Категория: Аллоиммунизация как глобальный популяционный процесс

Опубликовано: 14 апреля 2014

Вещества, вызывающие агглютинацию А-, В- или Н-положительных эри­троцитов человека, были найдены во многих растениях, водорослях, грибах, а также в тканях некоторых червей, улиток, икре лососевых рыб, сыворотке кро­ви угрей. Они были названы лектинами (табл. 3.6). Установлено, что они взаи­модействуют с терминальными моносахаридными группировками. Лектины из Dolichos biflorus и Ulex europaeus используют для дифференцировки подгрупп А в исследовательских целях (П.Н. Косяков [35], Прокоп, Геллер [56], Daniels [87], Issitt, Anstee [122], Sringarm и соавт. [201]), в рутинной практике определе­ния групп крови АВО их не применяют.

Таблица 3.6

Лектины с анти-А-, анти-В-, анти-AB- и анти-Н-активностью

Антиген С

Существование антигена С в системе АВО можно считать доказанным. Он содер­жится в эритроцитах А(П), В(Ш) и AB(IV). В эритроцитах 0(1) антиген С отсутствует.

Основанием для такого утверждения служат эксперименты Wiener и со­авт. [213, 224, 228-230], показавшие, что сыворотки О_ар(1), помимо а- и Р-агтлютининов, реагирующих с эритроцитами А и В, содержат еще одну разно­видность естественных групповых антител - С-агтлютинины (по Винеру анти-С- антитела), которые реагируют с эритроцитами А и В перекрестно

На наш взгляд, перекрестное реагирование обусловлено не ар-агглютининами, как полагала Dodd и соавт., а антителами аС, PC, что в большей мере согласуется с концепцией Винера, а также полученными нами данными. На рис. 3.2 представлена предполагаемая модель этих антител.

Представленная структурная модель изогемагглютининов позволяет объ­яснить характер перекрестного реагирования сывороток О_ар(1). Сыворотки, не вызывающие перекрестных реакций, содержат только а- и (3-антитела (рис. 3.3, п. 1). Сыворотки, вызывающие симметричные перекрестные реакции, содержат, помимо а- и р-антител, антитела аС и PC или анти-С-антитела (рис. 3.3, п. 4). Сыворотки, вызывающие асимметричные перекрестные реакции, содержат а, р и одну из разновидностей антител - аС или PC (рис. 3.3, п. 2, 3).

Комбинации агглютининов, обусловливающие различные варианты пере­крестного реагирования.

Вариант асимметрично реагирующей сыворотки.

Согласно схеме сыворотка содержит 50 % а-агглютининов, 75 % - р. Валентность анти-С реагирует как а и р. При адсорбции такой сыворотки эритро­цитами А а-агглютинины будут удалены полностью. Иными словами, из сыворот­ки будет удалено 50 % антител. При адсорбции сыворотки эритроцитами В будет удалено 75 % антител (50 % Р+25 % а) за счет рецептора анти-С. В случае, если рецептор анти-С связан не с а-, а с р-агглютининами, асимметричное реагирова­ние проявят эритроциты А, унося на своей поверхности 25 % Р-агглютининов.

Как далее нами показано, перекрестно реагирующие антитела так же, как иммун­ные антитела АВО и Rh, относятся к классу IgG, устойчивы к унитиолу, лучше реаги­руют с отмытыми, чем неотмытыми эритроцитами, в отличие от иммунных (термо- сгабильных) антител являются термолабильными (утрачивают активность после про­гревания сыворотки при 70 °С в течение 10 мин). В противоположность классиче­ским иммунным антителам IgG, которые адсорбируются на эритроцитах, но не вызы­вают их агглютинации, перекрестно реагирующие антитела непосредственно агглю­тинируют эритроциты в солевой среде. В низкой концентрации они утрачивают спо­собность агглютинировать эритроциты, однако сенсибилизируют их подобно непол­ным антителам и хорошо выявляются в непрямой антиглобулиновой пробе Кумбса.

 Сыворотки лиц 0^(1), очевидно, содержат несколько типов групповых анти­тел: изогемагглютинины аир IgM, аир IgG, аС и рС IgG* анти-С IgG, иммунные аир IgM, иммунные а и Р IgG, что закономерно обусловливает перекрестные ре­акции с различными групповыми антигенами.

Важным аргументом, подтверждающим концепцию Винера о существовании антигена С, явились эксперименты по получению специфических антисьгворотк. В частности, при иммунизации мышей эритроцитами А(П) и В(Ш) нами [21] были получены моноклональные антитела со специфичностью анти-АВ (МКА-АВ). Материал и методы. Трехмесячным самкам мышей BALB/c вводили по 0,1 мл от­мытых 0,9% NaCl эритроцитов А(П) или В(Ш) внутрибрюшинно дважды с интерва­лом в 7 дней. Третью инъекцию производили внутривенно за 5 дней до слияния спле- ноцитов с клетками миеломы NS-1. Слияние осуществляли по стандартной методике с использованием 45% полиэтиленгликоля-1500 «ЬоЬа» и 5% диметилсульфоксида.

Эффективность гибридизации составляла 10^-5. Клонировали гибридные клетки в сре­де HAT без фидера. Антителопродуцирующие клоны отбирали с помощью реакции аг­

Категория: Аллоиммунизация как глобальный популяционный процесс

Опубликовано: 14 апреля 2014

Онтогенез АВО-антигенов

Подобно антителам, антигены системы АВО в момент рождения разви­ты не полностью, хотя у эмбрионов их обнаруживают уже на 5-й неделе вну­триутробного развития. Эритроциты пуповинной крови реагируют с антитела­ми анти-А и анти-В слабее по сравнению с клетками взрослых лиц (Witebsky и Engasser [97, 233], Romano и соавт. [187]). Эритроциты некоторых новорожден­ных группы А по своей агглютинабельности могут приближаться к эритроци­там А₂. У 6-18-месячного ребенка агглютинабельности эритроцитов повышает­ся, серологические характеристики соответствуют группе А,. Эритроциты но­ворожденных А, лучше реагируют с лектином Dolichos biflorus, чем с антитела­ми анти-А, аллогенного происхождения. Эритроциты детей А₂ более интенсив­но взаимодействуют с антителами анти-А,В, чем с антителами анти-А, и тем са­мым показывают сходство с подгруппой А_х. Антиген Н на эритроцитах ново­рожденных выражен почти так же, как и у взрослых.

Эритроциты новорожденных А несут существенно меньшее количество А-антигенных участков (табл. 3.5) по сравнению с клетками взрослых лиц А, (Economidou и соавт. [95]). В то же время более высокая активность ^-трансферазы зарегистрирована в сыворотках пуповинной крови, чем в сыворотках крови взрослых.

Слабые реакции эритроцитов новорожденных с антителами анти-А и анти-В можно объяснить тем, что указанные антитела связываются с эритроцитами не двумя, а одним Fc-учаетком. На эритроцитах детей цепи, несущие антиге­ны А и В, недостаточно разветвлены. По мере разветвления меняется простран­ственная конфигурация эпитопов, их количество увеличивается и они становят­ся доступнее для активных участков антител. Повышение агглютинабельных свойств эритроцитов происходит постепенно в течение первых 6-18 мес. жизни. Концентрация (31 —»6-глюкозаминилтрансферазы, участвующей в формирова­нии разветвления, у новорожденных низкая. Содержание этого фермента до­стигает уровня его у взрослых в течение первых 6-18 мес. жизни.

Таблица 3.5

Плотность распределения А-антигена на эритроцитах

Категория: Аллоиммунизация как глобальный популяционный процесс

Опубликовано: 08 апреля 2014

Подобно антителам, антигены системы АВО в момент рождения разви­ты не полностью, хотя у эмбрионов их обнаруживают уже на 5-й неделе вну­триутробного развития. Эритроциты пуповинной крови реагируют с антитела­ми анти-А и анти-В слабее по сравнению с клетками взрослых лиц (Witebsky и Engasser, Romano и соавт. ). Эритроциты некоторых новорожден­ных группы А по своей агглютинабельности могут приближаться к эритроци­там А₂. У 6-18-месячного ребенка агглютинабельности эритроцитов повышает­ся, серологические характеристики соответствуют группе А,. Эритроциты но­ворожденных А, лучше реагируют с лектином Dolichos biflorus, чем с антитела­ми анти-А, аллогенного происхождения. Эритроциты детей А₂ более интенсив­но взаимодействуют с антителами анти-А,В, чем с антителами анти-А, и тем са­мым показывают сходство с подгруппой А_х. Антиген Н на эритроцитах ново­рожденных выражен почти так же, как и у взрослых.

Эритроциты новорожденных А несут существенно меньшее количество А-антигенных участков (табл. 3.5) по сравнению с клетками взрослых лиц А, (Economidou и соавт.). В то же время более высокая активность ^-трансферазы зарегистрирована в сыворотках пуповинной крови, чем в сыворотках крови взрослых.

Слабые реакции эритроцитов новорожденных с антителами анти-А и анти-В можно объяснить тем, что указанные антитела связываются с эритроцитами не двумя, а одним Fc-учаетком. На эритроцитах детей цепи, несущие антиге­ны А и В, недостаточно разветвлены. По мере разветвления меняется простран­ственная конфигурация эпитопов, их количество увеличивается и они становят­ся доступнее для активных участков антител. Повышение агглютинабельных свойств эритроцитов происходит постепенно в течение первых 6-18 мес. жизни. Концентрация (31 —»6-глюкозаминилтрансферазы, участвующей в формирова­нии разветвления, у новорожденных низкая. Содержание этого фермента до­стигает уровня его у взрослых в течение первых 6-18 мес. жизни.

Таблица 3.5

Плотность распределения А-антигена на эритроцитах

Лектины

Вещества, вызывающие агглютинацию А-, В- или Н-положительных эри­троцитов человека, были найдены во многих растениях, водорослях, грибах, а также в тканях некоторых червей, улиток, икре лососевых рыб, сыворотке кро­ви угрей. Они были названы лектинами (табл. 3.6). Установлено, что они взаи­модействуют с терминальными моносахаридными группировками. Лектины из Dolichos biflorus и Ulex europaeus используют для дифференцировки подгрупп А в исследовательских целях (П.Н. Косяков [35], Прокоп, Геллер [56], Daniels [87], Issitt, Anstee [122], Sringarm и соавт. [201]), в рутинной практике определе­ния групп крови АВО их не применяют.

Таблица 3.6

Лектины с анти-А-, анти-В-, анти-AB- и анти-Н-активностью

Категория: Аллоиммунизация как глобальный популяционный процесс

Опубликовано: 08 апреля 2014

Изогемагглютинины анти-А и анти-В отсутствуют в крайне редких слу­чаях: у больных врожденной гипо- и агаммаглобулинемией, а также при Х-ассоциированном синдроме Вискотта - Олдриджа. Такие лица не способны синтезировать антитела к полисахаридным, но не белковым антигенам.

Изогемагглютинины отсутствуют при истинном химеризме, наблюдаемом у ди- зиготных близнецов. В период внутриутробного развития между близнецами может происходить обмен кроветворными клетками, в результате чего после рождения у каждого из близнецов в кровотоке присутствуют 2 популяции эритроцитов с различ­ными фенотипами. Описаны химеры, когда 90 % циркулирующих эритроцитов име­ли группу О, а остальные 10 % - группу А. У таких индивидов в плазме крови обна­руживали только анти-В-антитела, анти-А отсутствовали (см. Кровяные химеры).

В очень редких случаях изогемагглютинины отсутствовали у здоровых лиц без признаков гипогаммаглобулинемии или какой-либо другой патологии. По данным Dobson и Ikin, изогемагглютинины отсутствовали у 0,01 % здоровых лиц. Авторы связывали это с соматическими мутациями, приводящими к инактивации клонов В-клеток, запрограммированных на синтез соответствующих антител. Интересно, что родители, братья и сестры пробандов содержали изогемагглютинины, харак­терные для соответствующей группы крови. Возможно, синтез АВО-антител кон­тролируется широко встречающимся доминантным геном и его редко встречаю­щимся рецессивным молчащим аллелем. Лица без изогемагглютининов являются гомозиготными по указанному рецессивному аллелю.

Категория: Аллоиммунизация как глобальный популяционный процесс

Опубликовано: 08 апреля 2014

в них антител анти-А и анти-В класса IgG (Д.В. Лабунов, И.В. Рау, М.А. Матвеева и др. , Н.Н. Меркулова и др. , В.А. Мороков и др., И.В. Рау, Judd ).

Более точно антитела АВО IgM и IgG, а также антитела, относящиеся к субклас­сам IgG,, IgG₂, IgG₃ и IgG₄, определяют с помощью специально предназначенных для этого антиглобулиновых сывороток, дифференцирующих указанные антитела.

Установлено, что частота антител класса IgG увеличивается с возрастом. Так, по данным Е.А. Хромовой, у детей О, А и В в возрасте от одного года до 15 лет IgG-антитела анти-А, -В и -АВ выявляют в 45,5; 4,1 и 15,7 % случаев соот­ветственно. Чаще всего IgG-антитела анти-А и анти-В выявляют у беременных. По данным Е.А. Хромовой , среди женщин группы О, А и В - в 76,2; 15,1 и 35,3 % случаев соответственно. Переключение синтеза антител с IgM на IgG ини­циируется повторными контактами с ксеногенными веществами, обладающими А- и В-подобной антигенной активностью. Как уже отмечено выше, у лиц с груп­пой А и В в пуле синтезируемых анти-В- и анти-А-антител преобладают IgM, а у лиц с группой О - IgG. Активность групповых антител несколько выше у женщин, чем у мужчин. Выявлены сезонные колебания, в частности снижение активности указанных антител в осенний период (К.Н. Климова и др. ). Содержание IgM в сыворотке крови снижается в пожилом возрасте (Baumgarten и соавт. ).

Категория: Аллоиммунизация как глобальный популяционный процесс

Опубликовано: 08 апреля 2014

Выявление антител в сыворотках и фенотипирование эритроцитов проводили четырьмя методами: реакцией конглютинации в пробирках с 33 % полиглюкином и 10 % желатином, реакцией агглютинации на плоскости и в микроколонках с гелем. Идентификацию антител проводили желатиновым, гелевым и ферментным методами с использованием 11-клеточной панели стандартных эритроцитов.

Исследовали эритроциты и сыворотку (см. табл. 2,1) крови членов се­мьи Б-ной: мужа, дочери, матери и брата.

Сыворотка Б-ной реагировала в ферментном методе в разведении 1:16- Д 32 с 3 образцами С ^положительных эритроцитов, в том числе матери (табл. 2.2).

'' С собственными эритроцитами, эритроцитами мужа, брата и дочери, а также други­ми эритроцитами, не содержащими антигена С , сыворотка не реагировала, что еще раз подтверждало отсутствие антигена C^w в эритроцитах близких родственников.

Протокол титрования сыворотки Б-ной с эритроцитами, обработанными протеазой С

Примечание. +++ агглютинация лепестковая, ++ крупнозернистая, + мелкозернистая, агглютинация отсутствует.

В разновидности антител в дополнение к анти-А и анти-В (Н.М. Михайлова и др.). Антитела анти-А, содержатся одновременно с анти-А в сыворот­ках крови лиц группы В. Антитела анти-Н содержатся в сыворотках крови лиц, имеющих редкую группу крови O_h (тип Бомбей), но иногда встречаются в сыво­ротках крови лиц, имеющих группу крови А и АВ. Они относятся к Холодовым агглютининам, имеют низкий титр, при 37 °С не активны (Issitt и Anstee).