Категория: Система Р, GLOB и коллекция 209

Опубликовано: 20 апреля 2014

Антиген Р^к и антитела анти-Р^к

Антитела анти-Р^к и соответственно антиген Р^к открыты в 1959 г. Matson и соавт. [108] с помощью дифференциальной адсорбции сыворотки, содержавшей комбинированные антитела.

Особенностью лиц Р^к+ является то, что их эритроциты не содержат часто встречающегося антигена Р, а в сыворотке крови присутствуют анти-Р-антитела. Кроме того, сыворотки слабо реагируют с эритроцитами р (Kortekangas и соавт. [83], Tippett [156]).

Антиген Р^к одинаково хорошо экспрессирован в эритроцитах независимо от факторов Pj и Р₂.

Индивиды Р^к+ встречаются крайне редко, реже, чем лица с нулевым фе-НЩНПОМ р (Daniels [37]). Все они были выявлены благодаря неизменному присутствию в сыворотках их крови анти-Р-антител. Лица Р^к+ были выявлены,

в основном, среди финнов и японцев (Daniels [37], Race, Sanger [133]).

Обращало на себя внимание, что родители пробандов Р^к+ были Р^к-. Это да­вало основание полагать, что наследование гена Р^к имеет рецессивный характер (Moullec и соавт. [119], Nakagima и соавт. [126], Race, Sanger [133]). Родители 7 индивидов Р^к+ состояли в кровном родстве. Вместе с тем рецессивный харак­тер наследования может представлять собой только видимость, поскольку ве­щество Р^к является предшественником субстанции Р, и стандартные серологи­ческие методы позволяют выявить его только у лиц Р- (гомозигот Р^к/Р^к).

По результатам прямых серологических тестов создавалось впечатление, что антиген Р^к является очень редким. Однако Fellous и соавт. [42] обнаружили его на фибробластах всех лиц ?_{ и Р₂; фибробласты лиц р этот антигена не содержа­ли. Затем Naiki и Marcus [125] установили, что тригексозид церамида (Gb3) -один из основных мембранных гликолипидов эритроцитов - ингибирует актив­ность антител анти-Р^к. Naiki и Kato [123] указали на присутствие Р^к на эритро­цитах Pj и Р₂. Они высказали предположение, что ранее полученные результаты были ложноотрицательными, поскольку при адсорбции антител анти-Р 1Р^к эри­троцитами Pj (содержащими Gb3), помимо анти-Р 1-антител, из сывороток уда­лялась также и фракция анти-Р^к. Позднее присутствие антигена Р^к на эритроци­тах Р и Р₂ подтвердили с помощью МКА анти-Р^к. Слабую экспрессию антиге­на Р^к объяснили неполным превращением глобозида 3 в глобозид (антиген Р).

Антиген Р^к лучше экспрессирован на эритроцитах LKE-, чем LKE+ (см. Антиген LKE).

Антиген Р^к, идентифицированый как CD77, присутствует на лимфоцитах, гранулоцитах, моноцитах, тромбоцитах, клетках гладкой мускулатуры пищева­рительного и мочеполового тракта (Kasai и соавт. [75]), клетках злокачествен­ных опухолей (Bono и соавт. [15], Wiels и соавт. [170]) и считается информа­тивным при диагностике лимфомы Беркитта. Полагают, что CD77 участвует в апоптозе клеток зародышевых центров В-лимфоцитов (Khine и соавт. [80], Mori и соавт. [117]). Связывание CD77 и CD19 (специфический В-клеточный маркер) в дальнейшем приводит к апоптозу В-клеток (Mangeney и соавт. [104]).

Аллоиммунные антитела анти-Р^к присутствуют одновременно с анти-Р и анти-Р 1 в сыворотках крови лиц нулевого фенотипа р. Их выделяли из не­которых сывороток адсорбцией эритроцитами Pj (Race, Sanger [133], Tippett [156]). Такие антитела реагируют одинаково интенсивно с эритроцитами Р1 и Р2я?Активность антител анти-Р^к нейтрализуется жидкостью эхинококковых кист (Kortekangas и соавт. [84], Matson и соавт. [108]). Используя метод инги-биции анти-Р^к-антител различными фракциями эхинококковой жидкости и оли-госахаридами известной структуры, Watkins и Morgan [168] пришли к выво­ду, что антитела анти-Р^к имеют более широкую специфичность, чем анти-Р 1. Установлено, что дисахарид Galal —► 4Gal, выделенный из Pj ^специфичного дшкопротеина жидкости эхинококка, так же как Р1-специфический трисахарид и олигосахариды, имеющие группировку Galal Щ 4Gal, ингибирует активность антител анти-Р^к (Naiki и соавт. [123]).

Помимо аллоиммунных антител, описаны аутоиммунные анти-Р^к-антитела, которые находили у больных аутоиммунной гемолитической анемией и билиар-ным циррозом печени (Race, Sanger [133]).

Иммунизацией крыс клетками лимфомы Беркитта были получены монокло­нальные анти-Р^к-антитела (Wiels и соавт. [170]), реагирующие с Gb3. Эти ан­титела реагировали в высоком титре с клетками Р₂^к и Р₂^к, слабо реагировали с папаинизированными эритроцитами Р. и Р и давали отрицательные реакции с эритроцитами нулевого фенотипа р.

Другие образцы МКА анти-Р^к получены иммунизацией мышей синтетиче­скими гликопротеинами, содержащими Р^к-специфические компоненты, глобо-зидом 3, выделенным из эритроцитов свиней и клеточных линий плоскоклеточ­ной карциномы пищевода (Kasai и соавт. [75], Miyamoto и соавт. [113]).

Категория: Система Р, GLOB и коллекция 209

Опубликовано: 20 апреля 2014

Антиген Р ~ гликолипидный глобозид - имеется на всех эритроцитах за ис­ключением редких фенотипов р и Р\ Он одинаково экспрессирован на эритро­цитах Pj и Р₂ взрослых лиц. Этот антиген в отличие от антигена Р1 хорошо раз­вит к моменту рождения. Несколько слабее он выражен у новорожденных Р по сравнению с новорожденными Р.

Сведения об экспрессии антигена Р на других клетках крови противоречивы. С помощью метода проточной цитофлюориметрии Dunstan [39] выявил антиген Р на лимфоцитах, гранулоцитах и моноцитах; в своих экспериментах автор приме­нил аллогенные анти-Р-антитела. Напротив, von dem Bome и соавт. [163], исполь­зуя моноклональные анти-Р-антитела, не обнаружили указанный антиген на гра­нулоцитах и большинстве лимфоцитов периферической крови, хотя при этом он присутствовал на клетках эндотелия, тромбоцитах, мегакариоцитах и фибробла-стах. Другие авторы (Shevinsky и соавт. [149]), применив несколько образцов мо­ноклональных анти-Р-антител, не нашли фактора Р на лимфоцитах и фибробла-стах. Антиген Р выявлен в клетках злокачественных опухолей (Bono и соавт. [15], Kelus и соавт. [77], Shevinsky и соавт. [149], von dem Bome и соавт. [163]), в клет­ках печени и сердца плода, а также в плаценте (Spitalnik и соавт. [153]).

Анти-Р-антитела найдены в сыворотках лиц, имевших фенотип P^k. Kortekangas и соавт. [83], Matson и соавт. [108] выделили анти-Р-антитела из сьюороток лиц р, содержащих комбинированные антитела, адсорбцией эритроцитами или Р₂^к. Такие же антитела получили Watkins и Morgan [168], нейтрализуя сыворотку с комбинированными антителами жидкостью эхинококковых кист.

Большинство анти-Р-антител является смесью IgM и IgG (Lopez и соавт. [103], Soderstrom и соавт. [151], Yoshida и соавт. [176]) и иногда содержат фрак­цию IgA (Hansson и соавт. [55]). В присутствии комплемента анти-Р-антитела IgM вызывали гемолиз эритроцитов Р1 и Р2 (Adinolfi и соавт. [2]).

Помимо аллоиммунных анти-Р-антител встречаются аутоиммунные антите­ла такой же специфичности. Их обнаруживали у больных пароксизмальной хо-лодовой гемоглобинурией (Worlledge, Rousso [173]). Это один из вариантов ау­тоиммунной гемолитической анемии, развивающейся преимущественно у де­тей как осложнение перенесенной вирусной инфекции. Сыворотка крови таких больных содержит гемолизины, получившие название двухфазных гемолизинов Доната - Ландштейнера по имени авторов, впервые их описавших и предложив­ших соответствующую пробу для их определения. Проба Доната - Ландштейнера сводится к следующему: сыворотку выдерживают с эритроцитами при темпера­туре 4-8 °С (I фаза - сенсибилизация), затем экспонируют в термостате при тем­пературе 37 °С. При наличии в испытуемой сыворотке двухфазных гемолизинов эритроциты разрушаются (II фаза - гемолиз). Гемолиз происходит в присутствии комплемента, который содержится в исследуемой сыворотке.

В значительном числе случаев двухфазные гемолизины имеют анти-Р-специфичность, реагируют с эритроцитами Pj и Р₂, но не взаимодействуют с эритроцитами р и Р^к (Heddle [57], Levine и соавт. [95], van der Hart и соавт. [160]). Эти антитела относятся к классу IgG. Значительно реже встречаются двухфазные

аутоиммунные гемолизины со специфичностью анти-1, анти-i, анти-Pr (Sokol и

соавт. [152]) и анти-р (Engelfriet и соавт. [41], Issitt и соавт. [67]).

При проведении пробы Доната - Ландштейнера для усиления реакции эри­троциты обрабатывают папаином (Heddle [57], Sokol и соавт. [152]), сыворотки корригируют до слабокислого рН (Judd [70]).

Аутоиммунную гемолитическую анемию способны вызывать и однофазные аутоантитела анти-Р IgG-класса с температурным оптимумом между 20-32 °С (Lindgren и соавт. [99], Mensinger и соавт. [НО], Ries и соавт. [137]). Такие антите­ла выявляли только в среде с низкой ионной силой, тест Доната - Ландштейнера с ними был отрицательным (Cohen и соавт. [30], Judd и соавт. [71]).

Крысиные МКА анти-Р (МС631) к эмбриональному стадиоспецифическому мышиному антигену (SSEA-3) перекрестно реагировали с эритроцитами Р1 и Р2, но не реагировали с эритроцитами р и Р^к. Их активность угнеталась трисахари­дом GalNAcpl —> 3Galal —► 4Gal (Kannagi и соавт. [73], Tippett и соавт. [158]).

Мышиные МКА анти-Р IgM-класса, реагировавшие с очищенным глобо-зидом, вызывали сравнительно слабую холодовую агглютинацию, однако в присутствии комплемента наблюдали выраженный гемолиз эритроцитов Р+ (Rouger и соавт. [139], von dem Borne и соавт. [163]). Другой образец мышиных МКА, полученных иммунизацией экстрактом из Escherichia coli, в серологиче­ских реакциях также показал анти-Р-специфичность. Однако активность этих антител устранялась Т-специфическим иммуносорбентом (Gaipi —>3GalNAc-R) (Inglis и соавт. [66], Rouger и соавт. [139]).

Экстракты из лосося, форели и икры сельди реагировали с эритроцитами, содержащими антигены В, Р, Р1 или Р^к, но не агглютинировали эритроциты 0(1)р или A(II)p (Anstee и соавт. [7, 8], Voak и соавт. [161, 162]). Антитела не сепарируются по специфичности дифференциальной адсорбцией, поэтому цен­ность указанных экстрактов в качестве реагентов невелика.

Категория: Система Р, GLOB и коллекция 209

Опубликовано: 20 апреля 2014

Около 80 % европеоидов имеют фенотип Р . У негроидов Африки и индей­цев Южной Америки этот фенотип встречается чаще (более 90%). Частота группы Pj среди монголоидов составляет 30 % (Mourant и соавт. [120]).

У жителей Скандинавских стран частота фенотипа Р, составила 78,85 %; Р₂ - 21,15% (Henningsen [61, 62]). Частота генотипов составила: Р1⁺/Р1⁺ - 0,2917; P1VP1-- 0,4968; PJ-/P1- - 0,2115. 

В начальный период изучения системы Р возникло недоумение: почему во­преки закону Менделя у родителей Р, х Pj встречались дети Р₂, а у родителей Pj х Р₂ частота детей Р₂ была выше ожидаемой? Позднее эти расхождения были объяснены существованием слабых вариантов антигена Р1.

Более 66 % гомозигот (Р1⁺/Р1⁺) имеют хорошо выраженный антиген Р1 (Henningsen [60]). Эритроциты 34 % гомозигот и все без исключения гетерози­гота (Р1⁺/Р1~) содержат слабый вариант этого антигена (Fisher [44]).

Экспрессию антигена PI способен угнетать редкий доминантный аллель In(Lu) (Crawford и соавт. [36], Shaw и соавт. [146]). Он независим от гена Р1 и в равной мере ингибирует продукцию как антигена Р1, так и антигена Р2. Это проявляется в том, что на эритроцитах Lu(a-b-) антиген Р1 слабо выражен (Contreras, Tippett [31]).

Антиген Р1 выражен слабее у новорожденных, чем у взрослых, поэтому у детей чаще выявляют фенотип Р₂, в то время как их действительный фенотип Р1. К моменту рождения экспрессия антигена Р1 низкая, однако этот антиген хорошо выражен на клетках плода на 12-й неделе внутриутробного развития. Затем происходит снижение экспрессии Р1. Так, среди 3-месячных плодов ан­тиген Р1 выявляли чаще, чем у 7-месячных (Ikin и соавт. [65]). Окончательное формирование антигена Р1 происходит к 7 годам (Heiken [58], Henningsen [61]).

Методом проточной цитофлюориметрии показано присутствие антигена Р1 на лимфоцитах, гранулоцитах и моноцитах (Dunstan [39]).

Гельминты (ленточные глисты и сосальщики) содержат парциальный анти­ген Р1. Жидкость из цист печеночного эхинококка овец ингибировала актив­ность анти-Р 1-антител (Cameron и соавт. [23]).

У лиц Р₂, больных эхинококкозом и описторхозом, часто присутствуют вы-сокоавидные анти-Р 1-антитела (Ben-Ismail и соавт. [13], Bevan и соавт. [14], Cameron и соавт. [23], Petir и соавт. [130]).

Субстанция Р1 найдена в нематодах - земляных червях {Lumbricus terres-tis) и аскаридах {Ascaris suum). PI-подобный антиген обнаружен в эритроци­тах, плазме и экскрементах голубей и горлиц (Francois-Gerard и соавт. [47, 48], Radermecker и соавт. [134]).

Антитела анти-Р 1 чаще обнаруживали у любителей голубей (62 % от всех носителей антител), чем у лиц, не имевших контакта с этими птицами (6 %) (Radermecker и соавт. [134]). Примерно 30 % носителей антител приходилось на больных гельминтозами и лиц, имевших антитела неизвестной этиологии.

Экстракты из яиц гельминтов и жидкость эхинококковых кист успешно ис­пользовали для иммунизации животных с целью получения анти-Р 1-антител, они содержат трисахарид Galal —> 4GalJ31 Щ 4GlcNAc, обладающий Pl-специфичностью (Francois-Gerard и соавт. [48], Khoo и соавт. [81]).й

Аллоиммунные анти-Р 1-антитела встречаются нечасто. Они, как правило, имеют невысокую активность (Chandeysson и соавт. [27], Cheng [28], Сох и соавт. [35], Wiener и Unger [172]), проявляют себя как холодовые агглютинины и в подавляющем большинстве случаев не имеют существенного клинического значения. Посттрансфузионные осложнения, обусловленные ими, бывают редко. Опубликованы 2 случая гемолитических реакций (1с летальным исходом), вызванных анти-Р 1-антителами, агглютинировашими эритроциты in vitro при 37 °С (Arndt и соавт. [9], Moureau [121]).

Сообщалось о нескольких случаях замедленных гемолитических посттранс­фузионных реакций, обусловленных антителами анти-Р 1, которые не были

мвлены при проведении пробы на индивидуальную совместимость. В одном случае антитела исчезли через 4 мес. после гемотрансфузии (Chandeysson и со­авт. [27], DiNapoli и соавт. [38]).

Проба с радиоактивной меткой показала, что 50 % эритроцитов Р1, введен­ных реципиентам, имеющим активные при 37 °С анти-Р 1-антитела, разруша­лись в течение первых суток. Элиминация оставшихся в кровотоке меченых эритроцитов происходила медленно (Mollison и соавт. [115]). В пробе с моно­слоем моноцитов антитела анти-Р 1, активные при 37 °С, разрушали 22 % эри­троцитов Pj при норме 3 % (Norman и соавт. [127]).

Антитела анти-Р 1 находили у лиц с нулевым фенотипом р в качестве фрак­ции, отделяемой с помощью адсорбции эритроцитами Р₂ (Race, Sanger [133]). Анти-Р 1-антитела ни разу не описаны у лиц Р ^k (Norman и соавт. [127]).

Как уже отмечалось выше, первый образец антител анти-Р 1 был получен Ландштейнером и Левиным [90] иммунизацией кроликов эритроцитами челове­ка. В дальнейшем такие же антитела естественного происхождения были выяв­лены в сыворотках кроликов и других животных.

Реагенты анти-Р 1 получали иммунизацией коз эритроцитами человека Р₂, об­работанными таннином или жидкостью из кист эхинококка (Levine и соавт. [96]).

В качестве иммуногена для получения анти-Р 1-антител использовали экстрак­ты из бацилл Shigella shigae (Watkins, Morgan [168]) и земляных червей (Prokop, Schlesinger [131]), а также яичный белок горлиц (Francois-Gerard и соавт. [47]).

Моноклональные антитела анти-Р 1 получены Bailly и соавт. [11] в результате иммунизации мышей яичным белком горлиц.

Brodin и соавт. [18] получили анти-Р 1 MICA иммунизацией мышей синтети­ческим гликопротеином, содержащим трисахарид Galal —§ 4Gaipi —► 4GlcNAc.

Специфические МКА получены при иммунизации животных эритроцитами PI (Bouhours и соавт. [17]).

Активность МКА анти-Р 1 ингибировалась трисахаридом, а также дисахаридом Galal им 4Gal (Bailly и соавт. [11], Rouger и соавт. [139]). МКА Анти-Р1 реагировали одинаково интенсивно как с Р1-специфическим трисахаридом Galal —> 4Gaipi Щ 4GlcNAc, так и с Р^к-специфическим трисахаридом Galal 4Galpl -»4Glc (Brodin и соавт. [18]).

Сравнительное изучение МКА анти-Р 1 проведено Bailly и соавт. [11], Beck [12], Chester и соавт. [29] на 3 рабочих совещаниях. Один из образцов МКА имел специфичность анти-Р 1Р^к. Эти антитела, полученные иммунизацией мы­шей гликопротеином, содержавшим Р^к-трисахарид, агглютинировали эритроци­ты Р_р P_t^k и Р₂^к, но не реагировали с эритроцитами Р₂ и р (Brodin и соавт. [18]).

Issitt и соавт. [69] описали антитела анти-IPl, которые в серологических ре­акциях вели себя как анти-Р 1 с той лишь разницей, что не реагировали с эри­троцитами новорожденных Р_г

Booth [16], Ramos и соавт. [135] нашли двухфазные гемолизины со специ­фичностью анти-1^тР1.

Категория: Система Р, GLOB и коллекция 209

Опубликовано: 20 апреля 2014

Первые исследования биохимической природы указанных антигенов про­вели Morgan и Watkins [116], выделившие Р1-активный гликопротеин из жид­кости эхинококка.

Детерминанта Р1 представляет собой трисахарид (Cory и соавт. [33]), отно­сящийся к гликосфинголипидам глобозидам. Изучение структуры указанных субстанций, а также генов, кодирующих соответствующие гликозилтрансфера-

зы, позволило установить, что антигены, имеющие фенотипическую связь, не могут быть причислены к одной групповой системе.

Следует отметить, что обозначения указанных антигенов неоднократно менялись. Так, рабочая группа ISBT по терминологии эритроцитарньк антигенов присвоила номер 003 системе Р, однако в последнюю был включен только антиген Р1 (003001). Остальные антигены (Р, P^k, LKE) были отнесены к глобозидной коллекции 209 (GLOB): антиген Р обозначен GLOB1, P^k - GLOB2, LKE - GLOB3. Последующие изменения произошли в 2002 г., когда был картирован ген B3GALT3, ответствен­ный за синтез антигена Р, на хромосоме 3 в положении 3q26.1 (Hellberg и соавт. [59]). Таким образом, антиген Р получил статус системы, названной «Глобозиды», за ним сохранено обозначение GLOB1. Антигены Р^к и LKE пока оставлены в составе кол­лекции 209. Полагают, что каждый из них может представлять самостоятельную эритроцитарную групповую систему (Reid, Lomas-Francis [136]).

Фенотипы, образуемые антигенами системы Р, системы GLOB и коллекции 209, представлены в табл. 7.1. Обозначение Р, используют для клеток Р1+Р+, обозначение Р₂ - для эритроцитов Р1-Р+; символы Pj^k и Р₂^к - для обозначения групп Р1+Р-Р^к+ и Р1-Р+Р^к+ соответственно; нулевой фенотип (Р1-Р-Р^к-) обозначают буквой р. Соответствующие гены получили обозначения Р¹⁺иР^н (контролируют синтез параглобозида), Р⁺ и Р~ (глобозидные гены); Р^к+ и Р^к~ (гены лактозилцерамида).