Опубликовано: 22 апреля 2014

Слабый (Ье™)-фенотип

Слабая выраженность антигенов Lewis обусловлена аминокислотными замена­ми в генах, контролирующих продукцию фукозилтрансфераз [71,134,172,180].

Koda и соавт. [134] нашли у японцев Le(a-b-) 2 мутации в гене FUT3 (Leu 20 —> Arg, Gly 170 —> Ser). Опыты с клонированием гена Le в COS-клетках пока­зали, что замена Gly 170 —> Ser приводит к продукции неактивного фермента, тог­да как при замене Leu 20 щ Arg вырабатывалась активная фукозилтрансфераза, о чем свидетельствовало появление антигена Le^b на поверхности COS-клеток.

Mollicone и соавт. [172] также выявили мутацию Leu 20 щ Arg у индоне­зийцев Le(a-b-), которые содержали антигены Lewis в слюне. Такие же замены описаны у японцев [180] и шведов [71]. Замена аргинина на лицин приводила к экспрессии слабовыраженного антигена Lewis.

Nishihara и соавт. [179] и Mollicone и соавт. [172] описали мутацию Не 356 —» Lys. Гетерозигота по этой мутации, 18 из 19 индонезийцев Le(a-b-), не содер­жали антигенов Lewis ни на эритроцитах, ни в слюне.

Cooling и Gu [59] исследовали с помощью ПЦР 15 афроамериканцев, имев­ших фенотип Le_null, Отмечены варианты мутаций в FUT3, которые приводили к продукции неактивного фермента и в результате формировали нулевой фено­тип. Одну из мутаций (G —> А) в нуклеотиде 13 обнаружили у 50 % обследован­ных (рис. 9.3), она приводила к замене Gly 5 —£ Ser. У других обследованных обнаружили мутации G —► Т в нуклеотиде 1022, G Щ А в нуклеотиде 484, G ->

Мутации в гене FUT3 у лиц с фенотипом Lewis_nuir Двенадцать нуклеотидных замен, приводящих к продукции неактивной фукозилтрансферазы, по Cooling, Gu [59].

А в нуклеотиде 667. Они приводили к замене Cys 341 Щ Phe, Не 356 Ш Lys, ко­торые также сочетались с низкой активностью фукозилтрансферазы.

Две мутации, Trp 68 —► Arg и Thr 105 —> Met, найдены Elmgren и соавт. [71]. Для того чтобы определить их влияние на активность фукозилтрансфера­зы, Elmgren и соавт. [70] сконструировали 2 химеричных протеина: FUT3 с Trp 68 —> Arg и FUT3 с Thr 105 —> Met. При первой замене продуцировался фермент с низкой активностью, тогда как при второй замене активность фермента соот­ветствовала норме. Авторы пришли к выводу, что гомозиготность по Trp 68 —* Arg дает фенотип Le(a-b-).

Orntoft и соавт. [187] описали мутацию (С 445 А) у человека Le(a-b-), боль­ного раком. Эта мутация приводила к продукции метионина в позиции 146, од­нако такая же мутация обнаруживалась и у здоровых лиц.

Mollicone и соавт. [171] установили, что примерно 9 % жителей острова Ява не имеют <х(1,3)-фукозилтрансферазы (FUT6), обычно присутствующей в плаз­ме человека, однако содержат антигены Lewis.

При клонировании гена FUT5 от лиц с дефицитом а(1,3)-фукозилтрансферазы найдены 3 точки мутаций: Arg 173 Щ Cys, Pro 187 Ш Leu, Thr 388 —► Met, кото­рые, однако, не сказывались на активности фермента.

При клонировании гена FUT6 выявлены замены Pro 124 —► Ser, Glu 247 —> Lys, Туг 315 —► стоп-кодон. Две последние замены приводили к продукции не­активного фермента. Замены Glu 247 т Lys и Tur 315—» стоп-кодон в FUT6, ко­торые сочетались с дефицитом а(1,3)-фукозилтрансферазы, обнаружены среди полинезийцев и шведов (Larson и соавт. цит. по [115]). Таким образом, ген FUT6 отвечает за активность <х(1,3)-фукозилтрансферазы в плазме у людей и как дру­гие гены FUT полиморфен.

Опубликовано: 22 апреля 2014

Ингибиция Lewis-антител

Lewis-антитела нейтрализуют с целью идентификации антител другой специфичности, присутствующих в сыворотке. Для этого используют об­разцы слюны, тестированные на наличие субстанций Le^a, Le^b и АВН, а так­же вытяжки из гуммиарабика или синтетические антигены Lewis (Spitalnik и соавт., цит. по [115]). Цельная слюна нередко вызывает гемолиз эритроци­тов, поэтому ее предварительно разводят раствором натрия хлорида и кипя­тят, чтобы устранить присутствующую в ней слизь. Методика подробно опи­сана П.Н. Косяковым [6] и Judd [125].

Mollison и соавт. [173] описали случай, когда пациенту Le(a-b-), имеюще­му антитела анти-Le³ + Le^b, гемолизирующие эритроциты в тестах in vitro, с це­лью нейтрализации антител ввели парентерально очищенный концентрат Le³ и Le^b. Антитела пациента были нейтрализованы in vivo, после чего ему было пе­релито несколько доз крови Le(a-b+) без каких-либо реакций. Через несколько дней антитела анти-Le³ и aHra-Le^b снова появлялись в плазме пациента, теперь уже в более сильной форме, чем до нейтрализации. Прямая проба Кумбса стала положительной, поскольку перелитые ранее эритроциты были Le(a-b+) и сен­сибилизировались антителами in vivo, однако гемолиза не наблюдалось. Вскоре циркулирующие эритроциты приобрели фенотип реципиента Le(a-b-) и пря­мая проба Кумбса стала отрицательной.

Нейтрализация антител in vivo была применена также Andorka и соавт., Pelosi и соавт. (цит. по Issitt, Anstee [115]), но широкого распространения не по­лучила: в значительной степени в связи с тем, что в этих модельных экспери­ментах даже сильные антитела, деструктирующие эритроциты in vitro, не про­являли реактогенных свойств in vivo.

Хромосомная локализация

По данным Mollicone и соавт. [172], Nishihara и соавт. [179], Kukowska-Latallo и соавт. [137], Ball и соавт. [28], Koda и соавт. [134], Lamm и соавт. [138], генный локус Lele (FUT3) расположен на коротком плече хромосомы 19 в позиции 19р13.3.

На этой хромосоме располагаются гены, кодирующие другие фукозилтранс-феразы: FUT1, FUT2, FUT5 и FUT6. Некоторые из них могут влиять на продук­цию антигенов Lewis, придавая им специфические особенности. FUT6 и FUT2 участвуют в синтезе тканевого антигена Le^y.

Ген к является молчащим аллелем гена Le. При генотипе lele Le-генспецифическая фукозилтрансфераза не вырабатывается.

На длинном плече хромосомы 19 располагаются также гены LW, Lutheran, Eh и Sese, ген пептидазы D {Pep D) и ген третьего компонента комплемента - С,.

Kukowska-Latallo и соавт. [137] клонировали ген Le в COS-клетках и полу­чили рекомбинантные фукозилтрансферазы <х(1—»3) и а(1—>4), способные син­тезировать антигены Le^a, Le^b и X (SSEA-1). Клонированные трансферазы явля­лись продуктом именно Ze-гена и были однотипны с Lewis-трансферазой, полу­ченной из человеческого молока [151,195].

Suh и соавт. [220] описали несколько мутаций в генах FUT2 и FUT3, при ко­торых антигены Lewis не вырабатывались, f'

Опубликовано: 22 апреля 2014

Большинство антител Lewis не способно разрушать эритроциты, содержа­щие соответствующие антигены, in vivo [111]. Холодовые антитела анти-Le IgM, температурный оптимум которых ниже комнатной температуры 20-22 °С, не активны при температуре тела человека. Неполные антитела анти-Le IgG, хотя и являются тепловыми, однако не вызывают посттрансфузионных ослож­нений как истинные антиэритроцитарные антитела.

Выделяют четыре причины, по которым Lewis-несовместимость не проявля­ет себя клинически [115].

Во-первых, большинство антител, особенно анти-Le¹⁵, имеет низкую актив­ность. Многие из них не реагируют с нативными эритроцитами и определяются только с помощью стандартных эритроцитов, обработанных протеолитически-ми ферментами (фицин, папайи, бромелин). Такие ферментзависимые антитела в реакциях несовместимости in vivo не участвуют.

Во-вторых, антигены Lewis, присутствующие в донорской плазме (если пе­реливают цельную кровь) и в том небольшом количестве плазмы, которое име­ется в эритроцитарном концентрате, нейтрализуют антитела Lewis реципиента. Взаимодействие антител с растворенными в плазме субстанциями происходит быстрее, чем с субстанциями, фиксированными на мембране эритроцитов, и де­струкция эритроцитов не успевает развиться.

В-третьих, перелитые эритроциты утрачивают свои антигены Lewis в плазме реципиента. Например: эритроциты Le(a-b+), перелитые реципиенту Le(a-b-), имеющему антитела анти-Le¹⁵, становятся Le(a-b-), а олигосахариды Le^b, смы­тые с эритроцитов, нейтрализуются присутствующими антителами анти-Le¹⁵.

В-четвертых, если антитела имеют специфичность aHTH-Le^bH, они спо­собны реагировать только с эритроцитами OLe(a-b+), но не эритроцитами ALe(a-b+). Таким образом, для реципиентов группы А(П), содержащих антите­ла aHTH-Le^bH, любые эритроциты А(П) будут совместимыми.

Совместимость донора и реципиента по групповым антигенам, растворен­ным в плазме крови, в трансфузиологии не учитывают.

Иммуносерологам и трансфузиологам известно, что универсальную плазму группы AB(IV), содержащую группоспецифические субстанции АВО, перели­вают в большом количестве (2-2,5 л и более) реципиентам А(И) и В(Ш), име­ющим естественные антитела против этих антигенов. Однако при этом каких-либо осложнений не наблюдают.

Антигены системы Gm при переливании плазмы также не учитывают, хотя некоторые реципиенты (по нашим подсчетам, около 5 %) содержат антите­ла против иммуноглобулинов переливаемой плазмы. Однако и в этих случаях трансфузии не сопровождаются реакциями.

По-видимому, взаимодействие растворимых антигенов с антителами не приводит к посттрансфузионным реакциям, но когда мишенью становятся нерастворимые антигены, фиксированные на эритроцитах, последние разру­шаются, что проявляется клинически в виде тяжелого посттрансфузионного осложнения.

Антигены Lewis, являясь по своей природе водорастворимыми, в основной своей массе находятся в плазме и реагируют с соответствующими антителами в жидкофазной системе. Эритроциты, содержащие антигены Lewis в значитель­но меньшем количестве, чем плазма, остаются интактными. Это, на наш взгляд, пятая причина того, почему несовместимость донора и реципиента по системе Lewis не вызывает посттрансфузионных реакций.

В экспериментах по приживлению эритроцитов, меченных Cr⁵¹, in vivo уста­новлено, что время циркуляции эритроцитов Le(a~b+) у реципиентов, имею­щих анти-Ее^ь-антитела, такое же, как у реципиентов без антител. Немедленных или отсроченных трансфузионных реакций не наблюдали. Уровень гемоглобина после переливания Ее^ь-несовместимых эритроцитов повышался как при совме­стимой трансфузии и оставался одинаковым в течение нескольких недель.

При огромном объеме трансфузиологической помощи в современной ме­дицинской практике лрансфузионные реакции, вызванные антителами анти-Le³, все-таки регистрируют (М.А. Умнова и др. [12], Krieger, Simmons [136], Brendemoen, Aas [43] и др. [160,164,191]).

Jesse, Sheek [119] описали острую гемолитическую реакцию средней тя­жести у 21-летней африканки, которой в связи с осложненным спонтанным выкидышем 4 раза перелили кровь. Перекрестные пробы на индивидуальную совместимость (тест с центрифугированием и непрямая реакция Кумбса) пе­ред каждой трансфузией были отрицательными. После 4-го переливания у женщины появились боли в пояснице, озноб, температура, гематурия. Кроме анти-Ее^ь-антител, в сыворотке женщины других антиэритроцитарных антител не обнаружено. Гемолитическая реакция была кратковременной, осложнение через 2 дня было купировано. Авторы полагали, что картина посттрансфузи­онного осложнения была вызвана анти-Ее^ь-антителами. Другие случаи гемо­литических посттрансфузионных реакций, обусловленных антителами анти-Le^b, не описаны.

Aubuchon и соавт. [26], van Loghem и соавт. (цит. по [6]) привели случаи посттрансфузионных реакций, обусловленных антителами анти-Le^х. Для та­ких реципиентов практически все доноры несовместимы. Однако даже в этих случаях, как отмечают Waheed и соавт. [233], посттрансфузионные реакции крайне редки.

В акушерской практике зарегистрированы единичные случаи гемолитиче­ской болезни новорожденных, связанные с Lewis, которые, однако, вызывали сомнение относительно их обусловленности именно этим фактором. Mollison и

соавт. [173], анализируя эти работы, не нашли достаточного клинического и ге­матологического подтверждения.

Как показали Spitalnik и соавт. [213], в 12 случаях из отобранных ими 13 пар мать - плод в крови матери присутствовали одновременно IgM и IgG анти-Ье^а-антитела, в пуповинной крови новорожденных имелись антитела анти-Le⁸ IgG, регистрируемые только высокочувствительным ферментсвя-зывающим имммуносорбентным методом. Гемолитических реакций у ново­рожденных не бвло. Полученные данные позволили авторам заключить, что антитела анти-Le³ IgM через плаценту не проходят, а антитела анти-Le^а IgG легко проникают через плаценту, однако не вызывают разрушения эритро­цитов плода, поскольку антигены Lewis у плодов и новорожденных отсут­ствуют.

Опубликовано: 22 апреля 2014

AHTH-AjLe⁵ и анти-ВЬе^ь

В 1968 г. Seaman и соавт. [206] при выполнении пробы на индивидуальную совместимость эритроцитов донора с сывороткой больного Siedler нашли ан­титела анти-А^е¹³. Сыворотка реагировала с эритроцитами, содержащими оба антигена - А_х и Le^b, но не реагировала с эритроцитами OLe(b+) и AjLe(b-), содержащими эти антигены порознь. Вскоре 2 такие же сыворотки были най­дены Grookston и соавт. [61] и Gundolf [94].

Антитела анти-А^е^ь нейтрализуются слюной всех секреторов А независи­мо от Lewis-групповой принадлежности (Grookston и соавт. [61]).

У лиц с фенотипом A₁Le^b антиген AjLe^b присутствует в слюне.

Наряду с антителами анти-А^е* встречаются антитела aHTH-BLe^b, реагиру­ющие с антигеном Le^b, когда тот присутствует на эритроцитах вместе с груп­повым антигеном В.

Антитела анти-А^е¹³ и aHTH-BLe^b направлены против олигосахаридов Le^bтипа 1, к которым добавлены имммунодоминантные сахара А или В, что и приводит к формированию антигенных детерминант, определяемых указанны­ми антителами.

Для сравнения: антитела aHTH-Le^bL реагируют только с эритроцитами 0(1), A₂Le(b+); а анти-А Le^b и aHTH-BLe^b - с эритроцитами, несущими Le^b и соот­ветствующую А- или В-детерминанту.

Tilley и соавт. [228], Crookston и соавт. [90] установили, что у людей A_tLe^bи BLe^b в плазме присутствуют гликосфинголипиды, несущие соответственно антигены AjLe^b и BLe^b. Такие лица по набору генов относятся к A¹, Le, Se и В, Le, Se соответственно. Насколько известно, ни анти-А^е^ь, ни aHTH-BLe^b не дают реакций при переливании компонентов крови (Issitt, Anstee [115]).

Анти-А^е¹¹ и анти-ВЬе^й

В 1958 г. Andresen [14], обследуя больного раком желудка с фенотипом A₂Le(a~b+), нашел антитела, которые реагировали с эритроцитами AjLe(a-b-) секреторов, менее сильно - с эритроцитами АХе(а-Ь-) секреторов. Автор пред­положил, что ген Se в отсутствие гена£е специфически видоизменяет экспрессию антигена А и что обнаруженные им антитела (известные в литературе как Magard-антитела) выявляли антиген A₁Le^d. Последующие исследования (Hirsch и соавт., 1975) подтвердили предположение Andresen. Magard-сыворотка была первой из обнаруженных сывороток со специфичностью анти-А₁Ье^с1. Эти антитела, как те­перь известно, реагируют с олигосахаридами типа 1А (производными цепей типа 1Н). Анти-А₁Ье^с1, так же как aHTH-BLe^d, не дают трансфузионных реакций.