В 1960-х годах полагали, что существует один антиген Gerbich, выявляемый сывороткой миссис Gerbich и двумя другими однотипно реагирующими сыворотками. Этот антиген был описан Rosenfield и соавт. [106] и позднее получил обозначение Ge3. В 1961 г. Barnes и Lewis [6] нашли еще один антиген этой системы - Ge2, выявляемый сывороткой миссис Yussef. И наконец, в середине 80-х годов Anstee и соавт. [5], Daniels и соавт. [26], McShane и Chung [67] обнаружили антитела, идентифицирующие третий часто встречающийся антиген - Ge4.
Ge2, Ge3 и Ge4
Как установили Barnes и Lewis [6], эритроциты миссис Yussef, жительницы Кипра турецкого происхождения, агглютинировались сывороткой Gerbich, но не реагировали с сыворотками анти-Ge, полученными от других лиц Ge-. ыворотка миссис Yussef содержала антитела, реагировавшие со всем образцами эритроцитов за исключением собственных эритроцитов и эритроцитов трех ранее найденных Ge-отрицательных лиц. Адсорбция сыворотки Gerbich эритроцитами Yussef полностью устраняла ее активность. Таким образом, с помощью двух разнореагирующих сывороток (Gerbich и Yussef) были идентифицированы два антигена системы Gerbich.
Обследование жителей Папуа - Новой Гвинеи позволило получить новые данные об этой системе. Booth и соавт. [10, 11] нашли Gerbich-ассоциированные антитела у меланезийца Ge+, которые не реагировали с эритроцитами лиц, имевших фенотип Gerbich и Yus, а также с эритроцитами 15 % меланезийцев Ge+. Стало очевидным, что существует третья разновидность анти-Ое-антител, с помощью которой можно идентифицировать три Ge-отрицательных фенотипа, каждый из которых лишен одного из трех антигенов, составляющих систему Gerbich (табл. 20.3).
Таблица 20.3
Редкие фенотипы Gerbich
|
Носительница антител |
Фенотип |
Специфичность антител |
|
Mrs. Yussef |
Ge:-2,3,4 |
aHTH-Ge2 |
|
Mrs. Gerbich |
Ge:-2,-3,4 |
aHTH-Ge3 |
|
Mrs. Leach |
Ge:-2,-3,-4 |
aHTH-Ge4 |
Однако эритроциты меланезийца Ge:-1,2,3 и его анти-Gel-сыворотка вскоре стали недоступны. Соответственно, меланезийский вариант Gerbich-отрицательного фенотипа (Ge:-1,2,3) и анти-Gel-антитела не вошли в классификацию и больше не используются (Booth и соавт. [11,61], Daniels [24]).
Anstee и соавт. [5] и Daniels и соавт. [26] обнаружили, что некоторые исследованные ими моноклональные антитела обладали Gerbich-ассоциированной специфичностью. Эти антитела реагировали со всеми образцами эритроцитов Ge+ и Ge-, включая эритроциты Ge:-2,-3. В то же время были найдены образцы эритроцитов Ge:-2,-3, которые не реагировали с Gerbich-ассоциированными МКА (Anstee и соавт. [4, 5]). Этот Gerbich-отрицательный фенотип получил название Leach. Антитела, имевшиеся у миссис Leach, давали реакции, сходные с реакциями Gerbich-ассоциированных МКА. Антиген, открываемый ими, получил обозначение Ge4 (McShane, Chung [67]). Фенотип Leach обозначен в цифровой номенклатуре как Ge:-2,-3,-4. Все другие образцы эритроцитов содержат антиген Ge4 (см. табл. 20.3).
Посредством иммуноблоттинга с использованием нескольких образцов анти-Ое2-антител показано, что антиген Ge2 распологается на гликофорине D (рис 20.6). Гликофорин С не содержит этот антиген (Dahr и соавт. [22], Reid и соавт. [94]). Эпитопы Ge2 расположены на N-терминальном пептиде гликофорина D (аминокислоты в позициях 1-27) (Dahr и соавт. [22]). Обработка эритроцитов трипсином или папаином разрушает антиген Ge2, в то время как химотрипсин и проназа на него не действуют (Daniels [25]). Примерно половина образцов анти-Ое2-антител реагировала слабее с эритроцитами, обработанными сиалидазой (Daniels [25]).
Поскольку гликофорин D является укороченным аналогом гликофорина С анти-Ое2-антитела могут распознать аминокислотную последовательность, если она находится на N-терминальном участке гликофорина D, но не на гомологичном участке гликофорина С. Вместе с тем в образовании эпитопа Ge2 могут участвовать свободные аминогруппы гликофорина D. Некоторые образцы анти-Ое2-антител не реагируют с эритроцитами, обработанными уксусным ангидридом. Это дает основание полагать, что аминогруппы также вовлечены в формирование эпитопов, распознаваемых анти-Ое2-антителами. Анти-Ое2-антитела, по-видимому, являются гетерогенными и распознают эпитопы на разных участках гликофорина D, в том числе на N-терминальном участке (Daniels и соавт. [28]).
Подобно антигену Ge2, антиген Ge3 разрушается трипсином. К химотрипси-ну и проназе он устойчив. В отличие от Ge2 антиген Ge3 устойчив к действию папаина (Mohammed и соавт. [70]). Соответственно эритроциты, обработанные папаином, можно использовать для дифференциации антител aHTH-Ge2 от анти-Ge3 при отсутствии эритроцитов редкого фенотипа Ge:-2,3,4.
Методом иммуноблоттинга с МКА было показано, что эпитопы Ge3 локализуются на гликофоринах С и D (рис. 20.6) (Dahr и соавт. [22], Loirat и соавт. [56, 57], Reid и соавт. [94], Smythe и соавт. [115]). Аллоиммунные анти-веЗ-антитела удавалось элюировать с гликофоринов обоих типов (Reid и соавт. [94]).
Антиген Ge3 кодируется экзоном 3 GYPC. При делеций указанного участка антиген Ge3 отсутствует. Делеция экзона 2 не приводит к исчезновению экспрессии Ge3. Экзоны 2 и 3 имеют большое сходство и различаются лишь вставкой из 27 нуклеотидов, кодирующих аминокислоты в позициях 42-50 на гликофорине С и 21-29 - на гликофорине D, поэтому эпитопы Ge3 присутствуют именно в указанных областях соответствующих гликофоринов (Dahr и соавт. [22]).
Антиген Ge4 располагается в N-терминальной части гликофорина С (см. рис. 20.6). На гликофорине D он отсутствует (Anstee и соавт. [4, 5], Dahr и соавт. [21], Daniels и соавт. [29]).
Детальный анализ специфических МКА показал, что некоторым из них для связывания эпитопами Ge4 требовалась аминогруппа в позиции Metl на гликофорине С. В то же время другие МКА распознавали эпитопы среди первых 20 аминокислот гликофорина С и Metl в реакцию вовлечен не был (Anstee и соавт. [5], Dahr и соавт. [21]). Более значимым для связывания антител оказалось О-гликозилирование гликофорина С. Антиген Ge4 разрушается трипсином и папаином.
