Напишите нам

Поиск по сайту

Наш блог

Как я заболел во время локдауна?

Это странная ситуация: вы соблюдали все меры предосторожности COVID-19 (вы почти все время дома), но, тем не менее, вы каким-то образом простудились. Вы можете задаться...

5 причин обратить внимание на средиземноморскую диету

Как диетолог, я вижу, что многие причудливые диеты приходят в нашу жизнь и быстро исчезают из нее. Многие из них это скорее наказание, чем способ питаться правильно и влиять на...

7 Фактов об овсе, которые могут вас удивить

Овес-это натуральное цельное зерно, богатое своего рода растворимой клетчаткой, которая может помочь вывести “плохой” низкий уровень холестерина ЛПНП из вашего организма....

В какое время дня лучше всего принимать витамины?

Если вы принимаете витаминные и минеральные добавки в надежде укрепить свое здоровье, вы можете задаться вопросом: “Есть ли лучшее время дня для приема витаминов?”

Ключ к счастливому партнерству

Ты хочешь жить долго и счастливо. Возможно, ты мечтал об этом с детства. Хотя никакие реальные отношения не могут сравниться со сказочными фильмами, многие люди наслаждаются...

Как получить сильные, подтянутые ноги без приседаний и выпадов

Приседания и выпады-типичные упражнения для укрепления мышц нижней части тела. Хотя они чрезвычайно распространены, они не могут быть безопасным вариантом для всех. Некоторые...

Создана программа предсказывающая смерть человека с точностью 90%Смерть научились предсказывать

Ученые из Стэнфордского университета разработали программу предсказывающую смерть человека с высокой точностью.

Зарплата врачей в 2018 году превысит средний доход россиян в два разаЗП докторов

Глава Минздрава РФ Вероника Скворцова опровергла сообщение о падении доходов медицинских работников в ближайшие годы. Она заявила об этом на встрече с журналистами ведущих...

Местная анестезия развивает кардиотоксичностьАнестетики вызывают остановку сердца

Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения озвучила тревожную статистику. Она касаются увеличения риска острой кардиотоксичности и роста сопутствующих осложнений от...

Закон о праве родителей находиться с детьми в реанимации внесен в ГосдумуРебенок в палате

Соответствующий законопроект внесен в палату на рассмотрение. Суть его заключается в нахождении одного из родителей в больничной палате бесплатно, в течении всего срока лечения...

Система Gerbich

Биологическая роль, физиологические функции

Гликофорины С и D прикреплены к цитоскелету и являются лигандом между протеинами мембраны и цитоплазмы. По данным разных исследователей, от 20 до 61 % лиц с нулевым фенотипом Gerbich (Ge:-2,-3,-4) имели эритроциты эл­липсоидной формы (Reid и соавт. [94, 98], Anstee и соавт. [4, 5], Daniels и соавт. [30]). Мембрана эритроцитов Ge:-2,-3,-4 в связи с отсутствием гликофоринов С и D имеет пониженную упругость (Nash и соавт. [77]), вследствие чего воз­никает эллипсоцитоз. Описаны два брата Ge:-2,-3,-4, у котоых была хрониче­ская гемолитическая анемия (Rountree и соавт. [107]).

Эритроциты Ge:-2,-3,4 и Ge:-2,3,4 не отличаются от обычных по форме и упругости мембраны (Anstee и соавт. [5], Reid и соавт. [93]), несмотря на отсут­ствие полноценных молекул гликофоринов С и D.

Физиологические функции недостающих лигандов у лиц с фенотипом Yus и Gerbich, вероятно, компенсируются гликофорин-С-подобными молекулами.

Онтогенез, распределение в тканях

Антигены Ge2 и Ge4 полностью развиты на эритроцитах к моменту рождения (Rosenfield и соавт. [106]). Они выявлены у 17-28-недельных плодов (Race, Sanger [90]).

В процессе гемопоэза гликофорины С и D появляются на эритроидных клет­ках на ранних стадиях дифференцировки, хотя вначале их гликозилирование

может быть неполным (Villeval и соавт. [128]). Гликофорин С, выявляемый моноклональными антителами BRIC4 по точке гликозилирования, был экспресси-рован на 84 % клеток пуповинной крови, несущих CD34 (Daniels, Green [27]). Гликофорины С и D представлены как на эритроидных, так и на неэритроид­ных клетках (Le Van Kim и соавт. [53]). Гликофорин С присутствует на Т-лимфоцитах, в меньшей мере - на В-клетках и тромбоцитах, на гранулоцитах отсутствует (Le Van Kim и соавт.[53], Villeval и соавт [128]).

Транскрипты гена GYPC обнаружены в эритробластах человека, эритролейкемических клеточных линиях, головном мозге, почках и печени плода (Colin и соавт. [19], High, Tanner [38]). В печени взрослых они обраруживаются только с помощью МКА BGRL-100 к С-терминальному участку гликофорина .

Эластичность и форма эрцтроцитов обеспечиваются субмембранным матрик-сом, состоящим из трех белков: спектрина, актина и протеина 4.1R (Bennett [8], Mohandas, Chasis [71], Palek, Lambert [84]). Гликофорины С и D, протеин 4.1R, трансмембранный протеин полосы 3 (транспортер анионов), анкирин и протеин 4.2 образуют сферу, связывающую цитоскелет с мембраной клетки (Alloisio и со­авт. [2], Hemming и соавт. [36,37], Marfatia и соавт. [62-64], Mueller, Morrison [73], Nunomura и соавт. [79], Owens и соавт. [83], Reid и соавт. [103]).

Гликофорины С и D связаны с протеином 4.1R через спектрин-актиновую сеть. Трипептид аргинин - гистидин - лизин в позиции 86-88 гликофорина связан с внутренней последовательностью одного из доменов протеина 4.1R величиной 30 к Да, его кодирует экзон 8 гена 4.1R. Трипептид тирозин - фе-нилаланин - изолейцин гликофорина С связан с PDZ-доменом протеина р55, домен D5 белка р55 - с аминокислотной последовательностью, кодируемой экзоном 10 гена 4.1R (Hemming и соавт. [36, 37], Marfatia и соавт. [62-64], Nunomura и соавт. [79]).

Протеин 4.1 связывает кальций-модулин, поэтому повышенная концентра­ция ионов Са2+ ослабляет связь гликофорина С с протеином р55 (Nunomura и соавт. [79]). Протеин 4.1, таким образом, играет важную роль в формировании общей пространственной структуры: гликофорин С - протеин 4.1R - белок р55.

На одном эритроците присутствует около 200 тыс. молекул протеина 4.1R, примерно столько же, сколько имеется гликофоринов обоих типов (Smythe и со­авт. [115]). У больных с наследственным эллиптоцитозом содержание протеи­на 4.1 R уменьшено, количество гликофоринов С и D редуцировано на 70-90 %, отмечается дефицит белка р55 (Alloisio и соавт. [1, 2], Serjeantson и соавт. [ПО], Sondag и соавт. [116]). На дефицитных по гликофоринам С и D эритроцитах [фенотип Leach (Ge:-2,-3,-4)] протеин 4.1R редуцирован на 25 %, содержание белка р55 снижено на 98 % (Alloisio и соавт. [2], Hemming и соавт. [36]).

Гликофорины С и D, подобно гликофоринам А и В, содержат сиаловые кис­лоты и определяют гликокаликс - взаимодействие клеток с внешней средой. Хотя основной функцией гликокаликса является защита клетки от проникнове­ния болезнетворных микроорганизмов, гликофорины С и D, наоборот, являются рецепторами для вирусов гриппа (Ohyama и соавт. [80]) и возбудителей малярии (Mayer и соавт. [65], Pasvol и соавт. [85]).

Дефицит или отсутствие в эритроцитах гликофоринов С и D делает эритро­циты менее распознаваемыми для плазмодия малярии. Так, уровень инвазии эритроцитов Ge:-2,-3,-4 малярийным плазмодием Plasmodium falciparum со­ставлял 57 % от уровня инвазии эритроцитов Ge:2,3,4 (Pasvol и соавт. [85]). Уровень инвазии эритроцитов Ge:-2,-3,4 был обычным (Mayer и соавт. [65]). Лиганд BAEBL, расположенный на малярийном плазмодии, не распознавал эритроциты, обработанные сиалидазой или трипсином. Его связывание с эри­троцитами Ge:-2,3,4 и Ge:-2,-3,4 было снижено (Mayer и соавт. [65]). Лиганд BAEBL обладает тропизмом к ЕВА-175, последний является рецептором для Plasmodium falciparum на гликофорине А. Вместе с тем связывание рецептора BAEBL с эритроцитами Еп(а-), также дефицитными по содержанию гликофо-рина А, было нормальным.

Не исключено, что Gerbich-отрицательный фенотип дает селективные пре­имущества его носителям, обеспечивая защиту от малярийной инвазии. Очевидно, этим можно объяснить высокую частоту людей Ge:-2,-3,4 в Папуа -Новой Гвинее, эндемичной по малярии.

Чаще антитела к антигенов системы Gerbich выявляли у лиц, имевших бе­ременности и гемотрансфузии (Race, Sanger [90]), описаны также антите­ла естественного происхождения (Booth, McLouglin [11], Loirat и соавт. [58], McLouglin, Rogers [66], Okubo и соавт. [81]) и аутоиммунного (Gottsche и соавт. [35], Poole и соавт. [89], Reynolds и соавт. [105], Sererat и соавт. [109], Shulman и соавт. [111 ])Л

Чаще встречаются анти-Ое2-антитела. Они образуются у лиц Ge.-2,3,4, Ge:-2,-3,4nGe:-2,-3,-4.

Из 17 образцов антител, выявленных у лиц Ge:-2,-3,4, 13 имели специфич­ность aHTH-Ge2,4 - aHTH-Ge3 (Daniels [25]).

Из 6 обладателей фенотипа Leach (Ge:-2,-3,-4) анти-Ое2-антитела имели 4 человека, анти-веЗ - 1, aHTH-Ge4 - 1 (Anstee и соавт. [5], Daniels и соавт. [30], McShane, Chung [67], Reid и соавт. [98], Rountree и соавт. [107]).

Среди 664 обследованных меланезийцев Ge-38(13%) имели анти-Ge-антитела, причем число мужчин и женщин среди них было примерно одинако­вым (Booth, McLouglin [11]). Некоторые образцы антител были IgM, большин­ство относилось к IgG, главным образом к IgGl (Vengelen-Tyler, Morel [127]).

В некоторых публикациях aHTH-Ge-антитела идентифицировали как анти-Gel,2 и как анти-Ge: 1,2,3, однако адсорбция эритроцитами Ge:-2,3,4 пол­ностью истощала эти антитела, в том числе сущеественно убывала aHTH-Ge2-активность (Booth и соавт. [10,11]).

McShane и Chung [67] нашли аллоиммунные анти-Ое4-антитела у сенсиби­лизированной женщины с фенотипом Ge:-2,-3,-4, Leach.

Daniels и соавт. [29] выявили анти-Ое4-антитела в сыворотке крови больного с транзиторным дефицитом гликофорина С.

Получен ряд серий МКА, специфичность которых в серологических реакци­ях соответствовала aHTH-Ge4 (Anderson и соавт. [3], Anstee и соавт. [4, 5], Dahr и соавт. [21], Daniels и соавт. [26], Smythe и соавт. [115], Telen и соавт. [123]).

Антитела Gerbich регистрировали на эритроцитах новорожденных, у кото­рых прямая антиглобулиновая проба была положительной. Их удавалось элю-ировать. Вместе с тем они не вызывали клинически выраженной ГБН, хотя в ряде случаев относились к субклассу IgG3 и положительно реагировали в те­стах с монослоем моноцитов (Peddle и соавт. [87], Reid и соавт. [91], Miller и со­авт. [68], Rosenfield и соавт. [106], Sacks и соавт. [108]).

У больного Ge:-2,-3,4, имевшего aHTH-Ge-антитела, после перелива­ния трех доз серологически несовместимых эритроцитов наблюдалась желту­ха, продолжительность циркуляции перелитых эритроцитов была уменьшена (Smart и соавт. [114]). Другому больному, имевшему анти-Ое2-антитела, пере­лили 16 доз несовместимых эритроцитов. Через 3 недели после гемотрансфу­зии признаков гемолиза in vivo не наблюдали (Mochizuki и соавт. [69]).

Проверка приживаемости несовместимых эритроцитов in vivo в большинстве случаев показала, что антитела Gerbich не относятся к трансфузионно опасным (DiNapoli и соавт. [31], Nance и соавт. [76], Pearson и соавт. [86], Tilley и соавт. [124]).

Один образец aHTH-Ge-антител реагировал с эритроцитами Rh u, -D- и не­которыми из других вариантов Rh-Hr (Issitt и соавт. [41]).

Описаны аутоантитела Gerbich. В 4 случаях они вызвали тяжелую форму ау­тоиммунной гемолитической анемии. В 3 из них аутоантитела имели anra-Ge2-специфичность (Gottsche и соавт. [35], Reynolds и соавт. [105], Sererat и соавт. [109]), в одном - anra-Ge3 (Shulman и соавт. [111]). В одном случае аутоантитела относились к IgA (Gottsche и соавт. [35]), в другом - к IgM (Sererat и соавт. [109]). У одного больно­го Ge+ с наличием аутоантител airra-Ge2 прямой антиглобулиновый тест был отри­цательным, аутоантитела выявлялись только после их элюции с эритроцитов (Poole и соавт. [89]). Методом иммуноблоттинга с двумя образцами аутоантител anra-Ge2 было показано, что они взаимодействуют только с гликофорином С. Это отличает их or большинства аллоиммунных антител той же специфичности, которые реагируют с эпитопами Ge2 на гликофорине D (Poole и соавт. [89], Reid и соавт. [104]). У больных, имевших аутоантитела aHra-Ge2, экспрессия антигена Ge2 была снижена.

Аутоантитела анти-ОеЗ в иммуноблоттинге взаимодействовали с гликофори-нами обоих типов и по этому свойству имели сходство с аллоиммунными анти-Ge3-антителами (Reid и соавт. [104]).

Обнаружены аутоантитела с анти-Ое4-подобной специфичностью у пациент­ки Ge:2,3,4, страдавшей апластической анемией. Эритроциты больной имели эл­липсоидную форму. Аутоантитела не вызывали гемолиза in vivo (Beattie, Sigmund [7], Daniels и соавт. [29]). Они реагировали с гликофоринами GPC, GPC.Ge и GPC. Yus, с гликофорином D не реагировали (Daniels и соавт. [29]). Количество глико­форина С в эритроцитах было снижено, гликофорина D - нормальное. Через 2 года аутоантитела исчезли, содержание глифорина С в эритроцитах нормализова­лось, эллиптоцитоз не наблюдался. Тем не менее сыворотки из ранее полученных проб продолжали реагировать с эритроцитами женщины (Daniels и соавт. [29]).

Описан необычный случай, когда у больной женщины были найдены анти-Ое2-антитела, при этом ее эритроциты агглютинировались двадцатью образцами аллоиммунных сывороток anra-Ge2, двумя сыворотками, содержавшими аутоан­титела aHTH-Ge2, четырьмя сыворотками amn-Ge3 и одной сывороткой aHra-Ge4. Эритроциты больной не реагировали с собственной сывороткой, одной сыворот­кой aHTH-Ge2, одной сывороткой aHTH-Ge3 и одной сывороткой, содержавшей ау­тоантитела anra-Ge4. Эритроциты больной содержали гликофорины С, D и GPC. Ge. С помощью молекулярно-генетических методов было показано, что больная имела два очень редких гена GYPC. Один из них (GPC. Ge-подобный) кодировал гликофорин GPC.Ge, другой имел мутацию А 173 Т в экзоне 3. Мутация приводи­ла к замене аспарагина на валин в позиции 58 гликофорина Сив позиции 37 гли­кофорина D. Антитела, выявленные у больной, реагировали с гликофорином С, имеющим аспарагиновую кислоту в положении 58. С гликофорином, имеющим в этой позиции валин, антитела больной не реагировали (King и соавт. [49]).

Получено несколько серий моноклональных антител, распознающих Gerbich-подобные антигены на гликофорине С, расположенные вблизи области

N-гликозилирования. В серологических реакциях они проявляли себя как анти-

Ge4 (Anderson и соавт, [3], Anstee и соавт. [4, 5], Dahr и соавт. [21], Daniels и со­авт. [26], Loirat и соавт. [56], Reid и соавт. [96], Smythe и соавт. [115], Telen и соавт. [123], Uchikawa и соавт. [126], Villeval и соавт. [128]). Большинство рас­познаваемых этими антителами эпитопов содержало метионин в позиции 1, в формировании некоторых эпитопов участвовали аминокислоты в позиции 16-23 (Reid и соавт. [96], Uchikawa и соавт. [126]).

Мышиные МКА aHTH-Ge2 связывались с гликофорином С (Reid и соавт. [96, 102]) или обоими гликофоринами одновременно.

Показано, что МКА aHTH-Ge2 распознают аминокислоты в позиции 36-39 и 31-40 (Janvier и соавт. [43], Reid и соавт. [96]). Один образц МКА aHTH-Ge2 ре­агировал с гликофорином GPC.Ge, однако с эритроцитами Ge: -2,-3,4 (Gerbich) реакции не было (Janvier и соавт. [43]). Другой образец МКА amrH-Ge2 класса IgM распознавал эпитоп, расположенный в последовательности 15-22 на гли­кофорине С, но при этом не реагировал с эритроцитами Ge:-2,-3,4 (Loirat и соавт. [55]). МКА показывали перекрестные реакции с эпитопом в последова­тельности 22-27, расположенной в цитоплазматическом N-терминальном доме­не протеина полосы 3.

Получено несколько мышиных МКА со специфичностью aHTH-Ge3 (Loirat и соавт. [56, 57], Smythe и соавт. [115])..

К системе Gerbich отнесены 4 редких антигена: Wb, Lsa, Апа и Dha, получив­шие обозначения GE5, GE6, GE7 и GE8. Они были включены в систему Gerbich в основном по результатам биохимических исследований, в которых было уста­новлено место их расположения на гликофоринах С и D.

В эритроцитах обладателей редких антигенов Gerbich наряду с атипичными гликофоринами, несущими указанные редкие антигены, содержатся нормаль­ные гликофорины С и D. Индивиды, гомозиготные по редким антигенам, не вы­явлены.

Wb

Антиген Wb (Webb) описали Simmons и Albrey [112] в 1963 г. Антитела анти-Wb присутствовали в одной из сывороток для определения группы крови АВО. Три образца aHTH-Wb-антител обнаружено при проведении скрининга 7544 сы­вороток (Bloomfield и соавт. [9], Race, Sanger [90]).

На эритроцитах Wb+ гликофорин С частично замещен атипичным гликофо­рином (GPC.Wb), имеющим более низкую мол. массу (на 3 кДа ниже, чем гли­кофорин С) (Macdonald, Gerns [60], Reid и соавт. [101]).

В этироцитах лиц Wb- указанный атипичный гликофорин отсутствует. Однако обработка эритроцитов Wb- эндогликозилазой F, которая отщепляет N-связанные олигосахариды, приводила к уменьшению мол. массы гликофори­на С до значений, соответствующих таковым у GPC.Wb. Обработка эндоглико­зилазой F гликофорина GPC.Wb не оказывала на него влияния.

У лиц Wb+ выявлена мутация А 23 G в экзоне 1 гена GYPC, ведущая к заме­щению аспарагиновой кислоты серином в позиции 8 молекулы гликофорина С (Chang и соавт. [13], Telen и соавт. [122]).

У лиц Wb- аспарагиновая кислота в положении 8 N-гликозилирована, что обусловливает большую мол. массу нормального гликофорина С по сравнению с атипичным гликофорином GPC.Wb, который в этой точке не N-гликозилирован. Неизвестно, подвергается ли аспарагиновая кислота в поло­жении 8 О-гликозилированию, что, возможно, могло бы привести к появлению нового редкого антигенного эпитопа Gerbich.

Антиген Wb разрушается трипсином и сиалидазой, но устойчив к химотрип-сину (Macdonald, Gerns [60], Reid и соавт. [95,101]).

Lsa

Антигены Lsa (Lewis II) и Rla при сравнении оказались одним и тем же анти­геном (Kornstad и соавт. [50, 51]). Он выявляется у финнов и негров с частотой около 2 %, у других народов он встречается реже (табл. 20.5).

Анти-Ь8а-антитела впервые выявлены в анти-В-реагенте для определения группы крови АВО. Другие образцы идентифицированы в сыворотках с ком­бинированными антителами (Kornstad [50]), а также при выполнении проб на индивидуальную совместимость перед гемотрансфузией (Clark, Dorman [14]). Антитела анти-Ls3 в одном случае сопровождали ГБН, потребовавшую для ле­чения обменного переливания крови, однако их причинная роль в ГБН осталась недоказаной (Sistonen [ИЗ]). Один образец arnn-Ls* найден при скрининге 4000 сывороток европеоидов (Kornstad и соавт. [51], Race, Sanger [90]). При обсле­довании 44 ООО доноров японцев найдено 19 образцов сывороток с антителами aHTH-Lsa (Onodera и соавт. [82]).

Таблица 20.5

Распределение редких антигенов Gerbich у разных народов

Антиген

Популяция

Количество

Частота, %

Источник

обследованных

из них Ge+

Wb (GE5)

Белые австралийцы

3 550

2

0,06

[112]

 

Англичане

15 815

3

0,02

[90]

 

Валлийцы

10 117

8

0,08

[9]

 

Японцы

3 470

0,00

[9,40,75]

Lsa (GE6)

Финны

1 113

18

1,62

[15,90]

 

Норвежцы

7 151

8

0,11

[50]

 

Американские негры

ПО

1

0,91

[90]

 

Негры Вест-Индии

878

9

1,03

[90]

 

Негры Западной Африки

81

2

2,04

[90]

 

Японцы

200 000

8

0,004

[82]

 

Англичане

5 887

0,00

[90]

Ana (GE7)

Финны

10 000

6

0,06

[34]

 

Шведы

3 266

2

0,06

[34]

Dha (GE8)

Датчане

2 493

0,00

[45]

Антиген Lsa чувствителен к действию трипсина, но устойчив к фицину и си-алидазе (Macdonald и соавт. [59]). Ассоциация фактора Lsa с системой Gerbich установлена по наличию на эритроцитах лиц Ls(a+) необычных молекул гли­кофоринов С и D в дополнение к нормальным. Необычные гликофорины имели мол. массу, превышающую на 5,5 кДа мол. массу нормальных гликофоринов С и D (Macdonald и соавт. [59]).

Указанные атипичные гликофорины реагировали с антителами анти-веЗ. Гликофорин GPC.Ls3 взаимодействовал с МКА aHTH-Ge4 и связывал антите­ла aHTH-Ge2.       Ш

У лиц Ls(a+) выявлена дупликация экзона 3 гена GYPC. Присутствие второго экзона 3 объясняет повышенное содержание в эритроцитах Ge3+ликофорина GPC.Lsa и гликофорина GPD.Lsa.

Предполагается, что возникновение фенотипов Ge:-2,3,4 и Ge:-2,-3,4 явля­ется результатом кроссинговера участков с делециями в экзонах 2 и 3 (Colin и соавт. [18], High и соавт. [39]). Неравновесный кроссинговер ведет к образова­нию гена GYPC с удвоением и выпадением отдельных участков экзонов 2 и 3. Удвоение экзона 3 приводит к синтезу необычной аминокислотной последова­тельности, которую, очевидно, и распознают анти-Ь8а-антитела. Синтетический пептид (TPTIMDIWIA-EPDRG), представляющий собой 11 аминокислот, ко­дируемых областью У экзона 3, и 5 аминокислот, кодируемых областью 5', ин-гибировал активность анти-Ь8а-антител (Stony и соавт. [119]).

Удвоение экзона 2 не приводило к какой-либо необычной аминокислотной последовательности в гликофорине и не сопровождалось появлением новой ан­тигенной специфичности Gerbich.

Моноклональные антитела к одному из эпитопов гликофорина С (СВС-96) реагировали с эритроцитами Ls(a+) сильнее и в существенно большем разведе­нии, чем с эритроцитами Ls(a-).

Onodera и соавт. [82], Uchikawa и соавт. [125, 126] исследовали эритроци­ты 200 ООО доноров японцев с помощью МКА анти-СВС-96 и нашли 60 образ­цов эритроцитов, дававших сильные положительные реакции; 8 из них были Ls(a+). Среди указанных 8 образцов в 1 образце эритроцитов экспрессия анти­гена Lsa была особенно высока. Эритроциты содержали необычные гликофори­ны С и D (GPC.KS и GPD.KS), отличавшиеся от гликофоринов GPC.Ls3 и GPD. Lsa большей (на 6 кДа) мол. массой. Молекулярно-генетическое исследование показало утроение экзона 3 гена GYPC. У 40 (0,02 %) лиц выявлено удвоение экзона 2 GYPC вследствие неравновесного кроссинговера. В отдельных случаях кроссинговер сопровождался делецией части экзона 2, что обусловливало воз­никновение фенотипа Ge:-2,3,4. У 6 (0,003 %) лиц указанные выше авторы вы­явили учетверение экзона 2, которое, как и ожидали авторы, не сопровождалось появлением качественно новых антигенов Gerbich (High и соавт. [39]).

Апа

Редкий антиген Ana (Ahonen) описан Furuhjelm и соавт. [34]. Его часто­та составляет 0,06 % среди финнов и шведов. Антитела анти-Апа имели есте­ственное происхождение и встречались с частотой 1 : 1000 среди здоровых лиц (Furuhjelm и соавт. [34]).

Антиген Апа разрушался под воздействием трипсина, папаина и сиалидазы.

Daniels и соавт. [28] посредством иммуноблоттинга с выделенными из эри­троцитов Ап(а+) гликофоринами показали, что антиген Апа располагает­ся в гликофорине D, а в гликофорине С он отсутствует. При анализе кДНК 2 лиц Ап(а+) выявлена нуклеотидная замена G 67 Т в экзоне 2. Данная мутация приводила к замене аланина на серии в позиции 23 гликофорина С и позиции 2 гликофорина D. Результаты титрования анти-Ое2-антител с использованием эритроцитов Ап(а+) и Ап(а-) указывали на то, что гликофорин GPD.Ana вариа­белен. Некоторые образцы анти-Ое2-антител с ним не реагировали.

Dha

Антитела анти-Dh* обнаружили Jorgensen и соавт. [45] у датчанина при про­ведении пробы на индивидуальную совместимость перед гемотрансфузи-ей. Антитела относились к IgM и, судя по анамнезу реципиента, имели есте­ственное происхождение. Вскоре найдены еще 2 донора, имевших анти-ОЬа-антитела, что позволило Spring и соавт. [117] обследовать три поколения одной английской семьи и выявить 8 человек Dh(a+).

Антиген Dha оказался устойчив к действию химотрипсина. Обработка эри­троцитов трипсином, фицином, папаином, проназой и сиалидазой его разруша­ла (Jorgensen и соавт. [45], Spring и соавт. [117]).

Посредством иммуноблоттинга с использованием специфических антител и гликофорина, выделенного из эритроцитов, показано, что антигенные детерми­нанты Dha расположены на гликофорине С. На гликофорине D антиген Dha от­сутствует, поскольку контролирующий его кодон расположен вне участка, обе­спечивающего синтез гликофорина D (Spring [118]).

При обследовании 2 сибсов Dh(a+) с использованием молекулярно-генетических методов выявлена нуклеотидная замена С 40 Т в экзоне 1 гена GYPC и соответственно замещение лейцина на фенилаланин в позиции 14 (King и соавт. [46]).

Антиген Dha не разрушался эндогликозидазой F и не был N-гликозилирован в позиции 8, которую занимает аспарагиновая кислота (Spring [118]). Тот факт, что антиген Dha чувствителен к сиалидазе, дал основание полагать, что для формирования эпитопов Dha необходимо О-гликозилирование гликофорина С. Искусственно сконструированный пептид NSTAWPFSLEPNPG, повторяющий последовательность 8-21 гликофорина GPC.Dha, специфически ингибировал анти-011а-антитела (Stony и соавт. [119]).

GEIS

В 2004 г. появилось краткое сообщение Yabe и соавт. [130] о выявлении у японской женщины антител к редко встречающемуся антигену - IS. Авторы установили, что антитела открывают эпитопы, расположенные на гликофоринах С и D. Экспрессия антигена была обусловлена заменой треонина на аспарагин в положении 32 гликофорина С и позиции 11 глифокорина D. Указанная мута­ция явилась результатом замещения С 95 А. Антиген обнаружен только у япон­цев. Его частота менее 0,1 %. В 2004 г. указанный антиген включен в систему Gerbich с обозначением GEIS (GE9).

Gerbich-отрицательные фенотипы у европеоидов крайне редки. При обследо­вании более 45 тыс. европейцев Gerbich-отрицательный фенотип выявлен лишь у одного (табл. 20.4). Существенно чаще люди, лишенные антигенов Gerbich, встречаются среди жителей Папуа - Новой Гвинеи.

Многие Gerbich-отрицательные лица выявлены в связи с присутствием в сы­воротке их крови антител Gerbich (Anstee и соавт. [5], Barnes, Lewis [6], Daniels

и соавт. [29, 3], McLouglin, Rogers [66], Muller и соавт. [74], Nunn и соавт. [78], Okubo и соавт. [81], Peddle и соавт. [87], Reid и соавт. [91, 98], Rosenfield и соавт. [106], Rountree и соавт. [107], Sacks и соавт. [108]).

Фенотип Yus (Ge: -2,3,4) встречается реже, чем Ge:-2,-3, но такое соотно­шение может отражать лишь неодинаковую способность лиц с указанным фено­типом к антителообразованию (Daniels [25], Reid и соавт. [91]).

Лица Ge:-2,3,4 были обнаружены среди арабов, турок-киприотов и евреев, а также у негров.

Исследования посредством SDS-PAGE и иммуноблоттинга с МКА показано, что эритроциты Ge:-2,3,4 не содержат гликофорины С и D. Однако они несут гликофорин-С-подобную структуру с мол. массой 32,5-36,5 кДа, промежуточ­ную между гликофоринами С и D (Anstee и соавт. [5], Dahr и соавт. [23], Reid и соавт. [94]). В эритроцитах гетерозигот GYPC'/GYPC. Yus гликофорины С и D присутствуют (Reid и соавт. [ 102]).

Анализ геномной и кодирующей ДНК показал, что лица Ge:-2,3,4 гомози­готны по гену GYP С. Yus, в котором экзон 2 подвергся делеций (Chang и соавт. [13], High и соавт. [39], Johnson, Daniels [44]). Продуктом указанного гена яв­ляется гликофорин-С-подобный протеин без аминокислот в позициях 17-35, экспрессия антигенов Ge3 и Ge4 при этом сохранена. Вторая стартовая точка трансляции (Met 22) отсутствует, поэтому не происходит синтеза гликофорина D, несущего антиген Ge2.

Локализация эпитопов Ge2-4 на гликофорине С и D

Локализация эпитопов Ge2-4 на гликофорине С и D

Частота Gerbich-отрицательных фенотипов у разных народов

Реагент, использован­ный при обследовании

Популяция

Количество обследован­ных

Количество лиц Ge-

Источник

AHTH-Ge2

Англичане, датчане

28 331

[66,90,106]

Анти-веЗ

Жители Нью-Йорка

11000

[106]

 

Французы

5 912

1

[74,90]

Всего:

45 243

1

 

AHTH-Ge2

Жители Папуа - Новой Гвинеи:

 

провинция Сепик

748

182

[П]

 

провинция Моробе

1014

517

 

Всего:

1 762

699

 

Анти-Ge (точная

специфичность

неизвестна)

Жители Таиланда

4 253

1

[12]

Анти-Ое2

Японцы

22 ООО

[81]


Фенотип Ge:-2, 3, 4 может быть также результатом гетерозиготности по GYPC.Yus/GYPC.Ge (Loirat и соавт. [58], Moulds и соавт. [72]). У 5 из 10 лиц Ge:-2, 3 определялись оба типа гликофоринов - Yus и Ge (Moulds и соавт. [72]).

Фенотип Ge:-2,-3,4 является типичным Gerbich-отрицательньш. Он оказал­ся полиморфным в некоторых районах Папуа - Новой Гвинеи (Booth, McLouglin и соавт. [11]). В других географических зонах земного шара фенотип Ge:-2,-3 встречается крайне редко, лишь в единичных случаях он был найден у европео­идов и негроидов, а также у монголоидов (японцев) и австралоидов (полинезий­цев). Посемейные исследования показали, что гены, обусловливающие фенотип Ge:-2,-3, передаются по наследству (Nunn и соавт. [78], Okubo и соавт. [81], Reid и соавт. [100,102], Rosenfield и соавт. [106]).

Подобно эритроцитам Ge:-2,3,4, эритроциты Ge:-2,-3 не содержат глико­форины С и D, однако несут гликофорин-С-подобную структуру GPC.Ge с мол. массой 30,5-34,5 кДа, несколько меньшей по сравненю с мол. массой GPC.Yus. По электрофоретической подвижности вещество GPC.Ge занимает промежу­точное положение между гликофоринами С и D (Anstee и соавт. [5], Dahr и со­авт. [23], Reid и соавт. [94]). Гликофорин Gerbich-типа (GPC.Ge) содержит анти­ген Ge4, антиген Ge3 в нем отсутствует (Anstee и соавт. [5], Reid и соавт. [94]). В отличие от гликофоринов С, D и GPC.Yus, GPC.Ge устойчив к действию трип­сина (Anstee и соавт. [5]). Моноклональные антитела к GPC.Ge (aHTH-Ge4) аг­глютинируют эритроциты Ge:-2,-3,4, обработанные трипсином. Они также аг­глютинируют эритроциты лиц, гетерозиготных по гену Ge~2,~3,4.

Фенотип Ge:-2,-3,4 возникает в результате делеций экзона 3 GPC (Colin и соавт. [18], Chang и соавт. [13], High и соавт. [39], Loirat и соавт. [58], Serjeantson и соавт. [ПО]). Аллель GPC.Ge кодирует гликофорин-С-подобную структуру, лишенную аминокислот в положениях 36-63. GPC.Ge несколько меньше глико­форина GPC.Yus, поскольку экзон 2 лишен вставки из 27 нуклеотидов, присут­ствующей в экзоне 3.

Еще один Gerbich-отрицательный фенотип, Ge:-2,-3,-4, получил обозначе­ние Leach. Он является истинно нулевым фенотипом: эритроциты лиц с указан­ной редкой группой крови лишены всех антигенов системы Gerbich. В литера­туре имеются описания шести лиц Ge:-2,-3,-4. Все они оказались европеоида­ми (англичане, американцы) (Anstee и соавт. [5], Daniels и соавт. [30], McShane, Chung [67], Reid и соавт. [98], Rountree и соавт. [107]).

В двух семьях удалось показать наследование рецессивных генов, обусловливающих возникновение фенотипа Ge:-2,-3,-4 (Daniels и соавт. [30], Reid и соавт. [98]). На эритроцитах лиц с этой крайне редкой группой крови гликофорины С и D полностью отсутствуют (Anstee и соавт. [5], Daniels и соавт. [30], High и соавт. [39], Reid и соавт. [94, 98]).  

Фенотип Leach (Ge:-2,-3,-4) может быть обусловлен разными причина­ми. У 5 не состоящих в родстве лиц, выявлена делеция экзона 3 и 4 гена GYPC (High и соавт. [39], Johnson, Daniels [44], Telen и соавт. [121], Winardi и соавт. [129]). В то же время из ретикулоцитов лиц Ge:-2,-3,-4 были выделены обыч­ные транскрипты гена GYPC (Winardi и соавт. [129]).

У другого индивида Ge:-2,-3,-4 выделен полноценный ген GYPC, одна­ко при секвенировании экзона 3 отмечена мутация, образующая стоп-кодон в позиции 56 (Telen и соавт. [121]). При этом не транслировалась большая часть экзона 3 и весь экзон 4. Тем не менее у обследуемых был выявлен небольшой фрагмент с мол. массой 12 кДа, напоминавший терминальную часть гликофо­ринов С и D (Pinder и соавт. [88]). В связи с этим высказано предположение, что трансляция дефектного гена GYPC может начинаться в других точках.

Имеется несколько сообщений о низкой экспрессии на эритроцитах Ge:-2,-3 антигенов Kell. Степень подавления у индивидов Ge:-2,-3 варьиро­вала (Anstee и соавт. [5], Daniels и соавт. [25, 30], McShane, Chung [67], Nash и соавт. [77], Okubo и соавт. [81]). Снижение экспрессии отмечено в отноше­нии часто встречающихся антигенов Kell, в также антигена KEL1. У одного ин­дивида отмечена слабая экспрессия антигена KEL11 (Daniels [25]), выражен­ность других антигенов соответствовала норме. В 9 из 11 образцов эритроцитов Ge:-2,-3 отмечена слабая выраженность антигенов Kell. В то же время шесть образцов эритроцитов Ge:-2,3 имели нормальную экспрессию этих антигенов.

У 4 лиц Ge:-2,-3,-4 экспрессия антигенов Kell была слабой (Anstee и соавт. [5], Daniels и соавт. [30], McShane, Chung [67]).

Фенотипическая зависимость антигенов Kell от системы Gerbich реализует­ся, по-видимому, не на генетическом уровне, поскольку гены, контролирующие синтез вещества Gerbich и вещества Kell, расположены на разных хромосомах и непосредственное влияние их друг на друга исключено.

 

 

 

В 1960-х годах полагали, что существует один антиген Gerbich, выявляемый сывороткой миссис Gerbich и двумя другими однотипно реагирующими сыворот­ками. Этот антиген был описан Rosenfield и соавт. [106] и позднее получил обо­значение Ge3. В 1961 г. Barnes и Lewis [6] нашли еще один антиген этой систе­мы - Ge2, выявляемый сывороткой миссис Yussef. И наконец, в середине 80-х го­дов Anstee и соавт. [5], Daniels и соавт. [26], McShane и Chung [67] обнаружили антитела, идентифицирующие третий часто встречающийся антиген - Ge4.

Ge2, Ge3 и Ge4

Как установили Barnes и Lewis [6], эритроциты миссис Yussef, жительни­цы Кипра турецкого происхождения, агглютинировались сывороткой Gerbich, но не реагировали с сыворотками анти-Ge, полученными от других лиц Ge-. ыворотка миссис Yussef содержала антитела, реагировавшие со всем образцами эритроцитов за исключением собственных эритроцитов и эритро­цитов трех ранее найденных Ge-отрицательных лиц. Адсорбция сыворотки Gerbich эритроцитами Yussef полностью устраняла ее активность. Таким об­разом, с помощью двух разнореагирующих сывороток (Gerbich и Yussef) были идентифицированы два антигена системы Gerbich.

Обследование жителей Папуа - Новой Гвинеи позволило получить новые дан­ные об этой системе. Booth и соавт. [10, 11] нашли Gerbich-ассоциированные ан­титела у меланезийца Ge+, которые не реагировали с эритроцитами лиц, имевших фенотип Gerbich и Yus, а также с эритроцитами 15 % меланезийцев Ge+. Стало оче­видным, что существует третья разновидность анти-Ое-антител, с помощью кото­рой можно идентифицировать три Ge-отрицательных фенотипа, каждый из кото­рых лишен одного из трех антигенов, составляющих систему Gerbich (табл. 20.3).

Таблица 20.3

Редкие фенотипы Gerbich

Носительница антител

Фенотип

Специфичность антител

Mrs. Yussef

Ge:-2,3,4

aHTH-Ge2

Mrs. Gerbich

Ge:-2,-3,4

aHTH-Ge3

Mrs. Leach

Ge:-2,-3,-4

aHTH-Ge4

Однако эритроциты меланезийца Ge:-1,2,3 и его анти-Gel-сыворотка вскоре стали недоступны. Соответственно, меланезийский вариант Gerbich-отрицательного фенотипа (Ge:-1,2,3) и анти-Gel-антитела не вошли в класси­фикацию и больше не используются (Booth и соавт. [11,61], Daniels [24]).

Anstee и соавт. [5] и Daniels и соавт. [26] обнаружили, что некоторые иссле­дованные ими моноклональные антитела обладали Gerbich-ассоциированной специфичностью. Эти антитела реагировали со всеми образцами эритро­цитов Ge+ и Ge-, включая эритроциты Ge:-2,-3. В то же время были най­дены образцы эритроцитов Ge:-2,-3, которые не реагировали с Gerbich-ассоциированными МКА (Anstee и соавт. [4, 5]). Этот Gerbich-отрицательный фенотип получил название Leach. Антитела, имевшиеся у миссис Leach, дава­ли реакции, сходные с реакциями Gerbich-ассоциированных МКА. Антиген, открываемый ими, получил обозначение Ge4 (McShane, Chung [67]). Фенотип Leach обозначен в цифровой номенклатуре как Ge:-2,-3,-4. Все другие образ­цы эритроцитов содержат антиген Ge4 (см. табл. 20.3).

Посредством иммуноблоттинга с использованием нескольких образцов анти-Ое2-антител показано, что антиген Ge2 распологается на гликофорине D (рис 20.6). Гликофорин С не содержит этот антиген (Dahr и соавт. [22], Reid и соавт. [94]). Эпитопы Ge2 расположены на N-терминальном пептиде гликофорина D (аминокис­лоты в позициях 1-27) (Dahr и соавт. [22]). Обработка эритроцитов трипсином или папаином разрушает антиген Ge2, в то время как химотрипсин и проназа на него не действуют (Daniels [25]). Примерно половина образцов анти-Ое2-антител реагирова­ла слабее с эритроцитами, обработанными сиалидазой (Daniels [25]).

Поскольку гликофорин D является укороченным аналогом гликофорина С анти-Ое2-антитела могут распознать аминокислотную последовательность, если она находится на N-терминальном участке гликофорина D, но не на гомологич­ном участке гликофорина С. Вместе с тем в образовании эпитопа Ge2 могут уча­ствовать свободные аминогруппы гликофорина D. Некоторые образцы анти-Ое2-антител не реагируют с эритроцитами, обработанными уксусным ангидридом. Это дает основание полагать, что аминогруппы также вовлечены в формирова­ние эпитопов, распознаваемых анти-Ое2-антителами. Анти-Ое2-антитела, по-видимому, являются гетерогенными и распознают эпитопы на разных участках гликофорина D, в том числе на N-терминальном участке (Daniels и соавт. [28]).

Подобно антигену Ge2, антиген Ge3 разрушается трипсином. К химотрипси-ну и проназе он устойчив. В отличие от Ge2 антиген Ge3 устойчив к действию папаина (Mohammed и соавт. [70]). Соответственно эритроциты, обработанные папаином, можно использовать для дифференциации антител aHTH-Ge2 от анти-Ge3 при отсутствии эритроцитов редкого фенотипа Ge:-2,3,4.

Методом иммуноблоттинга с МКА было показано, что эпитопы Ge3 локали­зуются на гликофоринах С и D (рис. 20.6) (Dahr и соавт. [22], Loirat и соавт. [56, 57], Reid и соавт. [94], Smythe и соавт. [115]). Аллоиммунные анти-веЗ-антитела удавалось элюировать с гликофоринов обоих типов (Reid и соавт. [94]).

Антиген Ge3 кодируется экзоном 3 GYPC. При делеций указанного участка ан­тиген Ge3 отсутствует. Делеция экзона 2 не приводит к исчезновению экспрессии Ge3. Экзоны 2 и 3 имеют большое сходство и различаются лишь вставкой из 27 нуклеотидов, кодирующих аминокислоты в позициях 42-50 на гликофорине С и 21-29 - на гликофорине D, поэтому эпитопы Ge3 присутствуют именно в указан­ных областях соответствующих гликофоринов (Dahr и соавт. [22]).

Антиген Ge4 располагается в N-терминальной части гликофорина С (см. рис. 20.6). На гликофорине D он отсутствует (Anstee и соавт. [4, 5], Dahr и соавт. [21], Daniels и соавт. [29]).

Детальный анализ специфических МКА показал, что некоторым из них для свя­зывания эпитопами Ge4 требовалась аминогруппа в позиции Metl на гликофорине С. В то же время другие МКА распознавали эпитопы среди первых 20 аминокислот гликофорина С и Metl в реакцию вовлечен не был (Anstee и соавт. [5], Dahr и соавт. [21]). Более значимым для связывания антител оказалось О-гликозилирование гли­кофорина С. Антиген Ge4 разрушается трипсином и папаином.

Новости медицины

Рассматривая статины?

Много миллионов человек в мире принимают статины, но исследования показывают, что только 55% из тех, кому рекомендуется принимать статины, принимают их. Это большая проблема, потому что исследования также показывают, что те из группы...

Высокое АД во время беременности может повлиять на сердце женщины в долгосрочной перспективе

Связанное с беременностью высокое кровяное давление может привести к долгосрочным сердечным рискам, показывают новые исследования.

Отмена приема опиоидов по рецепту имеет болезненные последствия для пациентов

Кэролин Консия, столкнулась с более серьезными последствиями репрессий против назначения опиоидов, когда узнала, почему сын ее подруги покончил с собой в 2017 году.

Психическое заболевание не является причиной массовых расстрелов

Новое исследование показывает, что психические заболевания не являются фактором большинства массовых расстрелов или других видов массовых убийств.




Тесты для врачей

Наши партнеры