Не утверждая, что это лежит в основе статуса нереспондерства, мы тем не ме­нее приведем некоторые размышления. Предположим, что резус-принадлежность D- данного человека обусловлена неполной делецией гена D, и небольшая часть генетического материала все же сохранилась. Этой части не достаточно, чтобы вос­производимый ею субстрат мог быть выявлен серологически как D+, однако мо­жет быть достаточно, чтобы антиген D, введенный с перелитой кровью, не воспри­нимался как чужеродный. Таким образом, нереспондеры по отношению к резус- антигену - это лица, в эритроцитах которых присутствует вещество, гомологичное антигену D, в небольшом, серологически невыявляемом количестве (скрытый D). Не исключено, что такие лица могут иметь фенотип D_el, при котором следовые ко­личества антигена D выявляют только с помощью адсорбции - элюции.

Предпринятые некоторыми исследователями попытки индуцировать состоя­ние толерантности к резус-фактору посредством орального введения эритроци­тов Rh+ не увенчались успехом. Остается недоказанным предположение о су­ществовании гена респондерства и нереспондерства.

Благодаря молекулярно-биологическим исследованиям Colyn, Mouro, Wolter, Cherif-Zahar, Le Van Kim и других исследователей стало понятно, почему анти­ген D столь иммуногенен.

В 1991 г. Colyn и соавт. [233] выяснили, что резус-положительные лица име­ют 2 гена: RHD и RHCE, кодирующие выработку резус-антигенов. В то же вре­мя у большинства резус-отрицательных людей ген RHD подвергнут делеции и они имеют только 1 ген - RHCE. Последний представлен 4 аллелями: RHCe, RHcE, RHce и RHCE, кодирующими соответственно 4 варианта субстрата - Се, сЕ, се и СЕ. Полипептиды, кодируемые аллелями RHCE, имеют весьма значи­тельное структурное сходство.

Как установили Mouro и соавт. [496], Wolter и соавт. [720], Cherif-Zahar и со­авт. [208], Le Van Kim и соавт. [418], полипептид, несущий иммунодоминант- ный эпитоп С, отличается от полипептида, несущего иммунодоминантный эпи­топ с, всего лишь четырьмя аминокислотами в цепи из 417 аминокислот, и лишь одно из этих 4 различий определяет специфичность С и с. Полипептид, несущий Е-специфичность, отличается от несущего е-специфичность одной аминокисло­той. Иными словами, когда реципиенты Cde получают трансфузию эритроцитов cde, а реципиенты cde - трансфузию эритроцитов Cde, иммунная система реципи­ента не всегда отличает перелитое вещество Rh от своего собственного. То же са­мое происходит, когда людям с фенотипом cDE, cdE или cDe, cde переливают эри­троциты cDe, cde или соответственно cDE, cdE: их иммунная система не в состо­янии отличить чужой антиген от собственного по одной различающейся позиции.

Полипептид, кодируемый геном RHD, отличается от кодируемого геном RHce по величине [208, 233, 418, 496, 720]. Такое различие существенно для иммунной системы реципиента. При делеции гена RHD кодируемое им веще­ство Rh не производится, поэтому вводимый при гемотрансфузии антиген прак­тически не имеет у реципиента какого-либо эквивалента. Иммунный ответ особенно сильно проявляется у лиц с фенотипом -D- и Rh_null, у которых часть или все антигены Rh отсутствуют. В этом случае антигенные различия реципиента и донора, даже если последний Rh-, очень велики.

На основании результатов молекулярно-биологических исследований, сви­детельствующих о незначительных различиях в структуре минорных резус- антигенов С, с, Е, е, а также основываясь на данных статистики, показываю­щих, что частота антител к этим антигенам невысока, некоторые исследовате­ли предлагают пересмотреть существующее положение о резуе-положительных и резус-отрицательных донорах. В частности, предлагается относить к резус- отрицательным донорам лиц D-, содержащих антигены С и Е, и узаконить трансфузии крови Cde, cdE и CdE резус-отрицательным реципиентам. По их мнению, такой подход, позволит расширить ресурсы донорской крови Rh-, сэ­кономит значительные средства, затрачиваемые на дополнительное типирова- ние доноров по факторам С и Е, и связанные с этим другие расходы.

Хотя мировое сообщество трансфузиологов в целом не приняло этот предло­жение, оно не лишено здравого смысла.

Придерживаясь общепринятого положения, предписывающего относить к резуе-отрицательным донорам только лиц, не содержащих факторов D, С и Е, мы все же рассмотрим его по существу.

В начале 50-х годов прошлого столетия сложилось представление о том, что для реципиентов cde антигены С и Е столь же иммуногенны, как D. Это представление базировалось на данных о высокой частоте встречаемости ан­тител анти-С и анти-Е в виде комбинированных сочетаний: анти-DC и анти- DE. Создавалась видимость высокой иммуногенности этих факторов и отсю­да опасение, что для реципиентов D-C-E- антигены С и Е будут также имму­ногенны. В действительности чистые антитела к факторам С и Е без анти-D- антител встречаются редко, что свидетельствует об их невысоких иммуноген- ных свойствах.

Для того чтобы еще больше обезопасить резус-отрицательных реципиен­тов от возможной аллоиммунизации, им переливают эритроциты, не содержа­щие этих факторов. Предпочтение такой тактики было в значительной степени произвольным, поскольку объективная статистика, подтверждающая правомер­ность такого подхода, отсутствовала.

В то же время реципиентам Rh+ переливают эритроциты, которые в 20-30 % случаев не идентичны по антигенам С и Е, не опасаясь при этом вызвать алло­иммунизацию. Вряд ли такой подход можно признать правильным, поскольку реципиенты Rh+, хотя и редко, но все же иммунизируются минорными анти­генами с, C^w, С, Е и е. В табл. 4.2 представлены данные, характеризующие сте­пень иммуногенности минорных Rh-антигеновискусственная иммунизация нативными и энзимированными эритроцитами не позволяла получить эти антитела (Р.С. Сахаров [96, 98]).

В опытах по иммунизации, когда инъекции продолжались в течение полу­тора лет, Jones, Diamond и Allen (1954) не смогли стимулировать продукцию анти-С и анти-Е ни у одного из 32 человек D+.

Очень часто иммунизация, предпринятая с целью получения антител анти-С и анти-Е, приводит к выработке антител анти-KEL 1 или анти-hr' (с). Об этом свидетельствуют многочисленные данные, полученные отечественными иссле­дователями Т.Г. Соловьевой, А.Г. Башлай, Р.С. Сахаровым, В.А. Мороковым, И.С. Липатовой и другими, занимавшимися направленной искусственной им­мунизацией с целью получения моноспецифических тестовых сывороток.

Анти-С-антитела хотя и редки, но значительно чаще образуются у резус- отрицательных людей, чем у резус-положительных, что еще раз подтвержда­ет правильность современной трансфузиологической тактики, предусматрива­ющей переливание резус-отрицательным реципиентам эритроцитов, лишенных антигенов С и Е. Сложившуюся повсеместно практику переливания эритроци­тов Rh+ резус-положительным реципиентам без учета факторов С и Е вряд ли можно считать идеальной, поскольку это приводит к аллоиммунизации реципи­ентов факторм hr' (с), который иммуногенен для гомозигот CDe/CDe и обуслов­ливает около 3 % посттрансфузионных осложнений.

Итак, многие аргументы убеждают в необходимости переливать эритроци­ты, идентичные по основным антигенам системы Rh-Hr: D, С, Е, с, е. К этому перечню необходимо добавить антиген C^w, частота сенсибилизации к которому составляет 1-2 % [40].

Роль Rh-антигенов в биологии человека неясна. Gahmberg и соавт. [296], Ridgwell и соавт. [566], Paradis и соавт. [517] полагают, что резус-антигены явля­ются лишь структурным элементом мембраны эритроцитов. Число молекул по­липептида Rh и гликопротеина Rh на 1 эритроцит достигает 200 тыс. (Hughes- Jones и соавт. [364]), что делает их основными мембранными белками.

Вещество Rh присутствует только в эритроцитах и, по-видимому, выполняет определенную функцию, специфичную именно для этих клеток.

По данным Schmidt и соавт. [5] и Sturgeon [638], эритроциты людей с фено­типом Rh_null, при котором, как известно, отсутствуют Rh-антигены, имеют эл­липсоидную форму. Концентрация анионов в мембране снижена (Balias и со­авт. [151]). Эритроциты часто дегидратированы из-за повышенного транспорта воды через клеточную мембрану (Lauf, Joiner [411], Nash, Shojania [504]). Срок их приживления in vivo меньше, чем обычных эритроцитов [598].

Ridgwell и соавт. [565] нашли, что аминокислоты Glu 21 и Glu 146 в транс­мембранной части Rh-полипептида и аминокислоты Glu 13 и Glu 148 в транс­мембранной части Rh-гликопротеина обеспечивают движение катионов через мембрану эритроцита и относятся к структурам, которые подобно аквапорину-1 (антигену Colton) являются транспортерами воды в клетку.

Система резус полиморфна. Помимо четко очерченных антигенов, она вклю­чает варианты, при которых антигены выражены слабо либо вовсе не продуци­руются. Для ясности дальнейшего изложения объясним некоторых обозначе­ния, встречающиеся в современных публикациях.

Как видно из табл. 4.5, наименования отдельным вариантам, в том числе редко встречающимся, присваивали в значительной мере произвольно. В этом плане классификация ISBT внесла определенный порядок. Тем не менее обо­значения, характеризующие необычную выраженность антигенов или их не­ожиданное отсутствие, в литературе сохраняются, например фенотипы Rh_null, -D-, (C)D(e). В последнем случае необычные фенотипы со слабовыраженны- ми антигенами Сие, кодируемые геном R^N и чаще встречающиеся у негров, обозначают как (C)D(e), выделяя скобками очень слабые или практически от­сутствующие антигены Сие.

Обозначение f (се) и rh. (Се) с дублирующим синонимом, помещенным в скобки, более информативно для читателя, чем обозначение этих антигенов как f и rhj, поскольку указывает на генетическую подоплеку их формирования (по­зицию цис генов се или Се). Антиген f продуцируется комбинацией генов с иев положении цис. При размещении генов спев позиции транс антиген f не фор­мируется. Аналогичная ситуация имеет место в отношении антигена rh., кото­рый вырабатывается в том случае, если как минимум на одной из унаследован­ных гомологичных хромосом в позиции цис расположены локусы Си е. Гены С и ев позиции транс антигена rh. (Се) не производят.

Антигены резус встречаются с частотой: D - 85 %, С - 70 %, с - 80 %, Е - 30 %, е - 97,5 %. В табл. 4.6 представлены варианты фенотипов и генотипов Rh, а также результаты серологических реакций, в которые вступают эритроциты с тем или иным сочетанием антигенов резус. Фенотип Rh-Hr выявляют с помощью

5   сывороток: анти-D, анти-С, анти-Е, анти-с и анти-е. Сыворотки анти-се, анти- Се, анти-сЕ и анти-СЕ обнаруживают на эритроцитах дополнительный антиген­ный продукт, кодируемый генами, когда они находятся в одном гаплотипе одно­временно. Реагирование этих сывороток при одинаковом фенотипе, но разном ге­нотипе людей не совпадает, что может быть использовано для установления ге­нотипа Rh по фенотипу. Например, лица с фенотипом CcDEe (Се+се-сЕ+СЕ-), с большой степенью вероятности (99,99 %) имеют генотип CDe/cDE (генотипы Cde/cDE или CDe/cdE менее вероятны), а лица с тем же фенотипом CcDEe (но Се-се+сЕ~СЕ+) имеют генотип CDE/cde или, что менее вероятно, CdE/cDe.

Выраженность антигенов Rh на эритроцитах варьирует в широком диапазо­не. Выделяют сильные, средние и слабые формы антигенов. Эритроциты, не­сущие эти формы, обычно не имеют качественных различий, но отличают­ся от образца к образцу степенью агглютинабельности. Выраженность агглю­тинации (агглютинабельность) определяется количеством антигена, представ­ленного на поверхности эритроцитов, что обусловлено генетическими фактора­ми. Агглютинабельность эритроцитов людей с генотипом cDE/cDE выражена сильнее, чем эритроцитов лиц с генотипом CDe/CDe, поскольку количество ан­тигенных участков на эритроцитах DE больше, чем на эритроцитах DC. Редкий фенотип -D-, при котором отсутствуют антигены С, Е, с и е, отличается наибо­лее высоким содержанием субстанции D по сравнению с нормальным D-типом. Менее всего антиген D выражен на эритроцитах со слабым D-фенотипом (D^u) и совсем не выражен на эритроцитах Rh_null.

После открытия групповых антигенов возникла проблема установления их структуры. Задачей иммунохимиков в области групп крови человека являлось выделить и охарактеризовать структуры, ответственные за специфические свойства веществ, обладающих антигенной активностью, и объяснить, почему они независимы в серологических реакциях.

Выделение антигенов А и В из эритроцитов оказалось непростой задачей. На эритроцитах и других клетках они представлены в водонерастворимой форме. Их удалось выделить экстракцией этанолом. Однако вскоре выяснилось, что эти веще­ства содержатся во многих органах и тканях организма человека, при этом они рас­творимы в воде. Для их выделения к 5 г различных тканей добавляли 25 мл воды, экстракт кипятили в течение 10 мин и затем центрифугировали. Полученный оса­док растворяли в 2,5 мл изотонического раствора натрия хлорида. О присутствии субстанций А и В судили по способности экстрактов угнетать активность анти-А- и/или анти-В-антител (Freidenreich и Hartmann, 1938).

Эти и другие подобные исследования позволили установить, что наиболь­шее количество вещества А и В содержится в секреторных тканях (слизистая оболочка желудка, слюнные железы, жидкость кист яичников) и в меконии.

Эти же вещества были выделены из стенок желудков лошадей, коров и свиней. Процедуру чаще выполняли замораживанием - оттаиванием экстрактов с по­следующим растворением высушенного осадка в охлажденном 90% раство­ре фенола. Фракция, не поддававшаяся растворению, обладала наибольшей ан­тигенной активностью. Высокой степени очистки удавалось добиться ультра­центрифугированием и использованием органических растворителей, напри­мер этанола. Оказалось, что по своей природе группоспецифические вещества А, В и Н являются мукополисахаридами, содержащими приблизительно 85 % углеводов и 15 % белков. Мягкий кислотный гидролиз приводил к исчезнове­нию специфической активности субстрата. При этом высвобождались сахара. Изучение структуры полисахаридов клеточных мембран бактерий подтверди­ло их антигенные различия, обусловленные именно присутствием тех или иных терминальных углеводных группировок.

Существенный прогресс в изучение природы веществ А, В и Н внесли работы Watkins’а и Morgan’а, показавших присутствие анти-Н-подобных агглютининов в сыворотке угря. Последние вызывали агглютинацию эритроцитов человека груп­пы О. Их активность ингибировалась L-фукозой. При последующих исследовани­ях обнаружено, что способность анти-А-лектинов агглютинировать эритроциты А устраняется добавлением в них Ы-ацетил-О-галакгозамина. Анти-В-антитела ней­трализовались D-галакгозой соответственно. Эти результаты были подтверждены при использовании экзогликозидаз, выделенных из Trichomonas foetus и Clostridium welchii. Указанные ферменты разрушали вещества А, В и Н. В то же время актив­ность этих ферментов устраняли К-ацетил-Б-галакгозамин, D-галактоза и L-фукоза соответственно, что указывало на химическую природу группового вещества.

Антигены систем АВО и Н представляют собой олигосахаридные цепи, связанные с полипептидами (гликопротеины) или церамидами (гликосфинго- липиды).

Выделяют 2 класса олигосахаридных цепей, которые экспрессируют АВН- антигены. Первый из них представлен N-гликанами - разветвленными струк­турами, связанными через аминогруппы аспарагина, и N-ацетилглюкозамин. Второй класс представлен О-гликанами, имеющими простую или сложную структуру, связывание в них происходит через гидроксильные группы серина или треонина также через N-ацетилглюкозамин.

Гликосфинголипиды (углеводные цепи, присоединенные к церамиду) под­разделяют в зависимости от биохимической природы на глобозиды, лактозиды и ганглиозиды.

Основная масса антигенов Н, А и В организма представлена гликопротеина­ми, доля гликосфинголипидов существенно меньше.

Антигены Н, А и В формируются трансферазами, которые присоединяют соот­ветствующие моносахариды к цепям-предшественникам.

Н-антиген представлен L-фукозой, присоединенной в позиции С-2 терми­нального галактозного остатка.

А- и В-антигены появляются в результате присоединения к фукозилиро- ванному галакгозному остатку (Н-антигену) N-ацетил-Б-галактозамина или D-галактозы в позиции С-3. Хотя структура Н-антигена представлена не только фукозой, данная группировка считается иммунодетерминантной, поскольку де- фукозилирование приводит к утрате Н-серологической активности субстрата. Аналогичным образом 1Ч-ацетил-0-галактозамин и D-галактозу относят к имму- нодетерминантным структурам, определяющим А- и В-серологическую актив­ность соответственно (Schenkel-Brunner [195]).

Выделяют шесть типов АВН-активных цепей (типы 1 - 6). Цепи типа 1 присутствуют в секретах, плазме и тканях энтодермального происхождения. Цепями типа 2 представлено большинство АВН-активных олигосахаридов на эритроцитах и в тканях экто- и мезодермального происхождения. Тип 3 несет антигенные детерминанты в гликолипидах эритроцитной мембраны и в муци­не у индивидов группы A (Anstee [68]). Тип 4 связан с гликолипидами и пред­ставлен в небольшом количестве на эритроцитах (Anstee [68], Daniels [87], Schenkel-Bnmner [195]). Тип 6 присутствует в виде свободных олигосахари­дов в грудном молоке и моче. Цепи 5-го типа в организме не встречаются, они синтезированы искусственно (Daniels [87], Schenkel-Brunner [195]).

Синтез Н-антигена происходит при участии а1,2-Ь-фукозилтрансферазы, ко­торая обеспечивает перенос фукозы от гуанозин-дифосфата (ГДФ) к галактоз- ному остатку цепи-предшественника в позиции С-2. Известны 2 типа al,2-L- фукозилтрансферазы, синтез каждого из них контролируют высокогомологичные, однако генетически независимыме друг от друга локусы FUT1(H) и FUT2(SE). Они расположены на хромосоме 19. Продукты указанных генов (ферменты) обе­спечивают фукозилирование и образование Н-активных структур в различных тканях. FUT1(H) обладает большей аффиностью к цепям типа 2, в то время как FUT2(SE) - к цепям 1-го типа. У подавляющего большинства людей антиген Н присутствует в обязательном порядке, Н-дефицитные фенотипы очень редки.

Н-антиген, образовавшийся в результате действия al ,2-Ь-фукозилтрансфераз, является субстратом для дальнейшего шикозилирования А- и В-специфическими трансферазами, обеспечивающими присоединение иммунодетерминантных груп­пировок: М-ацетил-О-галактозамина и/или D-галакгозы, после чего субстрат при­обретает А- и/или В-антигенные свойства.

Гены, контролирующие А- и В-трансферазы, независимы от локусов FUT1(H) и FUT2(SE), картированы на хромосоме 9, в локус АВО. Последний нередко содержит молчащие аллели О¹, О² и др., в присутствии которых синте­за А- и В-трансфераз не происходит. У лиц, гомозиготных по таким аллелям, ве­щество Н не конвертируется далее в антигены А.

Сочетание гена Я с геном Se приводит к тому, что на эритроцитах присутству­ет вещество Н одновременно с А и/или В в зависимости от того, какой аллель АВО унаследован (табл. 3.13). Если аллель Se по наследству не передается, то ве­щества А, В и Н в секретах практически отсутствуют (обычные невыделители).

Гомозиготные комбинации генов h и se проявляются как Н-дефицит и невы- делительство.

Другие варианты гена h способны кодировать синтез вещества Н в неболь­шом количестве. Последнее преобразуется нормально функционирующими А- и В-трансферазами в небольшое количество антигенов А и В, которые можно выявить с помощью адсорбции - элюции.

Как указывалось выше, у гомозигот hh при отсутствии гена Se вещества Н, А и В в секретах отсутствуют. Эти лица способны образовывать анти-Н-антитела.

При отсутствии гена Я (комбинации: hh, Se, ОО', hh, Se, А или В) синтеза соот­ветствующего группоспецифического вещества на эритроцитах не происходит. В то же время в плазме крови и секретах вещество Н определяется, поскольку Se- специфическая трансфераза присоединяет L-фукозу к цепям-предшественникам типов 1 и 3. Некоторое количество этой Н-субстанции адсорбируется на эритро­цитах, чем и можно объяснить слабоположительные реакции эритроцитов с анти- Н-антителами у обладателей Н-дефицитного фенотипа.

с / Синтезируемые за счет других трансфераз А- и В-подобные вещества так­же могут быть адсорбированы эритроцитами и их небольшое количество может быть обнаружено на указанных клетках.

Наилучшим образом возникновение различных Н-дефицитных фенотипов (Бомбей, пара-Бомбей, Реюнион, Н_т) объясняет концепция взаимодействия ген­ных локусов H/h и Se/se. Теоретически у родителей Hh,Sese х Hh, Sese воз­можно рождение детей как с фенотипом Бомбей (hh, sese), так и другими Н-дефицитными фенотипами (hh, Sese; hh, SeSe) с наличием выделительства. В действительности такие сочетания генов чрезвычайно редки. Во-первых, ал­лель h крайне редок. Во-вторых, гены указанных локусов настолько тесно сце­плены между собой, что вероятность рекомбинаций между ними очень мала.

С помощью молекулярно-генетических методов идентифицировано несколько вариантов аллеля h, однако неясно, отличаются ли они между собой в функ­циональном отношении. Некоторые из указанных аллелей способны кодировать синтез незначительного количества вещества Н. Несмотря на многочисленные доказательства независимости локусов Hh и Sese друг от друга, кодируемые ими фукозил-трансферазы обладают перекрестной способностью к гликозили- рованию соответствующих исходных субстратов. Так, //-специфическая транс- фераза, присоединяющая L-фукозу к цепям типов 2 и 4, проявляет тропность в отношении цепей типов 1 и 3. Соответственно ^-специфическая трансфера- за, гликозилирующая цепи типов 1 и 3, захватывает в этот процесс цепи типов 1 и 4. Такая перекрестная активность в ряде случаев лежит в основе следовой экспрессии антигенов А, В и Н на эритроцитах.

Антигены А, В и Н, адсорбированные из плазмы

Большая часть антигенных веществ А, В и Н синтезируется в процессе эри­трогенеза за счет активности соответствующих трансфераз. Вместе с тем неко- тороее количество указанных группоспецифических субстанций эритроциты адсорбируют из плазмы. Гликосфинголипиды, присутствующие в плазме и не­сущие вещества Н, А или В, могут встраиваться в мембрану эритроцитов.

Renton и Hancock в 1962 г. обнаружили, что эритроциты группы О, перели­тые реципиенту с группой А, приобретают А-антиген. Указанные эритроциты реагировали с антителами анти-А,В и лектином анти-Aj из Dolichos biflorus. С сывороткой анти-А лиц группы В эти эритроциты не реагировали. Авторы уста­новили, что антитела анти-А,В взаимодействуют с детерминантами, располо­женными на цепях типа 1 и 2, в то время как лектин распознает антигенную де­терминанту, локализованную на цепях типа 2. Подобную картину наблюдали в экспериментах с эритроцитами O_h. После контакта с гликолипидной фракцией плазмы лиц О Le(a-b-) выделителей эритроциты O_h приобретали способность агглютинироваться антителами против цепей 1Н-типа, но не агглютинирова­лись анти-Н-антителами, присутствующими у лиц O_h, а также анти-Н-лектином из Ulex europaeus. Очевидно, что антитела анти-Н, имеющиеся у лиц О., подоб­но анти-Н-лектину из Ulex europaeus, распознают А-антигенную детерминанту на цепях 2Н-типа.

Лимфоциты приобретают антигены Н, А и В из плазмы. Эти антигены встра­иваются в мембрану химическим путем в виде гликосфинголипидов, вырабаты­ваемых секреторными клетками. Существует и другое суждение: все групповые АВО-антигенные детерминанты, присутствующие в этх клетках, пассивно ад­сорбированы ими из плазмы. Изогемагглютинины, нередко содержащиеся в ти- пирующих анти-НЬА-сыворотках, могут реагировать с АВО-антигенами лим­фоцитов, адсорбированными из плазмы, и искажать результаты лимфоцитоток­сического теста.

На тромбоцитах антигены Н, А и В появляются за счет не только адсорб­ции указанных субстанций из плазмы, но и собственного синтеза. Тромбоциты лиц А₂ несут меньше антигена А по сравнению с людьми, имеющими под­группу А_г

Приобретенный В-антиген выражен слабее по сравнению с нормальным В-антигеном у лиц группы В и АВ. Отмечены количественные вариации его экспрессии. Его лучше определять антителами анти-В от лиц А₂, чем от лиц А_г В сыворотке крови некоторых людей О и А присутствует особая фракция ан­тител, специфически реагирующих с приобретенным В-антигеном. Последнюю можно выделить адсорбцией - элюцией. Некоторые моноклональные антитела анти-В реагируют с приобретенным В-антигеном. При иммунизации животных также удавалось получить антитела, которые специфически реагировали с при­обретенным антигеном В.

Группа крови лиц с приобретенным В-антигеном в рутинных тестах ин­терпретируется как АВ (Gerbal и соавт. [111]). Описано гемотрансфузион- ное осложнение с летальным исходом, когда реципиент группы А с приобре­тенным антигеном В получил трансфузию эритроцитов АВ (Garratty и соавт. [108]). Отмечено также, что эритроциты, несущие приобретенный В-антиген, нередко обладают полиагглютинабельностью (Veneman и соавт. [216]). Первоначально полагали, что появление антигена В обусловлено адсорбци­ей на эритроцитах А В-подобных бактериальных гликолипидов. Позднее было показано, что приобретенный антиген В является результатом своеобразного энзимирования эритроцитов, сопровождающегося деацетилированием мем­браны (Schenkel-Bnmner [195]). Сыворотки крови некоторых лиц с приобре­тенным В-антигеном обладали способностью конвертировать эритроциты А в А(В) (Stayboldt и соавт. [204]). Оказалось, что они содержат фермент, вызыва­ющий частичное деацетилирование N-ацетилгалактозамина, в результате чего появляется В-серологическая активность, выявляемая моноклональными анти­телами (Okubo и соавт. [173]). В пользу деацетилирования как причины ука­занного феномена свидетельствовали также другие факты: во-первых, только эритроциты группы А способны приобретать антиген В, во-вторых, экспрес­сия приобретенного антигена В обратно пропорциональна А-серологической активности эритроцитов.

Деацетилазы удалось выделить из культуры Clostridium tertium и некото­рых штаммов Escherichia coli. С помощью этих ферментов на эритроцитах А удавалось воспроизвести В-серологическую активность. Эритроциты груп­пы О такой конверсии не поддавались (Herron и соавт. [118]). Обработка эри­троцитов, несущих приобретенный антиген В, ангидрид ацетатом устраняла В-серологическую активность, при этом экспрессия антигена А восстанавлива­лась до первоначального уровня (Gerbal и соавт. [112]).

А-трисахариды, деацетилированные химическим путем, ингибировали ак­тивность анти-В-антител по отношению к приобретенному В. По отношению к нормальному антигену В ингибиции не наблюдали. В-трисахариды, в кото­рых галактозный остаток был заменен на аминогруппу, обладали аналогич­ным эффектом. Агглютинация с приобретенным антигеном В не происходи­ла, если в пробу добавляли галактозамин (Schenkel-Brunner [195]). С помощью молекулярно-генетических методов удалось дифференцировать лиц с обычным (врожденным) и приобретенным антигеном В (Fisher и соавт. [105]).

Н-дефицитные фенотипы

Как уже отмечалось выше, антиген Н является единственным серологически определяемым антигеном системы Hh. Эта система генетически независима от АВО, но вместе с тем обе системы имеют отчетливую фенотипическую связь. Экспрессия антигена Н неодинакова на эритроцитах разных групп, особенно слабых подгрупп, и убывает в последовательности О > А₂ > А₂В > В > A_l > A_tB.

У подавляющего большинства людей (99,99 %) эритроциты содержат Н-антиген, однако существуют редкие, Н-дефицитные фенотипы, при которых антиген Н отсутствует [77-79, 81]. К ним относят типы Бомбей и пара-Бомбей.

О_h (Bombay)

В 1952 г. Bhende и соавт. описали 3 жителей Бомбея (Индия), имевших нео­бычную группу О. Сыворотка их крови агглютинировала эритроциты А, В и, что было весьма неожиданным, эритроциты О. При этом собственные эритроциты не агглютинировались. Помимо антител анти-А и анти-В, сыворотки указанных лиц содержали антитела анти-Н, в то время как антиген Н в эритроцитах отсутство­вал, что также несвойственно группе О. Фенотип получил обозначение Bombay или O_h. Исследователи предположили, что локус АВО может содержать еще один аллель, который будучи в гомозиготной форме, приводит к формированию фено­типа O_h. Высказано также предположение, что указанный фенотип является ре­зультатом действия супрессорного гена, независимого от АВО. В последующие годы были найдены другие образцы крови Бомбей, в основном, среди лиц ин­дийского происхождения (Abu Sin и соавт. [65], Aloysia и соавт. [67], Beattie и со­авт. [70], Beranova и соавт. [75], Bhatia и соавт. [77, 78], Hrubishko и соавт. [120], Kitahama и соавт. [130], Moores и соавт. [160], Sringarm и соавт. [202]).

Н-дефицитные фенотипы встречаются крайне редко. Помимо индийцев они выявлены у тамилов - островитян Индийского океана, японцев, американских негров, жителей Таиланда и Судана (Daniels [87]).

Родителями лиц O_h часто являлись кровные родственники (Bhatia и соавт. [77, 79]). Во всех случаях о необычном фенотипе свидетельствовало присут­ствие антител анти-Н, агглютинирующих эритроциты О.

В слюне лиц O_h вещества А, В и Н отсутствуют.

Посемейные исследования подтвердили, что к возникновению фенотипа Бомбей гены локуса АВО не имеют прямого отношения.

Считается, что аллелем гена Я является молчащий ген h. Таким образом, фе­нотип O_h, лишенный антигена Н, возникает у лиц, гомозиготных (hh) по этому редкому аллелю (Ogasawara и соавт. [172], Wagner и соавт. [221]). Высказанное авторами предположение подтвердили молекулярно-генетические исследования Lee и соавт. [139], Schenkel-Brunner [195], Wagner и соавт. [221], показавшие,

А_mos

Выявлены лица группы А, эритроциты которых проявляли мозаичный (mosaic - отсюда и обозначение) характер агглютинации со специфическими антителами. Эритроциты A_ms, будучи смешанными с реагентами анти-А, отли­чались от А₃ и А_х тем, что процент неагглютинированных клеток был постоян­ным и не зависел от активности анти-А-антител в тест-системе. Эритроциты, не вовлеченные в агглютинацию, не обладали способностью адсорбировать анти- А-антитела. Активность сывороточных А-трансфераз у лиц A_mos снижена.

Возникновение варианта A_mos связывают с соматическими мутациями в от­дельных клонах гемопоэтических клеток (Marsh и соавт. [151]), в результате чего наряду с эритроцитами, содержащими антиген А, продуцируются эритро­циты, лишенные этого антигена.

 А_т

Фенотип А , описаный Gammerlgaard в 1942 г., сначала был обозначен им как А_х, но, поскольку найденный вариант отличался от А , вновь открытую под­группу переименовали в А_т. Эритроциты А_т реагируют очень слабо и не со все­ми образцами антител анти-А и анти-А,В. Присутствие антигена А в эритро­цитах устанавливают с помощью адсорбции - элюции. У лиц А выделителей количество вещества А и Н в секретах приближается к норме. Сыворотки их крови, как правило, не содержат антител анти-А_г При посемейных исследо­ваниях установлено, что ген А^т передается по наследству как редкий аллель АВО. Среди французов данный фенотип встречался с частотой 1 на 150 тыс. (Damborough и соавт. [88]), среди китайцев Тайваня - 1 на 400 тыс. (Daniels [87], Damborough и соавт. [88]). Несмотря на редкость фенотипа А_т, удалось идентифицировать 2 его разновидности с помощью детального анализа свойств сывороточных а-1,3 -ТУ-галактозаминилтрансфераз. Активность этих фермен­тов отличалась по кинетическим характеристикам при определенных значени­ях pH. В целом активность А-трансфераз у лиц подгруппы А_ю ниже, чем у лиц Aj. Найдены лица группы А_щВ. Посемейные исследования не позволили уста­новить наследственную передачу А_т-фенотипа.

Ау

Подгруппа А_у напоминает А_т, однако имеет отличия:

-элюаты анти-А-антител, снятые с эритроцитов А_у, менее активны по сравнению с элюатами, снятыми с эритроцитов А_т;

-  слюна лиц А_у выделителей содержит существенно меньше вещества А по сравнению с лицами А_т;

h -- сыворотка крови людей А_у содержит следовое количество А-трансферазы, а у индивидов А_т этот фермент отчетливо выявляют (Drozda и соавт. [92], Issitt, Anstee [122], Reid, Lomas-Francis [186]).

Полагают, что фенотип А_у не передается по наследству, а возникает в резуль­тате мутации зародышевых клеточных линий в пределах одной и той же семьи.

A_ei

Подгруппа А_е1 (elution) названа так по методу, с помощью которого удается обнаружить присутствие антигена А на эритроцитах. Антитела анти-А и анти- А,В Не агглютигнируют эритроциты А_е1, однако адсорбируются на их поверхно­сти, что подтверждают методом адсорбции - элзоции. В сыворотках крови лиц А_е1 А-трансфераза не выявляется, содержание Н-трансферазы снижено.

Фенотип А_е1 встречается редко: 1 на 100 тыс обследованных, преимущественно среди монголоидов (Solomon и соавт. [197], Sturgeon и соавт. [208]). Посемейными наследованиями показана передача гена A^el как редкого аллеля локуса АВО.

Эти варианты антигена А отличаются крайне слабой экспрессией (Mohn и соавт. [157], Nevanlinna и соавт. [168], Sturgeon и соавт. [208]), поэтому и обо­значены как «end».

Антиген А . практически не реагирует с антителами анти-А,В лиц группы О, не взаимодействует с антителами анти-А лиц группы В. Некоторое количе­ство группового вещества А выявляют в слюне.

Подгруппа найдена всего дважды среди 150 тыс. французских доноров.

Другой, несколько отличающийся от A_end, вариант был описан у финнов, в связи с чем и получил обозначение A_finn. Его находили с частотой 1 на 1000— 6000 обследованных в различных районах Финляндии (Mohn и соавт. [157]). Агглютинация эритроцитов A_finn с антителами анти-А и анти-А,В различима лишь при микроскопировании. В одном поле зрения насчитывают от 2 до 10 агглютинатов, каждый из которых состоит из 4-6 эритроцитов (Mohn и со­авт. [157]). Слюна выделителей содержит вещество Н, вещество А отсутству­ет. Экстраагглютинины анти-Aj выявлены в сыворотках крови всех лиц A_finn. Этим подгруппа A_finn отличается от других вариантов A_end. Issitt и Anstee [122] считают выделение подгруппы A_finn в качестве самостоятльной недостаточно обоснованным.

Еще один вариант A _d, получивший обозначение Аbantu, выявлен в Южной Африке у негроидов банту с частотой 4-8 % (Nevanlinna и соавт. [168], Sturgeon и соавт. [208]). Эритроциты A_bantu реагируют с антителами анти-А несколько ин­тенсивнее, чем А .. Сыворотки крови некоторых лиц A_bantu содержали экстрааг­глютинины анти-А_г Посемейные исследования подтвердили, что аллель Аbantu передается по наследству. Высказано предположение, что в негроидной попу­ляции этот ген появился сравнительно недавно вследствие миграции населения Африки в южном направлении. Он практически отсутствует среди негроидов Западной Африки и их потомков, проживающих в настоящее время в Америке.

A_inc

Название антигена «1ае» происходит от аббревиатуры слов «лектин», «ад­сорбция», «элюция».

Вариант А_1ае описан Schuh, Vyas, Fudenberg в 1972 г. у 9 членов одной француз­ской семьи. Присутствие антигена А в эритроцитах А_1ае было установлено с помо­щью адсорбции и элюции лекгина анти-Aj из Dolichos biflorus. В слюне субстанция А отсутствовала. Сыворотки крови лиц А_1ае реагировали с эритроцитами А,, \ и В.

Считается, что указанный фенотип это результат действия редкого гена в локусе АВО.

Вариант А_1ае является, по-видимому, первым промежуточным субстратом между антигенами О и А. Об этом свидетельствует тот факт, что эритроциты OCad+, так же как А, , способны, хотя и в меньшей степени, адсорбировать лектин Dolichos biflorus.

А_раc

Обозначение «рае» также представляет собой аббревиатуру: р - лектин из белковых желез улитки Helix pomatia, с помощью которого антиген А выявляют на эритроцитах, ае - метод детекции: адсорбция, элюция.

Подгруппа А_рае была обнаружена в 1987 г. Stemps и соавт. сразу в 3 семьях. Предполагают, что фенотип А является вариантом подгруппы А_х и А_Ье.

По мнению классиков клинической трансфузиологии (Mollison и соавт. [159]), гемолитические посттрансфузионные реакции в таких случаях могут иметь место, но их выраженность невелика по сравнению с другими иногрупп- ными трансфузиями, и они легко купируются. Эритроциты А,, несущие неболь­шое количество А-эпитопов, менее чувствительны к повреждающему действию специфических антител. Клинически значимый гемолиз in vivo развивается лишь в тех случаях, когда анти-А-антитела в сыворотке крови реципиента име­ют высокую активность и титр (1 : 1000 и выше), что встречается редко.

С начала 2000-х годов некоторые специалисты службы крови поднимают во­прос о необходимости учета подгрупп А при переливании эритроцитсодержащих компонентов крови. Распространяются реагенты для идентификации подгрупп и рекомендации переливать лицам А₂ только эритроциты А₂, а лицам А₂В - эритро­циты А₂В. Указанные рекомендации не имеют научного обоснования.

За последние 50 лет в Российской Федерации выполнено не менее 30 млн трансфузий эритроцитов группы А реципиентам группы А, из которых 12 % (согласно статистике) имели подгруппу А₂. Ни одного случая посттрансфузион- ного осложнения, обусловленного различием донора и реципиента по подгруп­пе А, не зафиксировано.