Система RH

Сыворотка Wiel (см. выделена в 1963 г. Chown и соавт. [227] из сы­воротки женщины, миссис Bill cD"E/cde, сенсибилизированной четырь­мя трансфузиями и беременностью плодом C^uD^ue/cde. Исходная сыворот­ка содержала антитела анти-С, анти-Се, анти-С^и, анти-V и анти-D^w (Wiel). Очищенные aHTH-Wiel-антитела были получены адсорбцией сопутствующих антител, а также элюцией aHTH-Wiel-антител с эритроцитов, принадлежащих донору Wiel с фенотипом c^uDe/cde. В тех случаях, когда говорят о сыворот­ке Bill, подразумевают цельную сыворотку, а когда о сыворотке анти-Wiel или анти-D^w -адсорбированную сыворотку или элюат, полученный из сыво­ротки Bill.

Сыворотка анти-Wiel реагирует с антигеном D^w лиц cD^we/cde, CD^we/cde и, по данным Tippett [657], - с антигеном V (ce^s) лиц D-анти-О категории D^v. С эритроцитами людей CD^we/CDe сыворотка анти-Wiel не реагировала, посколь­ку ген D в позиции trans формировал у этих лиц нормальный D-антиген. Теперь очевидно, что фактор Dennis является продуктом гена R^NM&

Сыворотка Troll найдена в 1958 г. у белой женщины с генотипом Cde/cde.

Причина сенсибилизации не установлена. Женщина имела 2 детей; трансфузий или инъекций крови ей не проводили. Сыворотка содержала антитела анти-С^х, анти-Wr³, анти-Тг^а, анти-Ву и антитела, обозначенные авторами как Troll-Reynolds. Чистые антитела анти-Troll были получены адсорбцией и элюцией. Они имели такую же специфичность, как и сыворотка Reynolds.

Сыворотка Reynolds найдена Harris в 1961 г. у женщины по имени Elva Reynolds с генотипом CDe/cDE, сенсибилизированной трансфузиями крови (бе­ременностей не было). Ее сыворотка содержала, помимо указанных атипичных антител, антитела анти-Лс^ь.

Наследование гена R^N

Ген R^N₉ названый так Rosenfield и соавт. [575], был обнаружен у женщины по имени Charlie By и у 3 из 6 ее детей, а также у ее брата и у 3 из 4 его детей. Другими словами, носителями этого гена были сестра и брат семьи By, кото­рые передали его детям. By были неграми, откуда и появился символ N в обо­значении этого гена. Далее он был описан в виде генного комплекса, который можно было интерпретировать как (C)D^u(e) с сомнительной продукцией антиге­нов С (rh^f) и е (hr").

Rosenfield и соавт. не использовали сыворотки Wiel, Troll и Reynolds. Однако позднее Tippett исследовала мать семьи By и одного из ее детей R^N+ и нашла, что оба они Troll положительны. Признак Troll + в этой семье был менее устойчив, чем ген R^N, однако сочетание этих редких признаков [слабый С, слабый е и Troll (Reynolds)-] не были взаимосвязаны.

Fred с соавт., а затем Rosenfield и соавт. исследовали семью Co-Gar: мать была Е-е+, ребенок - Е+е-. Позднее был установлен фенотип мужа и бабушки по линии матери. Все они, за исключением мужа, были Wiel+ Troll (Reynolds)+. Фенотип ре­бенка оказался таким же, как у Dennis'a и By, и все 3 человека были Тго11+.

Интересны их генотипы: муж CD^ue/cD^uE, мать C^ue^u/cDe, ребенок C^ue^u/cD^uE, бабушка C^ue^u/CD^ue. Характерно, что у ребенка антигены С и е слабые, у матери слабый С и, возможно, слабый е, который маскируется нормальным е, унаследованным от отца, имевшего, по-видимому, хромосо­му cde или cDe. У бабушки слабые антигены Сие маскировались нормаль­ными антигенами Cde.

При серологическом обследовании произвольно взятых лиц некоторые из них оказались Wiel/Troll/Reynolds-положительными:

Мистер Harper - донор-негр. Он был обследован, помимо упомяну­тых выше Chown и соавт. [224], другими исследователями, в том числе Race и Sanger. Его эритроциты имели антиген D, слабый С, Е, с, слабый е, Rh32. Антигена f они не содержали.

 Доктор Molthan исследовала нескольких доноров, родители которых относились к типу R^N. ТШегу была одним из них. Ее кровь содержала антиген D, Е, с, слабые Сие.

Миссис Novella Council - негритянка. При тщательном изучении ее эритро­цитов было установлено, что она не Cde/Cde, как считали ранее, a C^uD^ue/Cde и относится к типу R^N, подобно бабушке из семьи Co-Gar.

Редкий тип крови R^N обнаруживают в основном у негров, среди белых он встречается редко. Его не удалось выявить при обследовании 906 лиц белой расы и 1217 их детей.

Закономерен вопрос: не являлся ли ген Dennis геном R^N7 Проведено срав­нительное изучение крови Dennis'a и образцов крови с фенотипами Wiel+Troll (Reynolds)*, Wiel+Troll (Reynolds)- и Wiel-Troll (Reynolds)-. Образцы кро­ви Dennis'a, матери из семьи Co-Gar и донора ТШегу оказались Wiel+ Troll+ Reynolds+, из чего можно заключить, что ген Dennis идентичен гену R^N. Исследование крови другими сыворотками позволило сделать аналогичный вы­вод. В частности, эритроциты Dennis'a при исследовании их 6 сыворотками анти-С, 3 анти-Се и 1 анти-СЕ показали такие же результаты, как эритроциты матери из семьи Co-Gar, т. е. со всеми сыворотками анти-С не реагировали, с анти-Се реагировали, с анти-СЕ давали слабоположительную реакцию.

Адсорбция - элюция, выполненная в нескольких лабораториях, не опроверг­ла вывод о том, что гены Dennis и идентичны.

По мнению авторов, ген Dennis возник в результате мутации гена CD^ue, ко­торый приобрел способность инициировать наряду с антигенами CD^ue новый антиген - Troll.

Высказанная гипотеза могла быть подтверждена при обследовании потомков от брака Dennis'a и его супруги, которые могли нести ген R^N и содержать анти­гены Troll и Wiel.

Как отметили авторы, Dennis и его жена, имеющая генотип CD^ue/CD^ue, -выходцы из многодетных семей. Однако, несмотря на большое стремление су­пругов иметь детей, их брак на протяжении многих лет оставался бесплодным. Проведенные специальные исследования не позволили выяснить причину бес­плодия.

R^Har (Rh33)

Антиген Ro^Har (D^RoHar) получил свое название по имени донора Наг, эритроциты которого были использованы Giles и соавт. [306] для приготовления первой тесто­вой сыворотки aHTH-Rh33. Донор Наг был резус-отрицательным, однако его эри­троциты реагировали с некоторыми сыворотками анти-D и анти-DC. Элюат с эри­троцитов Наг после адсорбции одной из сывороток анти-D содержал анти-^^Наг-антитела, реагирующие с эритроцитами 2 из 1060 доноров (включая самого Наг).

Эритроциты D^RoHar имеют трудно выявляемую форму D-антигена, а также шиженное количество антигенов е, f, и Нг_о, не содержат часто встречающих­ся антигенов hr^s, G и Нг, то есть содержат набор серологически выявляемых фе-нотипических признаков, отличающих гаплотип R^oHar. В связи с этим антиген Rh33 считается маркером гаплотипа ЕЭш сыворотки aHra-Rh33 используют соответственно для идентификации лиц-носителей гаплотипа Л^ой^в гомо- и ге­терозиготной форме. Однако следует заметить, что не все 100 % лиц R_o^Har явля­ются Rh33+, бывают и исключения.

Антиген Rh33 встречается на эритроцитах с редкими фенотипами: D+G-, e+hr^s- и Нг +Нг-

Эритроциты R_o^Har при использовании обычных серологических методов ти-пируются как D-.

В литературе приведено 2 наблюдения анти-1ШЗ-антител. В одном случае эти антитела присутствовали в сыворотке в комбинации с анти-О-антителами [306], в другом - с антителами анти-D, анти-с, анти-V, анти-К и аутоантите-лами, мимикрирующими под аллоантитела анти-D [Issitt и соавт., Transfusion, 1986, V. 26, R 506]. В обоих случаях анти-РЪЗЗ-антитела удавалось выделить в виде моноспецифической фракции с помощью дифференциальной адсорбции.

По данным Beckers и соавт. [161], гаплотип R^oHar, обусловливающий выра­ботку антигена D^RoHar, инициирует продукцию частичного D-антигена катего­рии D^IV. При гаплотипе D^IV(C)- антиген D^RoHar также может вырабатываться. Эпитопный состав антигена D^RoHar(Rh33) представлен в табл. 4.14 и 4.16 в стро­ке D^RoIiar. Известен случай ГБН, вызванный антителами aHTH-Rh33. Лица с фе­нотипом R_o^Har легко вырабатывают анти-О-антитела [161].

Исследуя эритроциты D^RoIiar с помощью панели моноклональных анти-D-антител, Wallace и соавт. [697] пришли к выводу, что этот антиген кодируется гаплотипом (D)c(e) Rh33 и является парциальным. Авторы нашли, что при ука­занном гаплотипе не экспрессированы эпитопы epDl-epD4, epD8 и epD9, в то время как способность экспрессировать эпитопы epD5 и epD6/7 сохранена.

Антиген D у лиц D^RoHar отличается от других парциальных D-антигенов. В противоположность слабым D-антигенам, которые выявляются неполными IgG-антителами, а с полными IgM-антителами не реагируют, D-антиген на эритро­цитах D^RoHar хорошо реагирует с полными антителами и не реагирует с боль­шинством реагентов, содержащих неполные антитела. Wallace и соавт. [697] подтвердили эти данные, показав в своих исследованиях, что моноклональные антитела IgM лучше выявляют антиген D^Rotlar, чем IgG.

Как установлено молекулярно-биологическими исследованиями Beckers и соавт. [160, 161], продукция антигена D^RoHar обеспечивается геном RHce, в кото­ром экзон 5 замещен эквивалентным экзоном ДЯО-гена.

Riv(Rh45)

Антиген Riv обнаружен в 1983 г. Delehanty и соавт. [257] у людей с феноти­пом D^IV(C)-, с другими фенотипами антиген Riv не был найден.

Присутствие антигенов Go^a, Evans, D^w, BARC, Tar, Rh32, Rh33, Riv и др. (табл. 4.17) может быть использовано как признак того, что данные эри­троциты принадлежат к категории частичного D. Например, умчелове-ка с генотипом CD^Ive/cde парциальный 0^1У-антиген выявляют с помощью специфических сывороток aHTH-epD4-epD8. У человека с 1

Часто отсутствие одного антигена сопровождается наличием другого. На этом принципе построен поиск новых специфичностей в иммуносерологии. Этот же принцип лежит в основе структуры клеточной мембраны: нет одно­го субстрата, значит, на его месте должен быть другой. Указанная закономер­ность не могла не проявиться и в парциальных антигенах D, в которых от­сутствуют отдельные эпитопы. В связи с тем, что парциальные D-антигены встречаются редко, то и антигены, «замещающие» их отсутствие, также ред­ки. Приводим их описание.

Go^a(JUi30)

В 1964-1967 гг. Alter с соавторами [135,136] описали антитела анти-Оо^а, по­служившие причиной гемолитической болезни новорожденного у негритянки по фамилии Gonsales из Пуэрто-Рико. В настоящее время известно много случа­ев выявления анти-Оо^а-антител у негров.

По данным Alter и соавт. [135], антиген Go^a встречается с частотой 1,86 % среди американских негров, но не был обнаружен при исследовании более чем 3000 англичан и канадцев. Частота Go^ay негров, по данным Lovett и Crawford [448], составляет 2,8 %.

Lewis и соавт. [436], Lovett и Crawford [448] установили, что Go^a является ча­стью системы резус. К такому же заключению пришли Chown и соавт. [223], ис­следуя 2 большие негритянские семьи. Авторы подтвердили ассоциацию Go^a с системой резус и установили, что антиген Go^a присутствует на эритроцитах, ко-

торые несут парциальный D-антиген категории D. При отсутствии этого анти­гена антитела анти-Go³ практически не реагируют с эритроцитами D+.

В настоящее время известно, что антиген Go^a находится на эритроцитах катего­рии D^IVa и наследуется в виде комплекса D^IVaGo(a+), а на эритроцитах категории D^Ivb он отсутствует. Антиген Go^a встречается у людей, имеющих гаплотип D^lvce, D^lwCe, D^lvcE или D^fC)', и, по-видимому, не встречается при генотипе cde/cde.

Присутствие антигена Go^a у лиц с фенотипом cDE сопровождается ослаблени­ем антигена Е, что проявляется в менее выраженной, чем обычно, агглютинации с анти-Е-сыворотками. Как отмечают Delehanty и соавт. [257], гаплотип D^IV(C)~ ко­дирует редко встречающиеся антигены Go^a, Rh33, Riv (Rh45) и FPTT (Rh50).

Антиген D^Cor, обнаруженный Rosenfield, Haber и Gibbel в 1956 г. у негров, и антиген Go^a, открытый десятью годами позже, представляют собой один и тот же антиген, однако, несмотря на приоритет в открытии этого антигена Rosenfield и соавт., в литературе укоренилось обозначение Go^a.

Evans (Rh37)

Антиген Evans (Rh37) был обнаружен Wiener и соавт. в 1966-1968 гг. у чле­нов одной семьи англичан, фенотип которых напоминал фенотип -D-, но не был ему идентичен. Пробанд, его сестра, отец и дед по отцу имели антиген Evans. Мать пробанда, бабушка по материнской линии и ее сестра этого анти­гена не имели. AHTH-Evans-антитела не реагировали с эритроцитами гомо- и гетерозигот -D-.

Спустя десятилетие Contreras и соавт. [236] установили, что антиген Evans присутствует на эритроцитах категории D^IvbGo(a-) и является маркером анти­гена D указанной категории. Антиген Evans присутствует также на эритроци­тах *D*, хотя в других фенотипах Rh-делеций он отсутствует (см. Фенотипы делеции). AHra-Evans-антитела найдены как сопутствующие в сыворотках, которые содержали анти-Go^а-антитела [244]. Моноспецифические антитела анти-Evans, без aHTH-Go^a, не обнаружены.

D^w(Rh23)

Антиген D^w (Wiel) выявили Chown и соавт. [227] в 1962-1964 гг. с помощью сыворотки, содержащей комбинированные антитела анти-D^w, анти-С, анти-С^wи другие, которые удалось разделить адсорбцией. Антиген D^w присутствовал у 9 из 235 обследованных негров. У 13 ООО обследованных белых людей этот ан-тиген отсутствовал.

Антиген D^w присутствовал только на эритроцитах с парциальным антигеном категории D^Va [227,439]; на эритроцитах с другим фенотипом его нет (см. R¹*).

Reid и соавт. [558] нашли 2 сыворотки, которые реагировали с эритроцитами D^w+Rh32- и D^w-Rh32+. Антитела анти-D^ anra-Rh32 (amn-R^N) в этих сыво­ротках не сепарировались и представляли собой комплекс, направленный к обще­му антигену, сопровождающему как фенотип D^w, так и фенотип Rh32 (R^N).

С 1951 г. по 1963 г. опубликована серия исследований, показавших, что лица D+, так же как D-, могут вырабатывать анти-О-антитела [216, 386, 446, 614, 645, 658, 671], реагирующие со всеми образцами эритроцитов D+, за исключе­нием собственных. Авторы подчеркивали, что антиген D мозаичен и представ­лен на эритроцитах многими эпитопами, которые могут выступать в качестве самостоятельных иммуногенов.

Обычно эпитопы присутствуют на эритроцитах людей D+ в полном составе. Люди, имеющие неполный комплект эпитопов, способны вырабатывать антите­ла к отсутствующим у них компонентам. Фенотип таких людей назван частич­ным, или парциальным, D.

При адсорбции сывороток анти-D, полученных от людей D-, эритроцита­ми разных категорий частичного D не удавалось выделить фракции, способные распознавать отдельные эпитопы D-антигена. Элюаты, как правило, содержа­ли антитела, идентичные тем, что находились в сыворотке изначально. Другими словами, антитела анти-D не сепарировались на отдельные эпитопные специ­фичности и представляли собой единую рецепторную структуру, направленную одновременно против множества D-эпитопов.

Антитела анти-D, присутствующие у лиц с парциальным D, имеют более узкий диапазон реагирования, чем анти-О-антитела лиц D-, поскольку в них отсутствуют рецепторы к отдельным эпитопам D. Иными словами, антитела, продуцируемые людьми с парциальным D, также являются парциальными.

По характеру перекрестного реагирования парциальные антитела разделили на группы.

Wiener, Unger и другие исследователи [216, 614, 645, 671, 716 ], установившие, что Rh_o-aHTHreH состоит из 4 компонентов (Rh^A, Rh^B, Rh^c и Rh^D), предложили клас­сификацию Rh_Q^alP^habet. Если один из компонентов в фенотипе присутствовал, его обо­значали индексом с заглавной буквой, если отсутствовал -строчной буквой. Таким образом, эритроциты фенотипа Rh^^ содержали компоненты Rh^A и Rh^B, а компо­ненты Rh^c и Rh^D в них отсутствовали. Как обнаружили исследователи, антитела, полученные от человека с эритроцитами Rh^A, реагировали с нормальными эритро­цитами Rh_o и эритроцитами Rh^a, но не реагировали с эритроцитами Rh^A. Антитела, продуцируемые человеком, имевшим эритроциты Rh^B, реагировали с эритроцита­ми Rh_o и эритроцитами Rh^b, но не реагировали с эритроцитами Rh^B и т. д.

В настоящее время алфавитную классификацию Rh_o^alphabet не используют и она упоминается лишь как имеющая научно-познавательное значение.

Классификация по категориям, существенно расширенная в настоящее вре­мя, предложена Tippett и Sanger [657, 661].

Первая ее версия опубликована в 1962 и 1963 гг. Суммируя результаты ис­следования сначала 18, а затем 29 сывороток анти-D, полученных от лиц с пар­циальными D-антигенами, авторы выделили 6 категорий антигенов, отличаю­щихся неодинаковым перекрестным реагированием (табл. 4.12).

Calligas и соавт. [190] обследовали 162 больных серповидно-клеточной ане­мией, получавших трансфузии эритроцитов. У 15 из них авторы обнаружили резус-антитела, у 13 - антитела анти-К.

Эритроциты категории D^IVa не несут на себе эпитопов epDl, epD2, epD3 и epD9, однако реагируют сильнее с большинством стандартных анти-D-сывороток, чем эритроциты, имеющие эти эпитопы. Считается, что эпитопы D на эритроцитах категории D^IVa более доступны для анти-Б-антител и, возможно, присутствуют в большем количестве, чем на других эритроцитах D+.

У лиц, носителей антигена категории D^VI I типа, экзоны 4 и 5 гена сЕ за­мещены аналогичными экзонами гена D. У лиц, носителей антигена категории D^VIII типа, экзоны 4, 5 и 6 гена Се замещены аналогичными экзонами гена D.

Wagner и соавт. [690] нашли новый парциальный D-антиген - DBS, или D^v-like, являющийся разновидностью антигена D^Va. Этот антиген |содируется ги-^щ^фт геном RHD-R^^(5)-RHD с делецией интрона 4 и частщэкзона 5. На эритроцитах D^v-like отсутствуют эпитопы epD4, ерШ2, epD17, epD18 и epD22, которые обычно присутствуют на эритроцитах D^Va. Указанное отличие антигена D^v-like от антигена D^Va было ассоциировано только с одной нуклеотидной заме­ной А 226 Р, которая, видимо, и привела к выпадению некоторых эпитопов. Ранее Wagner и соавт. [691] описали разновидности парциальных антигенов D^ivb-like, DNU-like и DFR-like, различающиеся точками мутаций в RHD-тене и отсутстви­ем некоторых эпитопов (табл. 4.15). По данным Zhou и соавт. [729], полиморфизм антигена D^Va обусловлен гибридным геном RHD/CE, в котором экзон 5 и интрон 5 гена D замещен гомологичными последовательностями гена СЕ.

Таблица 4.15

Разновидности парциальных антигенов D^IV, DNB, DFR

Flegel и соавт. [288,289] обнаружили III тип парциального антигена D^. В ка­тегории III типа экзоны 3, 4, 5 и 6 гена D замещены эквивалентными частя­ми гена Се. Авторы нашли, что число антигенных участков на 1 клетку для раз­ных типов антигена составляет: для     I типа - 500, для     II типа - 2400 и для

Ш типа - 12 000. Таким образом, эритроциты, несущие антиген III типа, содержат нормальное для эритроцитов D+ количество антигенных участков.

Два типа эритроцитов (I и III) содержат антиген BARC (Rh52), эритроци­ты    II типа не содержат этого антигена.

Jones и соавт. [385] описали новый парциальный антиген - DHR. Фенотип DHR обусловлен одной мутацией - G 686 —► А - в экзоне 5 гена Д которая приводит к замене Arg 229 —► Lis в 4-й экзофациальной петле полипептида D. Аминокислотная замена приводит к утрате epD 1, epD2, epD 12 и epD20.

Генная конверсия считается более частым механизмом появления парциально­го D-фенотипа. Однако есть несколько примеров простых замен, обусловливающих парциальные антигены D различных категорий: D^m - Leu ПО —► Pro [589, 694], D"-Ala 354 У Asp [144], DNU - Gly 353 Л Arg [144], DHMi - Thr 285 -* He [384].

В 2004 г. Kormoczi и соавт. [395] описали парциальный D-антиген, на­званный ими DWI. Он был обнаружен у 74-летней жительницы Восточной Австрии, имевшей группу крови 0(1) Rh+. Сыворотка женщины содержала анти-О-антитела, что послужило основанием заподозрить у нее парциальный вариант D. В анамнезе имелись 2 беременности от мужа D+ и несколько ге-мотрансфузий в связи с гинекологической операцией. Женщина и 2 ее род­ственницы (сестра и племянница) имели генотип DWICe/cde. На эритроцитах

DWI+ отсутствовали редкие антигены ЦЦ V₉ VS, D^w, Go^a, Evans, Tar, Riv, FPTT, BARC, JAL, которые ассоциированы с парциальными антигенами D, Сс или Ее. Антигенная емкость эритроцитов DWI+ составила 8000-8600 ан­тигенных участков на 1 эритроцит. При семейном исследовании установлено, что антиген DWI передается с гаплотипом DWICe, но не с DWIce. При эпитоп-ном картировании зафиксирована незначительная модификация антигена D, проявляющаяся в виде ослабленной экспрессии эпитопов Dl.l, D9.1 и D16.1. При ДНК-типировании авторы нашли в экзоне 7 гена RHD простую нуклео-тидную замену Т 1073 —> С, приводившую к замещению Met 358 —> Thr в 6-й экстрацеллюлярной петле D-полипептида.

Эритроциты DWI+ не агглютинировались одной из 79 моноклональных анти-D-cbmopoTOK, хорошо реагировавших с другими фенотипами D+. Авторы применили эту сыворотку для отсева лиц D+, с тем чтобы среди оставшихся нереагирующих или слабореагирующих образцов найти DWI+. Однако среди 2288 резус-положительных австрийцев антиген DWI выявлен не был, за исклю­чением трех упомянутых выше женщин.

Вначале была предложена 9-эпитопная модель парциальных D-антигенов. Специально отобранные моноклональные антитела дифференцировали 8 эпи­топов антигена D (epDl-epD9). Эпитопы D6 и D7 были объединены в epD6/7, так как серологические реакции эритроцитов, несущих эти эпитопы, оказались практически одинаковыми.

Faas и соавт. [276] предложили 15-эпитопную модель, в которой эпитопы epDl, epD2, epD5, epD6/7 и epD9 подразделяют на субэпитопы (Dl.l, D1.2; D5.1, D5.2; D9.1, D9.2 и т. д.) - от 2 до 10 субэпитопов в каждом эпитопе. Кроме того, авторами установлено 6 новых эпитопов, получивших номера с 10 по 15.

Jones и соавт. [386] разработали модель, включающую 30 серологически различимых эпитопов D (табл. 4.16). Как видим, эпитопная конструкция анти­гена D, сложившаяся к настоящему времени, еще далека от своего завершения.