Антитела Indian

Антитела анти-1п^а и анти-1п^ь не обладают способностью связывать ком­племент (Reid, Lomas-Francis [54]), лучше выявляются в непрямой анти-ННВИ пробе (Giles [24], Longster, Robinson [35], Bhatia и соавт. [8]). ИННИ вызывали прямую агглютинацию эритроцитов донора и выявлялись при проведении пробы на индивидуальную совместимость перед гемотрансфузией.

Аллоиммунизация антигенами Indian развивается достаточно быстро, по­скольку они обладают относительно высокой иммуногенностью.

По данным Bhatia и соавт. [8], у 30 из 39 добровольцев D-In(a-), искус­ственно иммунизацированных эритроцитами D+In(a+) с целью получения сы­рья для производства иммуноглобулина резус, помимо анти-О-антител, вырабо­тались анти-1п^а-антитела.

Joshi и соавт. [31] наблюдали реципиента, у которого анти-1п^а-антитела обра­зовались после переливания одной дозы эритроцитов 1п(а+).

Ferguson и Gaal [21] описали анти-1п^ь-антитела у первобеременной, не имев­шей гемотрансфузий.

Изучение выживаемости эритроцитов 1п(а+) в кровяном русле сенсибилизи­рованных лиц показало, что анти-1п^а-антитела быстро разрушают иногруппные эритроциты. Последние исчезали из кровотока реципиента по истечении 20 мин с момента введения (Bhatia и соавт. [8]).

Быструю убыль 1п^ь-положительных эритроцитов наблюдали Ferguson и Gaal [21] у больного, сенсибилизированного указанным антигеном.

Описан случай немедленной гемолитической реакции, обусловленной анти-1п^ь-антителами, после переливания 50 мл несовместимой крови (Joshi [29]).

При очевидной трансфузионной значимости антитела Indian не проявляли себя в качестве причины ГБН. Прямой антиглобулиновый тест с эритроцита­ми новорожденных лишь иногда был положительным, однако клинических про­явлений ГБН не наблюдалось (Garner, Devenish [23], Reid, Lomas-Francis [54], Sosler и соавт. [56]).

Получены моноклональные анти-СБ44-антитела (Stoll и соавт. [58], Blancher и соавт. [9]) и анти-1п^ь (Stoll и соавт. [58]).

Анти-AnWj

Антитела анти-AnWj могут быть как аутоиммунными, так и аллоиммун-ными. Описаны две женщины AnWj- с наличием аллоиммунных анти-AnWj-антител. Обе имели беременности. В сыворотке крови их брата, также AnWj-, указанные антитела отсутствовали.

Poole et al [48] выразили сомнение относительно того, что образование анти-AnWj-антител может быть инициировано ничтожно малыми количествами ан­тигена, имеющимися на эритроцитах плода.

Антитела анти-AnWj вызывали гемолитические посттрансфузионные реак­ции (Magrin и соавт. [38], De Man и соавт. [19]), но ни разу не были описаны как причина ГБН.

Считается, что наилучшей трансфузионной средой для реципиентов, имею­щих анти-AnWj-антитела, являются эритроциты доноров Lu_null. Политический потенциал анти-АпМ^-антител характеризует приживаемость (продолжительность циркуляции) эритроцитов invivo(De Man и соавт. [19], Davis и соавт. [18], Harrison и соавт. [28]).

Функции CD44

Гликопротеин CD44 широко представлен в организме человека и лишь не­многие клетки его не содержат. Он имеется на эритроцитах, Т- и В-лимфоцитах, гранулоцитах, моноцитах (Spring и соавт. [57], Telen и соавт. [65, 66], Dalchau и соавт. [13]). CD44 присутствует в клетках тимуса, печени, легких, кожи, молоч­ной железы, мышцах, а также в эпителии желудка, тонкой кишки и желчного пузыря (Anstee и соавт. [1], Flanagan и соавт. [22]).

Лиганд CD44 выполняет многочисленные биологические функции: участвует в адгезии стромальных, эпителиальных и эндотелиальных клеток, взаимодействии Т-и В-лимфоцитов в процессе иммунного ответа, фиксации лимфоцитов в очаге вос­паления. Лиганду CD44 приписывается участие в формировании матрикса зажи­вающей раны, альтернативном сплайсинге, а также в метастазировании опухолей (Bajorath [5], Borland и соавт. [10]). Многие из перечисленных взаимодействий про­исходят при участии гиалуроновой кислоты, которая, являясь высокомолекулярным гликозаминогликаном, входит в состав межклеточного вещества, а также структуру мембраны клеток. CD44 взаимодействует с коллагеном, фибронектином и ламини-ном, участвует в адгезии стромальных эритроидных предшественников в процессе образования колоний (Chan, Watt [11], Ostendorp и соавт. [43]).

INFIи INJA

В 2006 г. к системе Indian отнесены еще 2 часто встречающихся антигена -INFI и INJA (Daniels и соавт. [17]). Оба антигена идентифицированы Poole и соавт. [49, 50]. Авторы собрали 5 сывороток с высокой частотой реагирования, но отличающиеся специфической направленностью. Сыворотки были получе­ны от беременных женщин: 3 марокканок и 2 пакистанок, и изучались в тече­ние 10 лет. Посредством иммобилизации моноклональных антител удалось по­казать, что антитела всех 5 сывороток реагируют с детерминантами, располо­женными на гликопротеине CD44. Далее Poole и соавт. провели секвенирование гена CD44 указанных женщин. Оказалось, что марокканки гомозиготны по му­тации С 255 G в экзоне 3, пакистанки гомозиготны по мутации С 488 А в экзо-не 5. Первая мутация вызвала аминокислотную замену His 85 Glu, вторая - Tre 163 Arg. Антиген, открываемый сыворотками марокканок, получил обозначение INFI, открываемый сыворотками пакистанок - INJA. После включения в систе­му Indian антигены получили обозначение ISBT - IN3 и IN4 соответственно.

Известно, что одиночные аминокислотные замены в субстрате способны стимулировать синтез специфических антител, распознающих эти участки. В связи с этим не исключено, что замены Glu 85 и Arg 163 могут проявляться фе-нотипически как редко встречающиеся антигены, антитетичные часто встреча­ющимся антигенам INFI и INJA, подобно редкому фактору 1п^а по отношению к часто встречающемуся In^b.

AnWj

Как отмечают Race и Sanger [52], часто встречающийся антиген Anton (An) впервые обнаружили Boorman и Tippett в 1972 г., однако эта находка не была опубликована. Вторую сыворотку со специфичностью анти-Ап нашел в 1980 г. Daniels [14]. Оба образца антител не реагировали с эритроцитами Lu_nuH(Lutheran,.) и эритроцитами новорожденных, на основании чего выявляемый ими антиген сначала был причислен к системе Lutheran и получил обозначение LU15. Однако Poole и Giles [47] показали, что антитела анти-Ап реагируют с эритроцитами Lu_null рецессивного типа и следовательно выявляемый ими анти­ген не может быть производным гена LU.

В 1983 г. Marsh и соавт. [40] нашли аутоантитела, получившие обозначение анти-Wj. Они реагировали с эритроцитами 415 случайно выбранных лиц и тре­мя образцами эритроцитов Lu „ рецессивного типа. С помощью метода адсорбции авторы установили, что эритроциты Lu_null доминантногоэритроциты новорожденных, не реагировавшие в реакции агглютинации с ан­тителами анти-Wj, все же содержат некоторое количество антигена Wj.

В 1985 г. Poole и Giles [46] высказали предположение, что антитела анти-An и анти-Wj идентичны и открывают один и тот же антиген. Вскоре это предполо­жение нашло подтверждение. Mannessier и соавт. [39] наблюдали пациента с бо­лезнью Ходжкина, у которого констатировали временную утрату антигенов Wj и An. Его эритроциты не реагировали с сывороткой анти-Wj и сывороткой анти-Ап. В крови больного присутствовали антитела, идентифицированные как ауто­иммунные анти-Wj. Через 6 мес. на фоне ремиссии антитела исчезли, а больной обрел фенотип An+Wj+. Полученные данные сочли доказательными для заклю­чения о том, что антигены An и Wj идентичны. Новый антиген получил обозна­чение AnWj и был включен в серию 901 «Часто встречающиеся антигены» под номером 901009. Обозначение Ш15 (005015) по отношению к этому антигену больше не используют и из классификации ISBT исключили.

Нулевой фенотип AnWj- обычно приобретенный транзиторный, вместе с тем, как показали Poole и соавт. [48], он может быть генетически детермини­рованным. Так, из 7 детей, родившихся у арабской женщины AnWj-, имевшей анти-AnWj-антитела, 2 были AnWj-. Поскольку другие дети женщины имели фенотип AnWj+, а ее муж приходился ей кровным родственником, возникло предположение, что носителями фенотипа AnWj- могут быть лица, гомозигот­ные по редко встречающемуся рецессивному молчащему гену.

Посемейное исследование показало, что антиген AnWj не связан с локусом LU, так же как и с локусами ABO, MNS, RH, KEL, FY, Ж, XGи ХК.

Среди 2400 американских доноров, эритроциты которых были исследованы сывороткой анти-AnWj, 3 имели фенотип Lu_nu„. Лица AnWj- с нормально выра­женными антигенами Lutheran отсутствовали (Lukasavage [37]), в связи с чем воз­никли сомнения относительно полной независимости антигена AnWj от гена LU.

Следует отметить, что антиген In^b, не входящий в систему Lutheran, и антиген AnWj, не входящий ни в систему Indian, ни в систему Lutheran, одинаково слабо выражены на эритроцитах Lu_null доминантного типа. На таких эритроцитах при­сутствие антигена AnWj удается показать только с помощью адсорбции - элюции (Poole и соавт. [48]). На эритроцитах Lu_nul, рецессивного и Х-ассоциированного типа антиген AnWj выражен нормально (Poole, Giles [47], Norman и соавт. [41]).

Антиген AnWj в противоположность антигенам Indian и Lutheran устойчив к трипсину, химотрипсину и сульфгидрильным реагентам.

Своеобразным является онтогенез антигена AnWj. У новорожденных фено­тип AnWj- меняется на AnWj+ на 3^16 день после рождения, причем преобразова­ние происходит в течение суток (Poole, Van Alphen [51]). Этот феномен пока не име­ет объяснения. Эритроциты поступают в кровоток постепенно. Полагать, что в кро­вяном русле появляется фактор конверсии, одномоментно превращающий эритроци-IpAnWj- в AnWj+, нет оснований. Возможно, растворимая форма вещества AnWj, -'Мздой критической концентрации в плазме крови, адсорбируется на эритроцитах.

Антигены Indian (Индиан) впервые обнаружены у индийцев, отсюда их на­звание. Система представлена четырьмя антигенами: относительно редким 1п^а и часто встречающимися: In^b, INFI и INJA. Указанные антигены расположены на гликопротеине CD44, выполняющем функции молекул межклеточного взаимо­действия. Антигены 1п^а и In^b антитетичны, их различия обусловлены аминокис­лотной заменой Arg 46 Pro. Антигены INFI и INJA не антитетичны.

Ген, контролирующий синтез вещества Indian и одновременно синтез CD44, картирован на хромосоме 11 в локусе 11р13.

Вместе с данной системой рассматривается еще один антиген -An Wj (901009), относящийся к серии 901 «Часто встречающиеся антигены». Он не включен в си­стему, однако есть данные, что он имеет отношение к CD44 и между ним и факто­рами Indian прослеживается некоторая связь.

Антигены Indian In^aи In^b

В 1973 г. Badakere и соавт. [2, 3] обнаружили антитела, реагирующие с эри­троцитами 2,9 % жителей Бомбея. Антитела были обозначены как анти-1п^а. Двумя годами позднее Giles [24] описала антитела, открывавшие часто встреча­ющийся антиген, антитетичный 1п^а. Они получили обозначение анти-1п^ь.

Посемейные исследования показали, что гены 1п^аи In^bпередаются по на­следству кодоминантно (Badakere и соавт. [3,4] Ferguson, Gaal [21]). Частота ге­нов 1п^а и1п^ьсоставляет 1,47 % и 98,53 % соответственно. Расчетная частота ге­нотипов: 1п^а/1п^а- 0,02 %, In^a/In^b- 2,90 % и In^b/In^b- 97,08 %.

Ferguson и Gaal [21] на примере одной семьи показали возможность суще­ствования молчащего аллеля In. Его присутствие позволяет объяснить происхо­ждение редко встречающегося фенотипа In(b-).

Фенотип In(b-) может быть, по-видимому, не только генетически детерми­нированным, но и приобретенным.Лдтиген 1п^а у европейцев встречается редко (менее 0,1 %), In^b - часто (бо­лее 99,9 %). Антиген 1п^а чаще встречается у арабов и иранцев (табл. 23.1): 10,6 и 11,8 % соответственно (Badakere и соавт. [3, 4], Longster и соавт. [34]). Среди 700 индийских доноров были найдены 2 человека In(b-) (Joshi [29]). Фактическая ча­стота лиц In(b-) (0,28 %) в 14 раз превысила расчетную (0,02 %). Среди 251 эми­гранта из Азии, проживающих в Северной Англии, 2 имели фенотип In(a+b-), 8 - In(a+b+) (Longster, Robinson [35]). Частота фенотипа In(a+b-) и в этой группе превысила ожидаемую. У других народов антигены Indian не изучены.

Антигенные различия 1п^а/1п^ь обусловлены заменой одной пары нуклеотидов G 252 С в экзоне 2 гена CD44. У лиц 1п(а+) позицию 46 в протеине CD44 занима­ет пролил, у лиц In(b+) в позиции 46 располагается аргинин. Это удалось устано­вить путем трансфекции клеток лейкемической линии Jurkat человека образцами кДНК, полученными от людей 1п(а+) и In(b+). При проведении эксперимента вы­явлены мутации Т 322 С - молчащая, Т 370 С - молчащая, А 441 С, Y109 S, А 831 G, Q 239 G. Все они, кроме G 252 С, не влияли на экспрессию антигена 1п^а.

Распределение антигена 1п^а у некоторых народов

Антигены Indian разрушаются папаином, трипсином, химотриписном и про-назой (Badakere и соавт. [3], Dumasia, Gupte [20], Giles [24], Longster, Robinson [35]). В ряде случаев выявлялись эпитопы, устойчивые к действию трипсина и химотрипсина (Anstee и соавт. [1]).

Антигены Indian разрушаются сульфгидрильными реагентами, в том числе АЕТ и DTT (Dahr, Kruger [12], Daniels [15], Ferguson, Gaal [21], Joshi и Bhatia [29,30]), иногда для этого требовалась повышенная концентрация редуцента.

Обработка эритроцитов сиалидазой не влияла на экспрессию антигенов 1п^а и In^b и экспрессию протеина CD44.

Эритроциты In(a-b+) и In(a+b+) отличаются по выраженности агглютина­ции сывороткой анти-1п^ь, взятой в разведении (Joshi [29]).

У беременных и новорожденных экспрессия антигена 1п^а снижена (Bhatia ц соавт. [8], Dumasia, Gupte [20]). В непрямой радиометрической пробе коли-трто антигена В на эритроцитах беременных составило 38 %, на эритроци-Цршроворожденных 25 % от его уровня у взрослых лиц контрольной группы (Dumasia, Gupte [20]). Через 3-6 мес. после родов выраженность указанного ан-Шгена возвращалась к норме (Dumasia, Gupte [20]).