К системе Gerbich отнесены 4 редких антигена: Wb, Lsa, Апа и Dha, получившие обозначения GE5, GE6, GE7 и GE8. Они были включены в систему Gerbich в основном по результатам биохимических исследований, в которых было установлено место их расположения на гликофоринах С и D.
В эритроцитах обладателей редких антигенов Gerbich наряду с атипичными гликофоринами, несущими указанные редкие антигены, содержатся нормальные гликофорины С и D. Индивиды, гомозиготные по редким антигенам, не выявлены.
Wb
Антиген Wb (Webb) описали Simmons и Albrey [112] в 1963 г. Антитела анти-Wb присутствовали в одной из сывороток для определения группы крови АВО. Три образца aHTH-Wb-антител обнаружено при проведении скрининга 7544 сывороток (Bloomfield и соавт. [9], Race, Sanger [90]).
На эритроцитах Wb+ гликофорин С частично замещен атипичным гликофорином (GPC.Wb), имеющим более низкую мол. массу (на 3 кДа ниже, чем гликофорин С) (Macdonald, Gerns [60], Reid и соавт. [101]).
В этироцитах лиц Wb- указанный атипичный гликофорин отсутствует. Однако обработка эритроцитов Wb- эндогликозилазой F, которая отщепляет N-связанные олигосахариды, приводила к уменьшению мол. массы гликофорина С до значений, соответствующих таковым у GPC.Wb. Обработка эндогликозилазой F гликофорина GPC.Wb не оказывала на него влияния.
У лиц Wb+ выявлена мутация А 23 G в экзоне 1 гена GYPC, ведущая к замещению аспарагиновой кислоты серином в позиции 8 молекулы гликофорина С (Chang и соавт. [13], Telen и соавт. [122]).
У лиц Wb- аспарагиновая кислота в положении 8 N-гликозилирована, что обусловливает большую мол. массу нормального гликофорина С по сравнению с атипичным гликофорином GPC.Wb, который в этой точке не N-гликозилирован. Неизвестно, подвергается ли аспарагиновая кислота в положении 8 О-гликозилированию, что, возможно, могло бы привести к появлению нового редкого антигенного эпитопа Gerbich.
Антиген Wb разрушается трипсином и сиалидазой, но устойчив к химотрип-сину (Macdonald, Gerns [60], Reid и соавт. [95,101]).
Lsa
Антигены Lsa (Lewis II) и Rla при сравнении оказались одним и тем же антигеном (Kornstad и соавт. [50, 51]). Он выявляется у финнов и негров с частотой около 2 %, у других народов он встречается реже (табл. 20.5).
Анти-Ь8а-антитела впервые выявлены в анти-В-реагенте для определения группы крови АВО. Другие образцы идентифицированы в сыворотках с комбинированными антителами (Kornstad [50]), а также при выполнении проб на индивидуальную совместимость перед гемотрансфузией (Clark, Dorman [14]). Антитела анти-Ls3 в одном случае сопровождали ГБН, потребовавшую для лечения обменного переливания крови, однако их причинная роль в ГБН осталась недоказаной (Sistonen [ИЗ]). Один образец arnn-Ls* найден при скрининге 4000 сывороток европеоидов (Kornstad и соавт. [51], Race, Sanger [90]). При обследовании 44 ООО доноров японцев найдено 19 образцов сывороток с антителами aHTH-Lsa (Onodera и соавт. [82]).
Таблица 20.5
Распределение редких антигенов Gerbich у разных народов
|
Антиген |
Популяция |
Количество |
Частота, % |
Источник |
|
|
обследованных |
из них Ge+ |
||||
|
Wb (GE5) |
Белые австралийцы |
3 550 |
2 |
0,06 |
[112] |
|
|
Англичане |
15 815 |
3 |
0,02 |
[90] |
|
|
Валлийцы |
10 117 |
8 |
0,08 |
[9] |
|
|
Японцы |
3 470 |
0,00 |
[9,40,75] |
|
|
Lsa (GE6) |
Финны |
1 113 |
18 |
1,62 |
[15,90] |
|
|
Норвежцы |
7 151 |
8 |
0,11 |
[50] |
|
|
Американские негры |
ПО |
1 |
0,91 |
[90] |
|
|
Негры Вест-Индии |
878 |
9 |
1,03 |
[90] |
|
|
Негры Западной Африки |
81 |
2 |
2,04 |
[90] |
|
|
Японцы |
200 000 |
8 |
0,004 |
[82] |
|
|
Англичане |
5 887 |
0,00 |
[90] |
|
|
Ana (GE7) |
Финны |
10 000 |
6 |
0,06 |
[34] |
|
|
Шведы |
3 266 |
2 |
0,06 |
[34] |
|
Dha (GE8) |
Датчане |
2 493 |
0,00 |
[45] |
|
Антиген Lsa чувствителен к действию трипсина, но устойчив к фицину и си-алидазе (Macdonald и соавт. [59]). Ассоциация фактора Lsa с системой Gerbich установлена по наличию на эритроцитах лиц Ls(a+) необычных молекул гликофоринов С и D в дополнение к нормальным. Необычные гликофорины имели мол. массу, превышающую на 5,5 кДа мол. массу нормальных гликофоринов С и D (Macdonald и соавт. [59]).
Указанные атипичные гликофорины реагировали с антителами анти-веЗ. Гликофорин GPC.Ls3 взаимодействовал с МКА aHTH-Ge4 и связывал антитела aHTH-Ge2. Ш
У лиц Ls(a+) выявлена дупликация экзона 3 гена GYPC. Присутствие второго экзона 3 объясняет повышенное содержание в эритроцитах Ge3+ликофорина GPC.Lsa и гликофорина GPD.Lsa.
Предполагается, что возникновение фенотипов Ge:-2,3,4 и Ge:-2,-3,4 является результатом кроссинговера участков с делециями в экзонах 2 и 3 (Colin и соавт. [18], High и соавт. [39]). Неравновесный кроссинговер ведет к образованию гена GYPC с удвоением и выпадением отдельных участков экзонов 2 и 3. Удвоение экзона 3 приводит к синтезу необычной аминокислотной последовательности, которую, очевидно, и распознают анти-Ь8а-антитела. Синтетический пептид (TPTIMDIWIA-EPDRG), представляющий собой 11 аминокислот, кодируемых областью У экзона 3, и 5 аминокислот, кодируемых областью 5', ин-гибировал активность анти-Ь8а-антител (Stony и соавт. [119]).
Удвоение экзона 2 не приводило к какой-либо необычной аминокислотной последовательности в гликофорине и не сопровождалось появлением новой антигенной специфичности Gerbich.
Моноклональные антитела к одному из эпитопов гликофорина С (СВС-96) реагировали с эритроцитами Ls(a+) сильнее и в существенно большем разведении, чем с эритроцитами Ls(a-).
Onodera и соавт. [82], Uchikawa и соавт. [125, 126] исследовали эритроциты 200 ООО доноров японцев с помощью МКА анти-СВС-96 и нашли 60 образцов эритроцитов, дававших сильные положительные реакции; 8 из них были Ls(a+). Среди указанных 8 образцов в 1 образце эритроцитов экспрессия антигена Lsa была особенно высока. Эритроциты содержали необычные гликофорины С и D (GPC.KS и GPD.KS), отличавшиеся от гликофоринов GPC.Ls3 и GPD. Lsa большей (на 6 кДа) мол. массой. Молекулярно-генетическое исследование показало утроение экзона 3 гена GYPC. У 40 (0,02 %) лиц выявлено удвоение экзона 2 GYPC вследствие неравновесного кроссинговера. В отдельных случаях кроссинговер сопровождался делецией части экзона 2, что обусловливало возникновение фенотипа Ge:-2,3,4. У 6 (0,003 %) лиц указанные выше авторы выявили учетверение экзона 2, которое, как и ожидали авторы, не сопровождалось появлением качественно новых антигенов Gerbich (High и соавт. [39]).
Апа
Редкий антиген Ana (Ahonen) описан Furuhjelm и соавт. [34]. Его частота составляет 0,06 % среди финнов и шведов. Антитела анти-Апа имели естественное происхождение и встречались с частотой 1 : 1000 среди здоровых лиц (Furuhjelm и соавт. [34]).
Антиген Апа разрушался под воздействием трипсина, папаина и сиалидазы.
Daniels и соавт. [28] посредством иммуноблоттинга с выделенными из эритроцитов Ап(а+) гликофоринами показали, что антиген Апа располагается в гликофорине D, а в гликофорине С он отсутствует. При анализе кДНК 2 лиц Ап(а+) выявлена нуклеотидная замена G 67 Т в экзоне 2. Данная мутация приводила к замене аланина на серии в позиции 23 гликофорина С и позиции 2 гликофорина D. Результаты титрования анти-Ое2-антител с использованием эритроцитов Ап(а+) и Ап(а-) указывали на то, что гликофорин GPD.Ana вариабелен. Некоторые образцы анти-Ое2-антител с ним не реагировали.
Dha
Антитела анти-Dh* обнаружили Jorgensen и соавт. [45] у датчанина при проведении пробы на индивидуальную совместимость перед гемотрансфузи-ей. Антитела относились к IgM и, судя по анамнезу реципиента, имели естественное происхождение. Вскоре найдены еще 2 донора, имевших анти-ОЬа-антитела, что позволило Spring и соавт. [117] обследовать три поколения одной английской семьи и выявить 8 человек Dh(a+).
Антиген Dha оказался устойчив к действию химотрипсина. Обработка эритроцитов трипсином, фицином, папаином, проназой и сиалидазой его разрушала (Jorgensen и соавт. [45], Spring и соавт. [117]).
Посредством иммуноблоттинга с использованием специфических антител и гликофорина, выделенного из эритроцитов, показано, что антигенные детерминанты Dha расположены на гликофорине С. На гликофорине D антиген Dha отсутствует, поскольку контролирующий его кодон расположен вне участка, обеспечивающего синтез гликофорина D (Spring [118]).
При обследовании 2 сибсов Dh(a+) с использованием молекулярно-генетических методов выявлена нуклеотидная замена С 40 Т в экзоне 1 гена GYPC и соответственно замещение лейцина на фенилаланин в позиции 14 (King и соавт. [46]).
Антиген Dha не разрушался эндогликозидазой F и не был N-гликозилирован в позиции 8, которую занимает аспарагиновая кислота (Spring [118]). Тот факт, что антиген Dha чувствителен к сиалидазе, дал основание полагать, что для формирования эпитопов Dha необходимо О-гликозилирование гликофорина С. Искусственно сконструированный пептид NSTAWPFSLEPNPG, повторяющий последовательность 8-21 гликофорина GPC.Dha, специфически ингибировал анти-011а-антитела (Stony и соавт. [119]).
GEIS
В 2004 г. появилось краткое сообщение Yabe и соавт. [130] о выявлении у японской женщины антител к редко встречающемуся антигену - IS. Авторы установили, что антитела открывают эпитопы, расположенные на гликофоринах С и D. Экспрессия антигена была обусловлена заменой треонина на аспарагин в положении 32 гликофорина С и позиции 11 глифокорина D. Указанная мутация явилась результатом замещения С 95 А. Антиген обнаружен только у японцев. Его частота менее 0,1 %. В 2004 г. указанный антиген включен в систему Gerbich с обозначением GEIS (GE9).
