Опубликовано: 20 апреля 2014

Серологически выявляемая М-антигенная активность обусловлена присут­ствием серина в позиции 1 и глицина в позиции 5 на экстрацеллюлярном до­мене гликофорина A (Dahr и соавт. [55]). На N-положительных клетках в этих позициях находятся лейцин и глютаминовая кислота соответственно (рис. 6.1). В экспрессии антигенов важную роль играют О-гликаны и сиаловые кислоты. Позиции 2-4 пептидной цепи гликофорина А гликозилированы (Dahr и соавт. [55], Issitt, Anstee [113], Schenkel-Brunner [223]).

Строение терминальных участков гликофорина А.

В отечественной литературе имеется 2 сообщения об аллоиммуниза­ции антигеном М в результате беременности. Выраженных клинических про­явлений ГБН при этом не наблюдали (А.А. Михайлова, ТА. Ичаловская [6], А.Е. Скудицкий [8]).

Антитела анти-М обнаруживали у детей и взрослых, перенесших бактери­альные инфекции (Као и соавт. [128]). Антитела выявляли у беременных, дети которых, как позже выяснилось, не имели антигена М. Анти-М-антитела ино­гда сопутствовали другим антителам (Rh, Kell, Kidd, Duffy) у гематологиче­ских больных, получивших многочисленные переливания компонентов крови (А. Майский, Л. Кучера [5], Gales и соавт. [77]).

Помимо естественных и аллоиммунных антител описаны аутоантитела анти-М и анти-N (Chapman и соавт. [39], Garratty и соавт. [79], Immel и соавт. [ПО], Sacher и соавт. [215]). В некоторых случаях течение аутоиммунной гемо­литической анемии, обусловленной этими антителами, было тяжелым (Garratty и соавт. [79], Immel и соавт. [ПО]).

Различают рН-зависимые и глюкозозависимые антитела анти-М и анти-N (Beattie и соавт. [22], Reid и соавт. [200]). В отличие от обычных антител, для которых кислотность среды не столь существенна, рН-зависимые анти-М и анти-К-антитела наиболее активно реагируют с эритроцитами, несущими соот­ветствующий антиген, при значении рН 6,5. Глюкозозависимые антитела прояв­ляют свое действие лишь с эритроцитами, инкубированными в растворе глюко­зы. Установлено, что активность некоторых образцов антител анти-М и анти-N ингибируется растворами мальтозы и маннита, но остается неизмененной в присутствии фруктозы, рибозы, галактозы, лактозы и сахарозы. Такие антитела выявляли главным образом у больных сахарным диабетом.

У больных почечной недостаточностью, находившихся на гемодиализе, об­наруживали особые антитела анти-N, реагирующие с эритроцитами, обработан­ными формальдегидом (Dzik и соавт. [66], Howell и соавт. [96], McLeish и со­авт. [157], Sandler и соавт. [218], White и соавт. [259]). Такие антитела были обозначены как aHra-N_form. Дальнейшие исследования показали, что anra-N_f -антитела образовались в результате модификации мембраны эритроцитов боль­ных следами формальдегида в гемодиализной системе (стерилизацию систем для гемодиализа проводили с использованием формальдегида).

AHTH-N-подобную специфичность имеют лектины растительного происхо­ждения - Vicia graminea (А.К. Туманов, В.В. Томилин [9], Prigent [190]).

К настоящему времени получено большое количество образцов моно­клональных антител анти-М и анти-N (Lisowska [149], Reid и соавт. [201]). Последние с успехом используют для фенотипирования эритроцитов, одна­ко некоторые из них, в частности анти-М, не строго специфичны и в высоких концентрациях реагируют с эритроцитами M-N+, т. е. диспецифичны. Для при­дания им анти-М-специфичности прибегают к их разведению, что вполне при­емлемо для рутинного анализа, но не для метода адсорбции - элюции. На ак­тивность моноклональных анти-М- и анти-К-антител влияют рН среды и тем­пературные условия постановки реакции. Поликлональные антитела анти-М и анти-N алло- и ксеногенного происхождения менее зависимы от этих условий.

Протеолитические ферменты, применяемые в практике иммуносерологи-ческих лабораторий (папаин, фицин, бромелин, протеаза), разрушают антиге­ны М и N, в связи с чем энзимные пробы при работе с антителами анти-М и анти-N не используют (Hirsch и соавт. [93], Issitt, Anstee [113], Race, Sanger [191], Reid и соавт. [201]).  

Опубликовано: 20 апреля 2014

Гликофорин А - одно из наиболее представительных в количественном отно­шении веществ в структуре эритроцитной мембраны (Chasis и соавт. [40], Dahr [54]). В его состав входит 131 аминокислота. На экстрацеллюлярный участок, N-домен, приходится 72 аминокислоты, на гидрофобный трансмембранный до­мен - 23 аминокислоты, на терминальный цитоплазматический, или С-домен, -36 аминокислот.

Гликофорин В имеет меньшую массу (72 аминокислоты). Он также пред­ставлен тремя доменами: экстрацеллюлярным, N-терминальным, имеющим 44 аминокислоты; гидрофобным трансмембранным, имеющим 20 аминокислот, и коротким терминальным цитоплазматическим С-доменом, состоящим из 8 ами­нокислот (Chasis и соавт. [40], Daniels [56]).

Экстрацеллюлярные домены обоих гликофоринов, А и В, интенсивно глико­зилированы.

Молекула гликофорина А содержит один N- и от 15 до 21 О-гликанов, при этом О-гликаны представлены разветвленной цепью тетрасахаридов, состоящей из сиаловой кислоты, галактозы и N-ацетилгалактозамина (Chasis и соавт. [40], Issitt, Anstee [113]).

Степень гликозилирования гликофоринов у разных лиц неодинакова. Строение О-гликанов гликофорина А во многом сходно с таковым гликофори­на В. Так, первые 26 аминокислотных остатков в экстрацеллюлярном домене гликофорина А с N-серологической активностью такие же, как и на гликофо-рине В (Blumenfeld и соавт. [29], Booth [31], Chasis и соавт. [40], Dahr [54], Schenkel-Brunner [223]). Этим объясняется N-антигенная активность гликофо­рина В, которую обозначают как ^fN^f для ее дифференциации от антигена N, на­ходящегося на молекуле гликофорина A (Issitt, Anstee [113], Judd и соавт. [127]). Трансмембранные домены гликофоринов А и В также практически идентичны между собой (Chasis и соавт. [40], Daniels [56], Schenkel-Brunner [223]).

Антигены М и N несет гликофорин А, антигены S и s расположены на гли-кофорине В (Schenkel-Brunner [223]). Количество молекул гликофорина А на 1 эритроцит составляет 800 тыс.-1 млн, гликофорида В 1170-250 тыс. (Schenkel-Brunner [223]).

Опубликовано: 20 апреля 2014

Как указывалось выше, антитела против антигенов М и N впервые были по­лучены иммунизацией кроликов эритроцитами людей. Позднее были найдены антитела анти-М и анти-N аллогенного происхождения (А. Майский, Л. Кучера [5], А.А. Михайлова, Т.А. Ичаловская [6], А.Е. Скудицкий [8], Alperin и соавт. [13], Ballas и соавт. [20], Beattie и соавт. [22], Chapman и соавт. [39], Duguid и со­авт. [65], Furlong и соавт. [73], Immel и соавт. [ПО], Као и соавт. [128]).

В 1947 г. Walsh и соавт. [257] описали антитела к антигену, связанному как с фактором М, так и N. Антитела получили обозначение анти-S от названия го­рода, где были обнаружены - Сидней, Австралия. Четыре года спустя, в 1951 г., Levine и соавт. [145] нашли сыворотку с антителами к антигену, антитетично­му антигену S. Она реагировала положительно со многими образцами эритро­цитов, но S-отрицательные клетки неизменно давали положительную реакцию. Так был открыт фактор s, обозначенный строчной буквой из-за его антитетич­ной связи с антигеном S.

При обследовании представителей различных рас и этнических групп выяв­лены особенности в распределении антигенов М, N, S и s (табл. 6.2). В боль­шинстве изученных популяций частота гена Мсоставила 50-60 %, N- 40-50 %. Частота гена М оказалась выше среди жителей стран Балтии и европейской ча­сти России [2-4, 7, 9, 43, 45, 173, 191, 219-222]. Этот ген реже выявляли (около 2 %) среди островитян Тихого океана и австралийских аборигенов. Частота гена S оказалась низкой среди жителей Дальнего Востока и у австралийских абори­генов (Mourant и соавт. [173]).

Посемейные исследования показали, что антигены MN и Ss фенотипически и генетически связаны между собой и являются продуктами двух частично сце­пленных генных локусов - MN и Ss (Cleghorn [43, 45], Mourant и соавт. [173], Race, Sanger [191], Sanger и соавт. [220]).

В рандомизированных выборках чаще встречается генный комплекс Ns, не­сколько реже - Ads, а комплекс MS - еще реже. Наиболее редким был гаплотип NS. Эти 4 генных комплекса найдены у представителей практически всех изу­чавшихся популяций (Mourant и соавт. [173]).

Распределение фенотипов MNS

Опубликовано: 20 апреля 2014

Последующие открытия в системе MN произошли лишь спустя 2 десятиле­тия, когда были обнаружены антигены S и s, которые оказались антитетичны­ми по отношению друг к другу точно так же, как факторы М и N. Установлено также, что обе пары антигенов (MN и Ss) взаимосвязаны (Chown и соавт. [43], Heiken [91], Sanger и соавт. [219, 220, 222]). Далее был открыт антиген U, ко­торый, за редким исключением, содержится практически у всех людей (Allen и соавт. [12], Wiener и соавт. [261,262]). Таким образом система MN усложнилась. Разные группы исследователей обозначали ее как MNS, MNSs или MNSsU. Официальное, утвержденное ISBT, обозначение этой системы -MNS.

До 1990 г. открыто много других ассоциированных с MN антигенов, редко встречающихся у европейцев (табл. 6.1). Их находили, главным образом, у пред­ставителей негроидной и монголоидной рас. Посемейные исследования подтвер­дили ассоциативную связь редких факторов с антигенами М, N, S и s. Позднее было установлено, что некоторые из редких антигенов также взаимосвязаны. Попытки систематизировать данные серологических, в том числе посемейных, исследований позволили выделить в системе MN подсистему Мильтенбергер -коллекцию редко встречающихся связанных между собой антигенов (Gleghorn [44, 46]). Первые 4 класса антигенов, выделенные Cleghorn в 1966 г., попол­нились 7 новыми антигенами, отличающимися друг от друга серологически (Daniels [56], Issitt, Anstee [ИЗ], Reid, Lomas-Francis [202]). Антигены, причис­ленные к подсистеме, обнаруживали преимущественно у монголоидов (Metaxas-Buehler и соавт. [163], Nguen ТЫ Huingh и соавт. [174]). Выделение подсисте­мы Мильтенбергер не вызвало возражений у иммуносерологов. Однако в по­следнее десятилетие в связи с использованием молекулярно-генетических мето­дов исследования стало очевидно, что подразделение антигенов системы MNS на классы и подсистемы неточно, и дальнейшая детализация подсистем нецеле­сообразна (Dahr [53], Reid, Tippett [209], Tippett и соавт. [247]). Обозначения ги­бридных гликофоринов, обусловливающих антигенные различия, по-видимому, в скором будущем претерпят изменения.

С 1970-х годов антигены системы MNS изучали биохимическими (Dahr [52, 54, 55]), а затем молекулярно-генетическими методами, с помощью которых установлено, что система MNS полиморфна и сопоставима по своей сложности только с системой Rh (Akane и соавт. [10], Issitt, Anstee [113], Fukuda [72], Huang и соавт. [97,99,101-107]).

В настоящее время система MNS представлена 46 антигенами (см. табл. 6.1). Некоторые антигены, ассоциированные с системой MN, являются продуктом гликозилирования гликофоринов под действием генов, не зависимых от локу­са MN. Установлены количественные варианты некоторых факторов. В связи с этим такие антигены, как Ни, M_v Tm и Sj, не получили статуса антигенов систе­мы MNS с присвоением соответствующего обозначения в номенклатуре ISBT;количественные варианты (М₂, N₂, S₂, S^u S^B, U^z) в систему MNS также не вклю­чены.