Антитела системы Cromer представлены преимущественно классом IgG (Daniels [15]), встречаются анти-Сг^а-антитела IgM (Dickson и соавт. [23]). Большинство антител IgG относится к субклассу IgGl, однако описаны анти­тела, относящиеся к субклассам IgG2, IgG3 и IgG4 (Dickson и соавт. [23], Issitt, Anstee [36], Nakache и соавт. [66], Reid и соавт. [79, 80, 83], Sistonen и соавт. [89], McSwain, Robins [59], Anderson и соавт. [1], Byrne и соавт. [7]).

Антитела системы Cromer не имеют существенного значения в трансфузио-логии. Опубликованы сообщения о благополучных исходах трансфузий эритро­цитов, несовместимых по антигенам этой системы, реципиентам, которые име­ли антитела анти-Сг^а (Smith и соавт. [90], Whitsett, Oxendine [107], Chapman и соавт. [9]) и анти-Тс^а (Hoffer и соавт. [30]).

Вместе с тем описаны постгрансфузионные реакции, причиной которых были антитела анти-Сг^а (Byrne и соавт. [7]) и анти-Тс^а (Kowalski и соавт. [39]). В последнем случае реципиенту перелили шесть доз эритроцитов Тс(а+), из кото­рых первые три гемолизировались invivoв день проведения трансфузии.

Попытки оценить клиническое значение антител Cromer с помощью экспе­риментальных тестов invivoи invitroне дали однозначных результатов.

Smith и соавт. [90], Leatherbarrow и соавт. [45] и другие авторы [4, 9, 23, 66, 79, 84, 86, 107,] сделали вывод об отсутствии клинического значения антигенов и антител этой системы.

В других случаях были получены данные, свидетельствующие о способно­сти антител Cromer уменьшать продолжительность циркуляции перелитых эри­троцитов [1, 7,27, 38, 39, 43, 59, 79, 83,105].

При введении эритроцитов IFC+ реципиенту, имевшему анти-ШС-антитела, отме­чалось следующее. В одном случае через сутки после инъекции в кровотоке сохрани­лось 38 % эритроцитов (Walthers и соавт. [105]), в другом случае наблюдали исчезно­вение IFC-несовместимых эритроцитов через 15 мин после введения (Daniels [15]).

Антитела анти-Тс^а IgGl, IgG2 и IgG4 проявляли себя как клинически значи­мые при испытании в монослое моноцитов. Через 2 года антитела того же лица содержали только IgG2 и IgG4 и не проявляли себя invitroкак клинически зна­чимые (Anderson и соавт. [1]).

Трансплантация почки от донора Dr(a+) реципиенту Dr(a-), имевшему анти-Ог^а-антитела IgG2 и IgG4, была успешной: приживление трансплантата и его функционирование было нормальным, повышения титра анти-Ог^а-антител отмечено (Nakache и соавт. [66]).

Нулевой фенотип - Inab, характеризующийся отсутствием антигенов Cromer, встречается редко. Описаны 6 обладателей указанного фенотипа: 3 японца (Wang и соавт. [106], Daniels и соавт. [18, 22], Hue-Roye и соавт. [35]), американ­ский еврей (Walthers и соавт. [105]), американка итальянского происхождения и ее брат (Lin и соавт. [48]).

У двух других лиц, первоначально отнесенных Reid и соавт. [82] и Holguin и соавт. [31] к группе Inab, позднее было выявлено небольшое количество веще­ства DAF (Lublin и соавт. [54]), один из них имел фенотип Dr(a-). Транзиторный фенотип Inab с наличием антител анти-IFC описан у пациента негра. Годом поз­же в эритроцитах этого мужчины обнаружено нормальное количество вещества DAF (Matthes и соавт. [57]).

Эритроциты Inab не реагировали с моноклональными мышиными и кроли­чьими антителами анти-DAF (Telen и соавт. [98, 99], Parsons и соавт. [72], Merry и соавт. [62]). В то же время комплементчувствительные эритроциты больных пароксизмальной ночной гемоглобинурией не реагировали с антителами анти-CROM (Telen и соавт. [99], Parsons и соавт. [72]).

Lublin и соавт. [54], секвенируя геномную и кодирующую ДНК одного из упомянутых выше японцев с фенотипом Inab, выявили носенс-мутацию в ко-доне 53 гена DAF, экзон 2. Кодон триптофана TGG был заменен на стоп-кодон TGA, в связи с чем в ККП-1-домене синтез полипептидной цепи в позиции 53 прекращался. Второй обладатель фенотипа Inab, также японец, оказался гомо­зиготным по указанной мутации; его родители были гетерозиготами (Daniels и соавт. [18]). У третьего японца фенотип Inab сочетался с трансверсией С 1579 А 24 нуклеотидов в области 3' экзона 2, которая инициировала новый участок сплайсинга (TGGTCAGA на TGgtaaga) и приводила к делеции внутри РНК-транскрипта, смещению рамки считывания с возникновением стоп-кодона в точке мутации (Wang и соавт. [106]). Соответственно трансляция прекращалась в области, кодирующей первые шесть аминокислот ККП-2. Имелась точковая мутация в геномной ДНК, приводящая к утрате участка сплайсинга Mbol.

Сыворотка крови 4 носителей фенотипа Inab содержала анти-ГРС-антитела, которые реагировали со всеми образцами эритроцитов за исключением соб­ственных (Daniels и соавт. [18, 22], Walthers и соавт. [105], Lin и соавт. [48], Yazer [111]). Эксперименты с задержкой гемагтлютинации рекомбинантными фрагментами DAF показали, что анти-ШС-антитела являются смесью фракций, реагирующих с участками, находящимися на разных ККП-доменах.

Антитела со специфичностью анти-IFC были найдены в сыворотке крови больного 12-летнего негра (Daniels и соавт. [18]). Его эритроциты не были фе-нотипированы по системе Cromer, однако более вероятно, что он имел транзи­торный фенотип Inab. Анти-ШС-антитела исчезли из сыворотки крови больно­го после того, как нормализовалось содержание вещества DAF на его эритроци­тах Matthesи соавт. [57]).

В растворимой форме DAF содержится в секретах и других жидкостях ор­ганизма, включая плазму крови и мочу (Medof и соавт. [61], Laird-Fryer и соавт. [43], Levene и соавт. [46], Sistonen и соавт. [89]).

Рядом исследователей установлена связь антигенов Cromer с DAF: антитела анти-Cromer (анти-Сг^а, -Тс^а, -Dr^a, -IFC, -WES^a, -WES^b и -UMC) взаимодействуют с этим фактором (Telen и соавт. [99], Parsons и соавт. [72], Daniels и соавт. [14, 21]). Локализацию антигенов Cromer на гликопротеине DAF подтвердили Petty и соавт. [73,74] в экспериментах со специфической иммобилизацией антител, а также Telen и соавт. [100, 101], Daniels и соавт. [19], которые показали, что фрагменты рекомби-нантного DAF ингибируют агглютинацию эритроцитов анти-Сготег-антителами.

Эритроциты больных пароксизмальной ночной гемоглобинурией (ПНГ) ли­шены GFI-ассоциированных протеинов, в том числе DAF, и не содержат антиге­нов Cromer (Nicholson-Weller и соавт. [-$7]).

Антигены и антитела Cromer

В систему Cromer включено 15 антигенов: 3 - редко встречающихся, 12 -часто встречающихся (табл. 21.1). Нулевой фенотип, получвший обозначение Inab, сочетается с наследственным дефицитом фактора деградации комплемен­та (Storry, Reid [93]). На эритроцитах Dr^a- антигены Cromer выражены слабо.

Антигенный полиморфизм системы обусловлен мутациями в различных точ­ках гена DAF(Telen и соавт. [101], Lublin и соавт. [52, 54, 55], Udani и соавт. [104], Wang и соавт. [106], Daniels и соавт. [18]). Каждому антигену соответствует ами­нокислотная замена в той или иной позиции гликопротеина.

Антигены Cromer разрушаются а-химотрипсином, но устойчивы к действию трипсина, папаина и сиалидазы, по этим признакам их дифференцируют с ан­тигенами других групповых систем (Daniels [15]). Обработка эритроцитов сульфидредуцентами - 2-аминоэтилизотиоурониумбромидом (АЕТ). Данный феномен представляется весьма необычным, поскольку домены полипептида Cromer имеют дисульфидные связи.

Расовые и этнические особенности фенотипов системы Cromer

Активность антител анти-Сг^а, -Тс^а, -Dr^a, -IFC и -UMC ингибировалась кон­центрированной мочой лиц, эритроциты которых содержали указанные антиге­ны (Daniels и соавт. [14, 21]).

Распределение антигенов системы Cromer имеет расовые и этнические осо­бенности (табл. 21.2).

Сг^а

В 1965 г. McCormick, Francis и Gelb [58] исследовали сыворотку беременной негритянки, миссис Cromer. Сыворотка реагировала с эритроцитами более чем 4000 доноров негров, но не реагировала с собственными эритроцитами и эритро­цитами сестры. Поскольку обе женщины имели антиген Go^a системы RH, авто­ры полагали, что обнаруженные ими антитела открывают новый часто встречаю­щийся антиген - Go^b, антитетичный редко встречающемуся антигену Go^a. Однако вскоре выяснилось, что сыворотка миссис Cromer реагирует с эритроцитами , поэтому антитела не могут быть atfra-Go^b и не относятся к системе резус.

Stroup и МсСгеагу [95], обнаружившие второй образец таких антител, обо­значили их как анти-Сг^а и установили связь с антителами анти-Тс^а, относящи­мися к системе Cromer.

Позднее были найдены другие образцы антител анти-Сг^а (Smith и соавт. [90], Ross, McCall [84], Leatherbarrow и соавт. [45], Whitsett, Oxendine [107], Dickson и соавт. [23]). Все сенсибилизированные, за исключением одного, негры.

Winker и Hamilton [109] обследовали 8858 доноров негров в г. Детройте (США) и выявили только 2 с фенотипом Сг(а~). Посемейные исследования показали, что наследование гена Сг^апроисходит в соответствии с законом Менделя [58,90,95].

Трансфекция яйцеклеток китайского хомячка образцами кДНК с деления­ми по четырем ККП-доменам полипептида DAF показала следующее. Лизаты всех клеток, за исключением тех, в которые была введена кДНК, дефицитная по ККП-4, реагировали с антителами анти-Сг^а. У лиц Сг(а-) в геномной ДНК име­лась мутация G 679 С, ведущая к замене Pro 193 Ala в домене ККП-4 (Coyne и соавт. [12], Telen и соавт. [101]).

Антитела анти-Сг^а удавалось извлечь из сыворотки путем адсорбции как эри­троцитами, так и тромбоцитами лиц, содержащих этот антиген (Sacks, Garratty [86], Judd и соавт. [38]).

Тс% Тс^ь, Тс^с и Тс^аТс^ь

Daniels и соавт. [22] нашли два образца антител, которые, так же как и анти-Сг^а-антитела, не реагировали с эритроцитами Inab. Они получили обозначение анти-Тс^а после обнаружения Laird-Fryer и соавт. [43] еще одного образца таких же антител.

При обследовании 950 доноров негров с использованием сыворотки анти-Тс^а был выявлен только один с фенотипом Тс(а-), все остальные были Тс(а+). Фенотип Тс(а-) отсутствовал у 5000 доноров европейцев и 5000 доноров япон­цев (Laird-Fryer и соавт. [43]).

Антитела анти-Тс^ь, найденные Lacey и соавт. [41], присутствовали в сыво­ротке одновременно с анти-Оо^а-антителами (anra-Rh30). Они реагировали с эритроцитами 6 % американских негров, фенотип которых был соответственно Тс(Ь+). Среди европеоидов фенотип Тс(Ь+) не обнаружен. Все негроиды с фе­нотипом Тс(а-) имели группу Тс(Ь+). Посемейные исследования показали, что гены Тс^аи Тс^ьявляются аллельными (Lacey и соавт. [41]). По результатам об­следования 350 американских негров рассчитана частота генов Тс" (0,97) и Тс^ь (0,03), а также генотипов Тс^а/Тс^а(0,941), Тс^а/Тс^ь(0,058) и Тс^b/Tc^b(0,001).

На эритроцитах белой женщины и ее сестры, имевших фенотип Тс(а-Ь-), Law и соавт. [44] обнаружили редкий антиген, обозначенный Тс^с. Таким обра­зом, фенотип женщин в действительности соответствовал Тс(а-Ь-с+). Через 6 мес. после рождения ребенка у одной из женщин появились антитела анти-Тс^а,Тс^ь, которые не удалось разделить путем адсорбции эритроцитами Тс(а+Ь-) и Тс(а-Ь+). Антитела не реагировали с эритроцитами Тс(а-Ь-с+), но давали положительные реакции с эритроцитами Тс(а-Ь+с-) и Тс(а+Ь-с-).

Второй образец антител анти-Тс^а,Тс^ь выявили Bell и соавт. [4] у европейки, имевшей фенотип Тс(а-Ь-).

Эксперименты с трансфекцией клеточных линий показали, что эпитопы Тс^а несет домен ККП-4 DAF. Трансверсии G —► Т и G —> С в нуклеотиде 155, коди­рующие замены Arg 18 Leu и Arg 18 Pro, приводили к экспрессии антигенов Тс и Тс^с соответственно (Telen и соавт. [101], Udani и соавт. [104], Lublin и соавт. [52]).

Dr^a

Levene и соавт. [46, 47], Nakache и соавт. [66] выявили трех индивидов, узбекских евреев, содержавших антитела, получившие обозначение анти-Dr³. Соответственно указанные лица имели фенотип Dr(a-).

Лица Dr(a-), у которых имеются анти-Ог^а-антитела, найдены как среди узбекских евреев (Reid и соавт. [79]), так и среди японцев (Daniels и соавт. [18]) и русских (Lublin и соавт. [54], Reid и соавт. [82]).

Выявлены лица Dr(a-), у которых анти-Ог^а-антитела отсутствуют (Nakache и соавт. [66], Uchikawa и соавт. [103]).

Эритроциты Dr(a-) несут слабовыраженные антигены Cromer: их экспрес­сия составляет 40 % от обычной (Wang и соавт. [106]). При этом фактор DAF не претерпевает качественных изменений, они носят количественный характер (Lublin и соавт. [55], Daniels, Levene [20]).

Иногда эритроциты Dr(a-) ошибочно идентифицировали как Inab и относи­ли к нулевому фенотипу (Lublin и соавт. [54], Reid и соавт. [82]).

Lublin и соавт. [52, 54] секвенировали геномную ДНК четырех неродствен­ных лиц Dr(a-). У всех четырех обнаружена мутация С 596 Т в экзоне 5 гена DAF, сопровождавшаяся заменой серина на лейцин в домене ККП-3 протеина DAF. Эта мутация приводила к потере участка рестрикции Taql. Выявлены два DylF-транскрипта: полной длины, присутствовавший в небольшом количестве, и укороченный за счет делеции 44 нуклеотидов. Данная мутация изменяла рам­ку считывания с образованием стоп-кодона. Полипептиды, синтезируемые в ре­зультате трансляции больших транскриптов, включали лидер-пептид, 165 ами­нокислот двух первых ККП-доменов и половину третьего домена. Полипептиды DAF кодировались короткими транскриптами, что, по-видимому, обусловлива­ло низкую экспрессию антигенов Cromer на эритроцитах Dr(a-).

WES^aи WES^b

WES^a - редко встречающийся антиген, выявлен у 61 из 10 982 финнов (Sistonen и соавт. [89]), 2 из 1610 белых американцев и 7 из 1460 американских негров (Copeland и соавт. [11]), 5 из 245 негров - жителей Лондона (Daniels и соавт. [17]). Он отсутствовал у 210 обследованных бельгийцев, 747 поля­ков, 1073 венгров, 707 латышей, 500 японцев и 1026 жителей Сомали.

Антитетичным по отношению к редкому антигену WES^a является широко распространенный антиген WES^b. Выявлено два образца антител анти-WES¹⁵, оба у негритянок WES(a+b-) (Daniels и соавт. [17], Poole и соавт. [75]). Эксперименты с трансфекцией клеточных линий фрагментами кДНК гена

DAF показали, что антигенные эпитопы WES^a и WES^b расположены в ККП-1-домене гликопротеина DAF (Telen и соавт. [100]). Амплификация и секвенировашие экзона 2 гена DAFпозволили выявить точковую мутацию Т 245 G, ведущие к замене лейцина на аргинин в положении 48. Таким образом, антигенные различия WIS⁸/WES^b обусловлены одной аминокислотной заменой.

Мышиные МКА против домена ККП-1 DAF блокировали связывание анти-рл анти-Тс^а, в то время как в отношении антител aHra-WES^b оставались инерт-|цйми. Как полагают Petty и соавт. [74], проводившие эти эксперименты, эпиго­ны Тс^а и WES^b расположены на разных участках домена ККП-1, что согласуется с молекулярной моделью, предложенной Kurtner-Kondo и соавт. [40].

Es^a

Антиген Es^a широко распространен. В связи с этим лиц Es(a-), способных вырабатывать анти-Ез^а-антитела, очень мало. Известно всего два образца анти­тел aHTH-Es^a. Первый обнаружен в 1984 г. Tregellas [102] у мексиканки, роди­тели которой были двоюродными братом и сестрой. Два из трех сибсов про-банда также имели фенотип Es(a-), третий был Es(a+). Принадлежность анти-Ез^а-антител к системе Cromer подтверждалась тем, что сыворотка не реагирова­ла с эритроцитами Inab (Cr ..).

Второй образец анти-Е8^а-антител нашли в 1996 г. Reid и соавт. [83] у мужчи­ны негра.

Другие лица Es(a-), за исключением 4 упомянутых выше, не выявлены. Из 3400 обследованных доноров все были Es(a+).

Отмечено (Daniels и соавт. [17]), что эритроциты Es(a-) слабее реагируют с aHTH-WES^b-affnn^aMH, чем эритроциты Es(a+). Эритроциты WES(a+b-) в свою очередь реагируют с антителами анти-Es³, однако очень слабо, только при использовании метода адсорбции - элюции.

Репу и соавт. [73] установили, что эпитопы Es^a расположены на домене ККП-1 гликопротеина DAF.

Секвенирование гена DAFупомянутого негра Es(a-) выявило его гомози-готность по мутации Т 239 А, кодирующей замену Не 46 Asn в домене ККП-1 (Lublin и соавт. [52]). Указанная аминокислотная последовательность располо­жена вблизи позиции Leu 48 Arg, которая обусловливает специфичность антиге­нов WES^a и WES^b. Этим, очевидно, объясняется перекрестное реагирование ан­тигенов Es^a и WES^b с сыворотками aHra-WES^b и анти-Es³ соответственно.

имс

Wang и соавт. [106] обнаружили у японки антитела с очень высокой ча­стотой реагирования и обозначили их анти-UMC. Фенотип этой женщи­ны соответствовал UMC -. Один из трех ее сибсов имел такой же фенотип. Рстальные из 45 610 японских доноров, обследованных сывороткой анти-UMC, были UMC+.

|£ помощью метода задержки реакции агглютинации рекомбинантными фрагментами DAF установлено, что анти-иМС-антитела распознают эпито-Щ ^положенные на домене ККП-4 (Daniels и соавт. [19]). В молекулярно-генетических исследованиях выявлена гомозиготность пробанда по мутации С 749 Т в экзоне 6 гена DAF, кодирующей Thr 216 Met.