cde, которому вводили эритроциты r^Gr (cdeG/cde). В этом случае антитела имели специфичность анти-G.

В настоящее время признано, что гены, кодирующие антигены С и D, одно­временно кодируют G-антиген. Гены, которые не образуют С или D, обычно не образуют и G. Тем не менее фенотип D+G- описан, хотя и встречается очень редко (Tippett [657], Shapiro [605], Stout и соавт. [630], Zaino [728]).

Stout и соавт. [630] указали на отсутствие G-антигена у представителей 3 по­колений семьи белых канадцев, которые имели в эритроцитах антигены С и D.

Shapiro [605] привел 5 случаев лиц D+, лишенных G-антигена, среди пред­ставителей народа банту.

Эритроциты категории D^IIIb являются D+G-.

Фенотип с противоположным вариантом (D-G+) нашла Tippett [657] у тро­их не связанных родством людей; 2 образца эритроцитов D-G+ обнаружены Rosenfield; 1 фенотип D-G+, наследственная передача которого прослежена в одной семье, привел Case [197].

Очень редкий образец эритроцитов C+G- описан Kusnierz-Alejska [403].

Отмечено, что в эритроцитах D^u антиген G выражен значительно слабее, чем в эритроцитах с обычным типом D (Vos [687]). Известен слабый G^u вариант (Beattie и соавт. [155]), встречающийся у негров.

Zaino [728] обнаружил у негритянки cDe/cde, не имевшей G-антигена, aHTH-G-антитела, образовавшиеся в результате беременности, a Huestis и Stern [362] нашли у женщины с фенотипом r^G (cdeG) анти-О-антитела, появивши­еся в результате беременностей плодами D+, что указывает на качественные различия антигенов G и D, а также на иммуногенность в отношении лиц, их не содержащих.

Поскольку стандартные эритроциты D+G- и D-G+ недоступны для повсед­невной работы из-за их редкости, заключение о наличии aHTH-G-антител в сы­воротках анти-CD может быть сделано на основании адсорбции - элюции этих сывороток эритроцитами cDe и Cde, фенотип которых соответствует, как пра­вило, cDeG и CdeG. Элюат с эритроцитов cDeG, контактировавших с сыворот­кой анти-CD (без анти-G), не будет агглютинировать эритроциты CdeG, а элю­ат с эритроцитов CdeG не будет реагировать с эритроцитами cDeG. В то же время элюат с эритроцитов CdeG или cDeG, контактировавших с сывороткой анти-С+D+G, будет агглютинировать эритроциты cDeG или CdeG соответ­ственно. Иными словами, элюат с эритроцитов после их контакта с сыворотка­ми анти-С+D+G будет вести себя как анти-СО-антитела независимо от феноти­па использованных эритроцитов (Cde или cDe), а элюат с эритроцитов после их контакта с сыворотками анти-С+D (без анти-G) - как анти-С или анти-D в зави­симости от фенотипа эритроцитов, взятых для адсорбции (Cde или cDe).

Kelley и Prihoda [392] исследовали частоту антител анти-G в сыворотках анти-CD или, другими словами, какова фактическая специфичность сывороток ащти-СР. Использовали адсорбциюВ элюцию эритроцитами cD^Ee, которые имеют антиген D, но не имеют антигенов С и G, а также редкие эритроциты cdeG, которые содержат антиген G, но не содержат антигенов С и D. Из 49 ис­следованных авторами сывороток, идентифицированных обычными метода­ми как анти-D+C, 51,4% имели антитела анти-D+C+G; 17,2% - анти-C+G; 5,7 % - анти-D+G; 25,7 % - анти-C+D. Таким образом, 74,3 % сывороток анти-CD содержали антитела анти-G, а 25,7 % не содержали, 23,9 % сывороток анти-CD фактически имели специфичность анти-C+G и анти-D+G, т. е. специфич­ность анти-D в первом случае и анти-С во втором случае была кажущейся.

Issitt и Anstee [374] обнаружили сильный компонент анти-G в 11 коммерче­ских реагентах анти-CD и анти-CDE. Среди 50 сывороток, взятых от сенсибили­зированных к CD-антигенам лиц, 15 содержали анти-С-антитела, 37 реагирова­ли с эритроцитами C-D-G+, т. е. имели aHTH-G-активность, однако 22 из этих 37 сывороток были комбинированными: анти-C+G, анти-D+G (поэтому они не были учтены как анти-G). Только 15 (30 %) сывороток после адсорбции - элю-ции характеризовались как содержащие гомогенный aHra-G-компонент.

Авторы пришли к выводу, что гипериммунные сыворотки анти-CD и анти-CDE, используемые как коммерческие в виде пула из нескольких сывороток, практически всегда содержат aHTH-G-антитела. В индивидуальных, непулиро-ванных, образцах анти-СО-сывороток антитела анти-G могут отсутствовать.

Как подчеркивают указанные авторы, опасение, что эритроциты r^lG (CdeG) могут быть иммуногенными для реципиентов rr (cde/cde), потому что несут на себе антигены как С, так и G, не является основанием для того, чтобы рассма­тривать кровь доноров r^,G (CdeG) как Rh+.

Антиген G, по-видимому, более иммуногенен, чем С, но не до такой степе-ни, чтобы представлять опасность для лиц cde/cde. Для формирования анти-G-антител у лиц rr (cde/cde) требуется весьма значительный антигенный стимул в виде многократных переливаний эритроцитов G+, чтобы антитела анти-G обра­зовались в выявляемом количестве.

Хотя aHTH-G-антитела чаще появляются у лиц D-C-G-, они могут образо­ваться у лиц D+. Антитела анти-G найдены Tippett и Sanger [660] как отделя­емый компонент в сыворотке лиц с эритроцитами категории D^inb, которые, как позднее выяснилось, не содержат антигена G. Другие авторы [630, 728] нашли aHTH-G-антитела у лиц с фенотипом D+G-.

Foung и соавт. [290], Thompson и соавт. [651] описали моноклональные aHTH-G-антитела.

О тесной связи антигенов G, С и D свидетельствуют эксперименты Allen, Tippett [132] и Nijenhuis [507], показавшие, что адсорбция aHTH-G-антител на эритроцитах конкурентно блокирует связывание эритроцитов с антителами анти-С, анти-D и, что пока не находит объяснения, с анти-е.

Установлено, что полипептиды Rh, несущие специфичность С и D, имеют одинаковую аминокислотную последовательность на участке от остатка 50 до остатка 103, кодируемом эквивалентными экзонами 2 гена RHD и гена RHC.

Антигены С (rh^f), с (hr^f) и их варианты.

C(rh')

Антиген С (rh^f) обнаружен в 1941 г. Винером (Wiener [708]). Антитела к это­му антигену часто образуются одновременно с антителами анти-D, благодаря чему антиген С был открыт вторым после антигена D, однако это отнюдь не означает, что он занимает второе место по своей иммуногенности.

В действительности моноспецифические анти-С-антитела встречаются ред­ко - примерно в 0,5 % всех случаев выявления антиэритроцитарных антител (СИ. Донсков и др. [38-40, 44], А.Г. Башлай и др. [16]), что указывает на невы­сокие антигенные свойства этого фактора. В шкале трансфузионно опасных им-муногенов Rh он занимает 5 место: D > Е (или с) > с (или Е) > C^w> С > е.

С^и

Эта слабовыраженная форма антигена С (rh^f), впервые описанная Race, Sanger в 1951 г. [545], встречается у 0,2 % европейцев и характеризуется ослаб­ленной агглютинацией эритроцитов, несущих этот фактор. Как и антиген D^u, антиген С^и практически не реагирует с полными антителами и его выявляют с помощью неполных антител в непрямой пробе Кумбса.

Антиген С^и не имеет качественных отличий от антигена С. Поскольку насле­дование его происходит независимо, его считают продуктом одного из аллелей локуса Н С*.

c(hr')

Антиген c'(hr') открыт в 1941 г. Левиным (Levine и соавт. [425]) и Рейсом (Race и соавт. [554]) как антиген, имеющий необычную связь с антигеном С.

Именно это открытие навело Фишера на мысль о существовании антитетич­ных пар антигенов и позволило ему сформулировать его знаменитую генетиче­скую теорию (см. Три генетические теории).

Антиген с (hr') содержится в эритроцитах 80 % европейцев и обладает выраженными иммуногенными свойствами. Антитела анти-с встречаются с частотой 2-4 % преимущественно у женщин и служат причиной посттрансфузионных осложнений и ГБН (М.А. Умнова [111], СИ. Донсков и др. [32, 33, 35, 39, 40, 44], А.Г. Башлай и др. [16], Л.С. Бирюкова и др. [20], Ю.М. Зарецкая и СИ. Донсков [56]).

c^v

Race и соавт. [547], Arnold и Walsh [140] описали разновидность антигена с - c^v. Эритроциты cc^v реагируют со всеми сыворотками анти-с и некоторыми из сывороток анти-С, а эритроциты сс реагируют только с сыворотками анти-с, в отношении сывороток анти-С они инертны. В этом состоит отличие антигена с от c^v. Последний считается промежуточной формой между антигенами С и с. Специфические антитела анти-с^v не выделены.

Значение антигена c^v в трансфузиологии и акушерстве невелико, поскольку он всегда перекрывается антигеном С или с.

 C^w

Антиген C^w обнаружен в 1946 г. Callender и Race [189] с помощью сыворот­ки, полученной от женщины по фамилии Willis, которая имела многократные пе­реливания крови. Сыворотка женщины содержала комбинированные антитела, одна из фракций которых реагировала с образцами эритроцитов С+, но не С-. Поскольку женщина имела фенотип CCDee, а антитела, присутствовавшие в сы­воротке ее крови реагировали с эритроцитами С+, авторы сделали вывод, что эти антитела не анти-С, а какой-то другой специфичности, имеющей отношение к ан­тигену С. Антиген был обозначен C^w, а антитела - соответственно aHra-C^w.

С 1946 г. по 1960 г. опубликовано много работ, посвященных исследованию этого антигена, и выявлены некоторые его особенности. В частности установле­но, что антиген C^w встречается в различных комбинациях с другими антигенами Rh, однако, как правило, в сочетании с антигеном С: CC^wDe, CC^wde [189, 206, 341], CC^wdE [267,376], CC^WDE [228, 537, 538], CC^wD^ue [594], CC^WD- [219,234, 267, 327, 328, 376, 413, 537, 538]. На этом основании антиген C^w рассматрива­ли как продукт аллеля CC^W гена С [219, 234, 413, 634]. Такой точки зрения при­держивались еще и потому, что многие сыворотки анти-С содержали компонент aHTH-C^w, создавая видимость тесной связи между антигенами C^wh С.

К концу 1980-х годов представление об антигене C^w как комбинации CC^W были обнаружены люди с фенотипом cC^wDe и обследо­вано несколько семей, в которых четко прослеживалось наследование гена C^wбез гена С.

В настоящее время считают, что антиген С^w кодируется самостоятельным локусом гена RHCE, не являющимся аллелем локуса Сс, и это подтверждено в экспериментах Mouro и соавт. [497]. При сравнительном исследовании Rh-транскриптов и фрагмен­тов ДНК людей C^w+ и C^w- авторы обнаружили, что экспрессия антигена C^w обу­словлена мутацией в экзоне 1 гена RHCE. В кДНК, кодирующей ^-специфичность, в нуклеотиде 122 имелось перемещение А —> G, что приводило к замене Gin Щ Arg в позиции 41. Следует отметить, что аминокислота, обусловливающая специфичность C^w, располагалась на 1-й внеклеточной петле полипептида СЕ, а аминокислоты, об­условливающие специфичность С и с, расположены, как показала ранее та же груп­па исследователей (Mouro и соавт. [496]), на 2-й внеклеточной петле полипептида СЕ. Таким образом, локусы C^w и Сс не могут считаться аллелями, поскольку расположе­ны в разных точках гена RHCE, хотя в серологических реакциях антигены C^w, С и с проявляют себя как продукт аллельных локусов.

Частота антигена C^w у европеоидов, по данным разных авторов, колеблется от 1 до 7 %. Наибольшая частота встречаемости антигена C^w (7-9 %), отмечена у латы­шей [550], лопарей (лапландцев) Норвегии, Швеции [133,134,397] и финнов [388].

Для сывороток анти-С^w характерен эффект дозы. При титровании с эритро­цитами гомозигот C^wDe/C^wDe они дают более сильные реакции, чем с эритро­цитами гетерозигот C^wD/CDe. Анти-С ^антитела имеют, как правило, алло-иммунную природу: возникают вследствие переливаний эритроцитов или бе­ременностей, однако известны случаи обнаружения анти-С^антител у лиц, не имевших ни беременностей, ни трансфузий крови.

Антитела анти-С^w могут появиться у реципиентов, которым в связи с нали­чием анти-с-антител переливают эритроциты гомозигот СС. При такой ситуа­ции вероятность введения эритроцитов C^w+ существенно возрастает. Антиген C^w относят к трансфузионно опасным факторам Rh, поэтому переливаний эри- • троцитов C^w+ реципиентам C^w- следует избегать.

С помощью поликлональной сыворотки анти-С^w, полученной из крови донора Ш-ва, и моноклональных антител анти-С^w серии D/D2002, полученных от того же донора, нами [42] исследованы эритроциты 13 489 первичных доноров трех станций переливания крови. Полученные данные суммированы в табл. 4.19.

Частота антигена C^w среди жителей Москвы (5,98 и 5,13 %) и Нижегородской об­ласти (5,5 %) примерно одинакова. Антиген C^w существенно чаще встречался у лиц, имеющих ген С в гомо- или гетерозиготной форме. Люди, имеющие генотип с/с, как привило, лишены антигена C^w. Ген C^w не является аллелем гена С, однако он так же, как и ген С, по-видимому, чаще комбинируется с геном RHD, чем с геном RHCE.

Относительно высокая частота аллоиммунизации антигеном C^w - около 2% от числа аллоиммунизированных людей, указывает на необходимость учи­тывать этот антиген при переливании эритроцитов. Целесообразно отводить

доноров C^w от донации эритроцитов, предлагая им другой вид донорства Щцо-нацию плазмы или тромбоцитов, как это принято в отношении доноров К+. Приемлемой трансфузионной средой для реципиентов C^w+ являются эритроци­ты гомозигот С/С, оптимальной трансфузионной средой - эритроциты доноров, имеющих идентичные антигены Rh-Hr.

Таблица 4.19

Частота антигена Су лиц с разным фенотипом Rh-Hr

Примечание. В скобках - частота антигена C^w в %.

с^х

Антиген С^х и антитела анти-С^х обнаружили Stratton и Renton в 1954 г. [634] при анализе причины ГБН. Антитела с такой же специфичностью были найдены другими авторами [229, 282, 531]. В одних случаях антитела были спонтанными [219, 398], в других - имели аллоиммунную и аутоиммунную природу [229].

Антиген С^х встречается с частотой 0,1-0,3 % [282, 634]. Его иммуноген­ность не столь выражена как C^w, поэтому его значение в трансфузиологии и акушерстве невелико. По данным Stratton, Renton [634] и Finney и соавт. [282] ГБН, вызванная анти-С^х-антителами, проявлялась в легкой форме.

Так же как фактор C^w, антиген С^х долгое время, вплоть до последнего деся­тилетия, считали продуктом гена С^х₉ аллеля генов С и с, так как фенотипически он связан с антигеном С и его выявляют как комплекс СС^Х. Лица с фенотипом сС^х встречаются редко.

Молекулярно-биологические исследования позволили установить, что ан­тигенная специфичность С^х обусловлена перемещением G Ц> А в нуклеоти-деЦОб к ДНК и последующей заменой Ala —► Thr в позиции 36 [497]. Мутация наблюдается в экзоне 1 гена RHCE и, так же как в случае ^-специфичности, располагается в 1-й внеклеточной петле полипептида СЕ.