Посемейными исследованиями установлено, что ген Dia передается по наследству как доминантный признак (Сапп и соавт. [23], Graninger [51], Lewis и соавт. [104], Race, Sanger [137], Levine, Robinson [98], Layrisse и соавт. [96]).
Протеин полосы 3, полученный из эритроцитов, подвергнутых обработке проназой или химотрипсином, при электрофорезе в полиакриламидном геле (SDS-PAGE) оказался неоднородным (Mueller, Morrison [123]). В большинстве образцов присутствовали фракции с мол. массой 60 кДа, представляющие N-терминальный регион, и небольшое количество компонентов с мол. массой 63 кДа.
Один из вариантов протеина полосы 3, названный Мемфис, обусловлен точковой мутацией в паре нуклеотидов внутри экзона 4, которая приводит к замещению лизина на глютаминовую кислоту в цитоплазматическом N-терминальном домене белка полосы 3 (Yannoukakos и соавт. [176], Jarolim и соавт. [76]). У некоторых индивидов, гомозиготных по указанному мутантно-му гену, присутствовал только протеин с мол. массой 63 кДа (Ranney и соавт. [138], Ideguchi и соавт. [62]). Вариант Мемфис протеина полосы 3 был обнаружен у 6-7 % произвольно взятых доноров. Его частота оказалась выше среди американских негров (16 %), индейцев (17-25 %), китайцев (13 %), жителей Филиппин (17 %) и японцев (29 %) (Yannoukakos и соавт. [176], Jarolim и соавт. [76]). Ингибиторы эритроцитарного транспортера анионов диизотиоцианат-стилбен (DIDS) и его дигидрат (H160mIDS) ковалентно связывались с лизином в позиции 539 белка полосы 3 (Tanner и соавт. [160]). У некоторых индивидов с Мемфис-вариантом белка полосы 3 отмечено повышенное связывание H160mIDS (Hsu, Morrison [60]). Такой тип белка полосы 3 был обозначен как Мемфис-вариант II для дифференцировки с Мемфис-вариантом I, которому свойствен нормальный уровень связывания Н IDS.
Spring et al [157] указали на ассоциацию между фенотипами системы Diego и вариантами протеина полосы 3 при исследовании в SDS-PAGE. Они установили, что наличие Мемфис-варианта II всегда было ассоциировано с наличием на эритроцитах антигена Dia. Белок полосы 3 таких эритроцитов связывал в 3 раза больше H160mIDS с радиоактивной меткой, а клетки Di(a-) проявляли нормальный уровень связывания H160mIDS. Таким образом, эпитопы Dia ассоциированы с протеином полосы 3 Мемфис-варианта II, а другие варианты этого белка (Мемфис-вариант I и обычный) - с антигенными эпитопами Dib.
Bruce и соавт. [16], проведя амплификацию кодирующего региона бежа полосы 3 для выделения кДНК, сумели доказать, что экспрессия антигена Dia и Мемфис-варианта II ассоциированы с заменой С 2561 Т в экзоне 19: ген Dia кодирует лейцин в позиции 854, а в присутствии Dib это положение занимает пролин. Кроме того, внутри гена Dia отсутствуют сайты рестрикции Mspl и Nael. В соответствии с моделью, в которой трансмембранная часть протеина полосы 3 представлена 14 доменами, аминокислотные замены имеются в 7 экстрацеллюлярных петлях белка (рис. 12.2). Повышенное связывание H160mIDS происходит в связи с локальными пространственными изменениями, влияющими на перекрестные связи между лизином в положении 851 на седьмой петле и той же аминокислотой в положении 539 в трансмембранном домене (Salhany и соавт. [150]).
При исследовании генотипа с помощью ПЦР у 72 бразильских индейцев племени Паракана из Амазонии выявлено 26 индивидов Dia/Dia, 26 - Dia/Dib
Локализация антигенных эпитопов Diego на эритроците и топология протеина полосы 3
и 19 - Dib/Dib. Таким образом, в этой этнической группе гены Dia и Dib имели частоту 0,56 и 0,44 соответственно (Castilho и соавт. [24]). Анализ вариантов Мемфис белка полосы 3 с рестрикцией Msp\ подтвердил корреляцию аллелей Dia и Dib с кодонами Glu 56 и Lys 56 соответственно. Исключение составили индивиды Dia/Dia, гетерозиготные по Glu 56 и Lys 56 кодонам.
Jarolim и соавт. [74] описали 2 европеоидов Di(a+b-), гетерозиготность которых (Dia/Dib) подтверждалась молекулярно-генетическими тестами. У одного из них выявлена мутация, изменявшая рамку считывания, у другого - нонсенс-кодон внутри Dib.
Антигены Dia и Dib устойчивы к действию папаина, трипсина, а-химотрипсина, проназы, сиалидазы и сульфгидрильным редуцентам (Daniels [36]).
Иногда антиген Dib может быть слабо выражен. Описана мексиканская женщина, фенотип которой при первичном исследовании был определен как Di(a-b-). Однако последующие исследования выявили у нее слабый антиген Dib (Biro и соавт. [14]). Низкий уровень экспрессии антигена Dib у нескольких мексиканцев с фенотипом Di(a+) описали Edwards-Moulds, Alperin [42]). При обследовании 784 жителей Америки испанского происхождения Issitt и соавт. [70] установили, что все они имеют антиген Dib, в 11 случаях последний был слабо выражен. Исследование этих образцов с сыворотками анти-Di3 лишь в одном случае выявило этот антиген. Таким образом, феномен слабой экспрессии антигена Dib не был связан с эффектом дозы. Сниженная экспрессия антигена Dib имелась у лиц с овалоцитозом, встречающимся в Юго-Восточной Азии (Kusnierz-Alejska, Bochenek [89]).
