Напишите нам

Поиск по сайту

Наш блог

Как я заболел во время локдауна?

Это странная ситуация: вы соблюдали все меры предосторожности COVID-19 (вы почти все время дома), но, тем не менее, вы каким-то образом простудились. Вы можете задаться...

5 причин обратить внимание на средиземноморскую диету

Как диетолог, я вижу, что многие причудливые диеты приходят в нашу жизнь и быстро исчезают из нее. Многие из них это скорее наказание, чем способ питаться правильно и влиять на...

7 Фактов об овсе, которые могут вас удивить

Овес-это натуральное цельное зерно, богатое своего рода растворимой клетчаткой, которая может помочь вывести “плохой” низкий уровень холестерина ЛПНП из вашего организма....

В какое время дня лучше всего принимать витамины?

Если вы принимаете витаминные и минеральные добавки в надежде укрепить свое здоровье, вы можете задаться вопросом: “Есть ли лучшее время дня для приема витаминов?”

Ключ к счастливому партнерству

Ты хочешь жить долго и счастливо. Возможно, ты мечтал об этом с детства. Хотя никакие реальные отношения не могут сравниться со сказочными фильмами, многие люди наслаждаются...

Как получить сильные, подтянутые ноги без приседаний и выпадов

Приседания и выпады-типичные упражнения для укрепления мышц нижней части тела. Хотя они чрезвычайно распространены, они не могут быть безопасным вариантом для всех. Некоторые...

Создана программа предсказывающая смерть человека с точностью 90%Смерть научились предсказывать

Ученые из Стэнфордского университета разработали программу предсказывающую смерть человека с высокой точностью.

Зарплата врачей в 2018 году превысит средний доход россиян в два разаЗП докторов

Глава Минздрава РФ Вероника Скворцова опровергла сообщение о падении доходов медицинских работников в ближайшие годы. Она заявила об этом на встрече с журналистами ведущих...

Местная анестезия развивает кардиотоксичностьАнестетики вызывают остановку сердца

Федеральная служба по надзору в сфере здравоохранения озвучила тревожную статистику. Она касаются увеличения риска острой кардиотоксичности и роста сопутствующих осложнений от...

Закон о праве родителей находиться с детьми в реанимации внесен в ГосдумуРебенок в палате

Соответствующий законопроект внесен в палату на рассмотрение. Суть его заключается в нахождении одного из родителей в больничной палате бесплатно, в течении всего срока лечения...

Как уже указывалось выше, серологически определяемые антигены А, В и Н не являются непосредственными продуктами генов. Гены А, В и //контроли­руют синтез соответствующих трансфераз. В настоящее время строение генов АВО и Я расшифровано (рис. 3.7). Их удалось клонировать и секвенировать. Расшифрована также аминокислотная последовательность А- и В-трансфераз, которые отличаются друг от друга двумя аминокислотами в позициях 266 и 268 (рис. 3.8).

Аминокислотная последовательность А-* и В-трансферазы**

Гены АВО содержат по 1062 пары оснований и кодируют пептиды, состоя­щие из 354 аминокислот (Reid, Lomas-Francis [186]). Секвенирование генов А и В позволило установить отличающие их последовательности в 7 кодонах, 4 из них (в позициях 176, 235, 266 и 268) могут быть причиной замены амино­кислот в трансферазах. Секвенирование гена 01 показало его идентичность с А1 до нуклеотида 261, с которого рамка считывания нарушается с образовани­ем стоп-кодона (Daniels [87]). Такой аллель кодирует синтез пептида, не облада­ющего какой-либо трансферазной активностью. 

Выявлено несколько вставок: гуанин-цитозин (GC boxes), которые находят­ся выше кодона, инициирующего транскрипцию, и могут играть важную роль в регуляции активности трансфераз. Транскрипция генетической информации за­висит от мини-сателлитов - участков размером 4 кб, расположенных выше на­чального участка считывания. Эксперименты с трансфекцией генов показали, что активность транскрипции гена А по сравнению с В существенно ниже.

Найдены часто встречающиеся аллели, характерные для представите­лей различных этнических групп. Так, примерно 80 % аллелей А1 среди япон­цев отличались от аллелей А1 европейцев мутацией, ведущей к замене проли- на на лейцин в положении 156. Однако это никак не проявляло себя на фено­типическом уровне (Olsson и соавт. [176-178]). Вместе с тем вставка одного нуклеотида в позиции от 798 до 804 в аллеле А2 приводила к синтезу продук­та, не обладающего трансферазной активностью (аллель О3) (Olsson и соавт. [179]). При сравнении нескольких аллелей установлена их гибридная природа. Образование гибридов, включающих фрагменты двух разных аллелей, авторы объясняют кроссинговером во время мейоза. В большинстве случаев кроссин- говер затрагивал экзон 6. При наличии делеции G 261 экзон 7 фенотипически не проявлялся. В тех случаях, когда экзон 6 не содержал указанной делеции, экзон 7 аллеля А1 или О1 проявлял себя фенотипически как Aj-серологическая активность. Экзон 7 аллеля О/v проявлял себя как А2-серологическая актив­ность (Ogasawara [170]).

Описана семья, в которой мать имела группу В, ребенок - А, отец - О. На первый взгляд, такие результаты серологического исследования в тра­диционной интерпретации должны были исключить отцовство. Однако ре­зультаты молекулярно-генетического исследования не позволили этого сде­лать. Секвенирование генов АВО членов данной семьи показало, что у ребен­ка имелся гибридный ген, экзон 6 которого содержал фрагменты гена В, а эк­зон 7 - фрагменты гена 0lv. Поскольку экзоны 7 аллелей А1 и 0 идентичны, а в экзоне 6 указанного гибридного гена, B-0Iv, отсутствовала делеция G 261 (стоп-кодон), на эритроцитах ребенка сформировался антиген A (Olsson и соавт. [177]). Вероятно, этот 2?-0Уу-гибридный ген с А-трансферазной активностью возник во время мейоза в результате кроссинговера.

В литературе появляется все больше материалов, свидетельствующих о ге­терогенности аллелей А, В, Н и Se среди представителей различных рас и эт­нических групп. Молекулярно-генетические методы позволяют выявлять ва­рианты генов с точковыми мутациями, делециями, гибридными включениями (табл. 3.14, 3.15, 3.16, рис. 3.8), приводящими к формированию стоп-кодонов, инактивации участков сплайсинга (Ogasawara и соавт. [170]). В ряде случа­ев отмечены эпистатические эффекты в виде аллельного угнетения (Feng и со­авт. [101]) или, напротив, аллельного усиления активности генов (Morel и со­авт. [162], Ogasawara и соавт. [171]). Структурные особенности генов часто не проявляют себя и лишь в редких случаях приводят к появлению необычных

Таблица 3.1 б

Аллели, ассоциированные со слабой экспрессией В

Фенотип

Аллель

Замена

нуклеотидов

Замена

аминокислот

вз

В3-1

С 105 4T

Arg 352 Tip

В

X

Bw-1 *В104

G 871 А

Asp 291 Asn

Ве,

Ве1-1*В105

Т 641 G

Met 214 Arg

Ве1

Ве1-2 *В10б

G669T

Glu 223 Asp

В

W

Bw-2

С 873 G

Asp 291 Glu

В

W

Bw-3

С 721 Т

Arg 241 Trp

В

W

Bw-4

А 748 G

Asp 183 Gly

В

W

Bw-5

G 539 А

Arg 180 His

В

W

Bw-6

А 1036 G

Lys 346 Glu

в

W

Bw-7

G 1055 А

Arg 352 Gin

в

W

Bw-8

T863 G

Met 288 Arg

Высокая степень гомологии локуса АВО человека обнаружена также при сравнении с аналогичными локусами других млекопитающих: хомяков, крыс, мышей, овец, коров, кроликов, кошек и собак (Daniels [87], Roubinet и соавт. [190]). Интересная деталь: трансферазная активность локуса АВО у мышей вдвое выше, чем у человека (Roubinet и соавт. [190]).

Высокая степень подобия выявлена при секвенировании генов FUTl(Hh) и FUT2(Se) (табл. 3.17, см. рис. 3.8). Полагают, что локус FUT2 мог произойти в результате преобразования гена FUT1 (Daniels [87]).

Таблица 3.17

Аминокислотная последовательность гликозилтрансфераз у млекопитающих

Перспектива создания универсальных эритроцитов привлекла многих иссле­дователей, появилась возможность конвертировать эритроциты группы А в О, и таким образом решить проблему АВО-несовместимых гемотрансфузий.В настоящее время предпринимаются попытки синтезировать а-галакгозилазу генно-инженерным путем, поскольку фермент из натурального сырья дорог окончательно не выяснен. Недостаточно изучены естественные эндогенные ин­гибиторы антителообразования, которые, по-видимому, могут влиять на состоя­ние респондерства или нереспондерства в отношении резус-антигена.

Вид

Аллель, антиген, энзим

Высокогомологичный фрагмент аминокислотной последовательности

Человек

А101

FTYERRPQSQAYIPKDEGDFYYLGGFFGG

272

Человек

В101

FTYERRPQSQAYIPKDEGDFYYMGAFFGG

272

Человек

001

FTYERRPQSQAYIPKDEGDFYYLGRFFGG

272

Человек

цис-АВ

FTYERRPQSQ AYIPKDEGDF YYLG AFF GG

272

Мышь

АВ

FTYERRPQSQAYIPWDRGDFYYGGAFFGG

251

Свинья

А

FTYERRPLSQAYIPRDEGDFYYAGGFFGG

282

Собака

Антиген Форссмана

FP YERRHISTAF VAENEGDF Y Y GG AVF GG

267

Мышь

Г алактозилтрансфераза

FT YERRELS AAYIPFGEGDF YYHAAIF GG

312

Корова

Г алактозилтрансфераза

FTYERRKESAAYIPFGEGDFYYHAAIFGG

286

Крыса

ЮЬЗ

LPYERDKRSAAALSLSEGDFYYMAAVFGG

259

Не утверждая, что это лежит в основе статуса нереспондерства, мы тем не ме­нее приведем некоторые размышления. Предположим, что резус-принадлежность D- данного человека обусловлена неполной делецией гена D, и небольшая часть генетического материала все же сохранилась. Этой части не достаточно, чтобы вос­производимый ею субстрат мог быть выявлен серологически как D+, однако мо­жет быть достаточно, чтобы антиген D, введенный с перелитой кровью, не воспри­нимался как чужеродный. Таким образом, нереспондеры по отношению к резус- антигену - это лица, в эритроцитах которых присутствует вещество, гомологичное антигену D, в небольшом, серологически невыявляемом количестве (скрытый D). Не исключено, что такие лица могут иметь фенотип Del, при котором следовые ко­личества антигена D выявляют только с помощью адсорбции - элюции.

Предпринятые некоторыми исследователями попытки индуцировать состоя­ние толерантности к резус-фактору посредством орального введения эритроци­тов Rh+ не увенчались успехом. Остается недоказанным предположение о су­ществовании гена респондерства и нереспондерства.

Благодаря молекулярно-биологическим исследованиям Colyn, Mouro, Wolter, Cherif-Zahar, Le Van Kim и других исследователей стало понятно, почему анти­ген D столь иммуногенен.

В 1991 г. Colyn и соавт. [233] выяснили, что резус-положительные лица име­ют 2 гена: RHD и RHCE, кодирующие выработку резус-антигенов. В то же вре­мя у большинства резус-отрицательных людей ген RHD подвергнут делеции и они имеют только 1 ген - RHCE. Последний представлен 4 аллелями: RHCe, RHcE, RHce и RHCE, кодирующими соответственно 4 варианта субстрата - Се, сЕ, се и СЕ. Полипептиды, кодируемые аллелями RHCE, имеют весьма значи­тельное структурное сходство.

Как установили Mouro и соавт. [496], Wolter и соавт. [720], Cherif-Zahar и со­авт. [208], Le Van Kim и соавт. [418], полипептид, несущий иммунодоминант- ный эпитоп С, отличается от полипептида, несущего иммунодоминантный эпи­топ с, всего лишь четырьмя аминокислотами в цепи из 417 аминокислот, и лишь одно из этих 4 различий определяет специфичность С и с. Полипептид, несущий Е-специфичность, отличается от несущего е-специфичность одной аминокисло­той. Иными словами, когда реципиенты Cde получают трансфузию эритроцитов cde, а реципиенты cde - трансфузию эритроцитов Cde, иммунная система реципи­ента не всегда отличает перелитое вещество Rh от своего собственного. То же са­мое происходит, когда людям с фенотипом cDE, cdE или cDe, cde переливают эри­троциты cDe, cde или соответственно cDE, cdE: их иммунная система не в состо­янии отличить чужой антиген от собственного по одной различающейся позиции.

Полипептид, кодируемый геном RHD, отличается от кодируемого геном RHce по величине [208, 233, 418, 496, 720]. Такое различие существенно для иммунной системы реципиента. При делеции гена RHD кодируемое им веще­ство Rh не производится, поэтому вводимый при гемотрансфузии антиген прак­тически не имеет у реципиента какого-либо эквивалента. Иммунный ответ особенно сильно проявляется у лиц с фенотипом -D- и Rhnull, у которых часть или все антигены Rh отсутствуют. В этом случае антигенные различия реципиента и донора, даже если последний Rh-, очень велики.

На основании результатов молекулярно-биологических исследований, сви­детельствующих о незначительных различиях в структуре минорных резус- антигенов С, с, Е, е, а также основываясь на данных статистики, показываю­щих, что частота антител к этим антигенам невысока, некоторые исследовате­ли предлагают пересмотреть существующее положение о резуе-положительных и резус-отрицательных донорах. В частности, предлагается относить к резус- отрицательным донорам лиц D-, содержащих антигены С и Е, и узаконить трансфузии крови Cde, cdE и CdE резус-отрицательным реципиентам. По их мнению, такой подход, позволит расширить ресурсы донорской крови Rh-, сэ­кономит значительные средства, затрачиваемые на дополнительное типирова- ние доноров по факторам С и Е, и связанные с этим другие расходы.

Хотя мировое сообщество трансфузиологов в целом не приняло этот предло­жение, оно не лишено здравого смысла.

Придерживаясь общепринятого положения, предписывающего относить к резуе-отрицательным донорам только лиц, не содержащих факторов D, С и Е, мы все же рассмотрим его по существу.

В начале 50-х годов прошлого столетия сложилось представление о том, что для реципиентов cde антигены С и Е столь же иммуногенны, как D. Это представление базировалось на данных о высокой частоте встречаемости ан­тител анти-С и анти-Е в виде комбинированных сочетаний: анти-DC и анти- DE. Создавалась видимость высокой иммуногенности этих факторов и отсю­да опасение, что для реципиентов D-C-E- антигены С и Е будут также имму­ногенны. В действительности чистые антитела к факторам С и Е без анти-D- антител встречаются редко, что свидетельствует об их невысоких иммуноген- ных свойствах.

Для того чтобы еще больше обезопасить резус-отрицательных реципиен­тов от возможной аллоиммунизации, им переливают эритроциты, не содержа­щие этих факторов. Предпочтение такой тактики было в значительной степени произвольным, поскольку объективная статистика, подтверждающая правомер­ность такого подхода, отсутствовала.

В то же время реципиентам Rh+ переливают эритроциты, которые в 20-30 % случаев не идентичны по антигенам С и Е, не опасаясь при этом вызвать алло­иммунизацию. Вряд ли такой подход можно признать правильным, поскольку реципиенты Rh+, хотя и редко, но все же иммунизируются минорными анти­генами с, Cw, С, Е и е. В табл. 4.2 представлены данные, характеризующие сте­пень иммуногенности минорных Rh-антигеновискусственная иммунизация нативными и энзимированными эритроцитами не позволяла получить эти антитела (Р.С. Сахаров [96, 98]).

В опытах по иммунизации, когда инъекции продолжались в течение полу­тора лет, Jones, Diamond и Allen (1954) не смогли стимулировать продукцию анти-С и анти-Е ни у одного из 32 человек D+.

Очень часто иммунизация, предпринятая с целью получения антител анти-С и анти-Е, приводит к выработке антител анти-KEL 1 или анти-hr' (с). Об этом свидетельствуют многочисленные данные, полученные отечественными иссле­дователями Т.Г. Соловьевой, А.Г. Башлай, Р.С. Сахаровым, В.А. Мороковым, И.С. Липатовой и другими, занимавшимися направленной искусственной им­мунизацией с целью получения моноспецифических тестовых сывороток.

Анти-С-антитела хотя и редки, но значительно чаще образуются у резус- отрицательных людей, чем у резус-положительных, что еще раз подтвержда­ет правильность современной трансфузиологической тактики, предусматрива­ющей переливание резус-отрицательным реципиентам эритроцитов, лишенных антигенов С и Е. Сложившуюся повсеместно практику переливания эритроци­тов Rh+ резус-положительным реципиентам без учета факторов С и Е вряд ли можно считать идеальной, поскольку это приводит к аллоиммунизации реципи­ентов факторм hr' (с), который иммуногенен для гомозигот CDe/CDe и обуслов­ливает около 3 % посттрансфузионных осложнений.

Итак, многие аргументы убеждают в необходимости переливать эритроци­ты, идентичные по основным антигенам системы Rh-Hr: D, С, Е, с, е. К этому перечню необходимо добавить антиген Cw, частота сенсибилизации к которому составляет 1-2 % [40].

Роль Rh-антигенов в биологии человека неясна. Gahmberg и соавт. [296], Ridgwell и соавт. [566], Paradis и соавт. [517] полагают, что резус-антигены явля­ются лишь структурным элементом мембраны эритроцитов. Число молекул по­липептида Rh и гликопротеина Rh на 1 эритроцит достигает 200 тыс. (Hughes- Jones и соавт. [364]), что делает их основными мембранными белками.

Вещество Rh присутствует только в эритроцитах и, по-видимому, выполняет определенную функцию, специфичную именно для этих клеток.

По данным Schmidt и соавт. [5] и Sturgeon [638], эритроциты людей с фено­типом Rhnull, при котором, как известно, отсутствуют Rh-антигены, имеют эл­липсоидную форму. Концентрация анионов в мембране снижена (Balias и со­авт. [151]). Эритроциты часто дегидратированы из-за повышенного транспорта воды через клеточную мембрану (Lauf, Joiner [411], Nash, Shojania [504]). Срок их приживления in vivo меньше, чем обычных эритроцитов [598].

Ridgwell и соавт. [565] нашли, что аминокислоты Glu 21 и Glu 146 в транс­мембранной части Rh-полипептида и аминокислоты Glu 13 и Glu 148 в транс­мембранной части Rh-гликопротеина обеспечивают движение катионов через мембрану эритроцита и относятся к структурам, которые подобно аквапорину-1 (антигену Colton) являются транспортерами воды в клетку.

 

Система резус полиморфна. Помимо четко очерченных антигенов, она вклю­чает варианты, при которых антигены выражены слабо либо вовсе не продуци­руются. Для ясности дальнейшего изложения объясним некоторых обозначе­ния, встречающиеся в современных публикациях.

Как видно из табл. 4.5, наименования отдельным вариантам, в том числе редко встречающимся, присваивали в значительной мере произвольно. В этом плане классификация ISBT внесла определенный порядок. Тем не менее обо­значения, характеризующие необычную выраженность антигенов или их не­ожиданное отсутствие, в литературе сохраняются, например фенотипы Rhnull, -D-, (C)D(e). В последнем случае необычные фенотипы со слабовыраженны- ми антигенами Сие, кодируемые геном RN и чаще встречающиеся у негров, обозначают как (C)D(e), выделяя скобками очень слабые или практически от­сутствующие антигены Сие.

Обозначение f (се) и rh. (Се) с дублирующим синонимом, помещенным в скобки, более информативно для читателя, чем обозначение этих антигенов как f и rhj, поскольку указывает на генетическую подоплеку их формирования (по­зицию цис генов се или Се). Антиген f продуцируется комбинацией генов с иев положении цис. При размещении генов спев позиции транс антиген f не фор­мируется. Аналогичная ситуация имеет место в отношении антигена rh., кото­рый вырабатывается в том случае, если как минимум на одной из унаследован­ных гомологичных хромосом в позиции цис расположены локусы Си е. Гены С и ев позиции транс антигена rh. (Се) не производят.

Антигены резус встречаются с частотой: D - 85 %, С - 70 %, с - 80 %, Е - 30 %, е - 97,5 %. В табл. 4.6 представлены варианты фенотипов и генотипов Rh, а также результаты серологических реакций, в которые вступают эритроциты с тем или иным сочетанием антигенов резус. Фенотип Rh-Hr выявляют с помощью

5   сывороток: анти-D, анти-С, анти-Е, анти-с и анти-е. Сыворотки анти-се, анти- Се, анти-сЕ и анти-СЕ обнаруживают на эритроцитах дополнительный антиген­ный продукт, кодируемый генами, когда они находятся в одном гаплотипе одно­временно. Реагирование этих сывороток при одинаковом фенотипе, но разном ге­нотипе людей не совпадает, что может быть использовано для установления ге­нотипа Rh по фенотипу. Например, лица с фенотипом CcDEe (Се+се-сЕ+СЕ-), с большой степенью вероятности (99,99 %) имеют генотип CDe/cDE (генотипы Cde/cDE или CDe/cdE менее вероятны), а лица с тем же фенотипом CcDEe (но Се-се+сЕ~СЕ+) имеют генотип CDE/cde или, что менее вероятно, CdE/cDe.

Выраженность антигенов Rh на эритроцитах варьирует в широком диапазо­не. Выделяют сильные, средние и слабые формы антигенов. Эритроциты, не­сущие эти формы, обычно не имеют качественных различий, но отличают­ся от образца к образцу степенью агглютинабельности. Выраженность агглю­тинации (агглютинабельность) определяется количеством антигена, представ­ленного на поверхности эритроцитов, что обусловлено генетическими фактора­ми. Агглютинабельность эритроцитов людей с генотипом cDE/cDE выражена сильнее, чем эритроцитов лиц с генотипом CDe/CDe, поскольку количество ан­тигенных участков на эритроцитах DE больше, чем на эритроцитах DC. Редкий фенотип -D-, при котором отсутствуют антигены С, Е, с и е, отличается наибо­лее высоким содержанием субстанции D по сравнению с нормальным D-типом. Менее всего антиген D выражен на эритроцитах со слабым D-фенотипом (Du) и совсем не выражен на эритроцитах Rhnull.

В редких случаях варианты агглютинабельности могут быть обусловлены качественными различиями парциальных антигенов, которые содержат непол­ный набор D-эпитопов.

 

Добавить комментарий

Новости медицины

Рассматривая статины?

Много миллионов человек в мире принимают статины, но исследования показывают, что только 55% из тех, кому рекомендуется принимать статины, принимают их. Это большая проблема, потому что исследования также показывают, что те из группы...

Высокое АД во время беременности может повлиять на сердце женщины в долгосрочной перспективе

Связанное с беременностью высокое кровяное давление может привести к долгосрочным сердечным рискам, показывают новые исследования.

Отмена приема опиоидов по рецепту имеет болезненные последствия для пациентов

Кэролин Консия, столкнулась с более серьезными последствиями репрессий против назначения опиоидов, когда узнала, почему сын ее подруги покончил с собой в 2017 году.

Психическое заболевание не является причиной массовых расстрелов

Новое исследование показывает, что психические заболевания не являются фактором большинства массовых расстрелов или других видов массовых убийств.




Тесты для врачей

Наши партнеры