Изомеры гликопротеина удалось выделить из мембраны эритроцитов посредством иммунопреципитации моноклональными антителами анти-Ьиь, а также анти-ЬиЗ, -Lu4, -Lu6, -Lu8, -Lul2, -Aua, -Aub (Daniels и соавт. [33, 38], Parsons и соавт.[106]). Указанные компоненты отсутствовали в цитоскелете эритроцитов LunuU.
Отмечено некоторое снижение мол. массы гликопротеинов после обработки сиалидазой (Daniels и соавт. [38]). Гликопротеины разрушались сульфидре-дуцентами, что указывало на наличие в их структуре дисульфидных связей. Обработка мембран эритроцитов эндогликозилазой-F приводила к появлению 2 компонентов с мол. массой 73 и 66 кДа, что было связано с утратой части jV-связанных олигосахаридных цепей (Parsons и соавт. [106]).
Parsons и соавт. [105], изучив аминокислотную последовательность полипептида LU, создали олигонуклеотидные праймеры и с помощью ПЦР выделили клон ДНК (2417 пн) из библиотеки ДНК плаценты человека. Кодируемый протеин с мол. массой 85 кДа состоял из 597 аминокислот; 518 из них составляли экстрацеллюлярные домены, 19 - трансмембранный домен, 59 - цитоплазматический. Цитоплазматический участок протеина непосредственно связан с цито-скелетом (Gane и соавт. [55]).
Изомер с мол. массой 78 кДа лишен части цитоплазматического домена (Parsons и соавт. [105]). Позднее было показано, что антиген эпителиального рака (В-САМ) также представляет собой изоформу гликопептида с мол. массой 78 кДа (Campbell и соавт. [18], Rahuel и соавт. [115]).
Гликопротеины LU отсутствуют на лейкоцитах, но в то же время имеются на многих других клетках в виде нескольких повторяющихся экстрацеллюляр-ных доменов, имеющих высокую гомологию с иммуноглобулинами. Подобно последним они имеют вариабельные (V) и константные (С1 и С2) домены.
Каждый из доменов состоит приблизительно из 100 аминокислот и структурирован в виде двух р-цепей, связанных между собой дисульфидными мостиками. Считается, что эти гликопротеины выполняют функцию молекул межклеточной адгезии и участвуют в передаче межклеточных сигналов (Barclay и соавт.[7], Williams, Barclay [147]). Экстрацеллюлярный домен гликопротеинов LU состоит из двух вариабельных и трех константных доменов (см. рис. 8.1). Имеется 5 потенциальных участков JV-гликозилирования: один - в домене 3, остальные - в домене 4. Рядом с веществом LU на мембране эритроцитов присутствуют другие гликопротеины, также являющиеся рецепторами межклеточной адгезии: LW, CD147 (групповая система Ok), CD47 и CD58 (LFA-3).
Parsons и соавт. [104] сконструировали кДНК с делениями, при которых гликопротеин LU синтезировался без одного, двух, трех или четырех доменов. Образцы таких дефицитных гликопротеинов авторы исследовали в проточной цитофлюо-рометрии с антителами анти-LU разной специфичности, что позволило установить локализацию антигенных эпитопов на том или ином домене (см. рис. 8.1).
Таблица 8.2
Организация гена LU
|
Экзон |
Кодируемый домен |
Число кодонов |
Размер интрона, кб |
|
1 |
5'UT + лидер-пептид |
105 |
2,0 |
|
2 |
1IgSF(V) |
122 |
0,7 |
|
3 |
1 IgSF(V) |
229 |
0,09 |
|
4 |
2IgSF(V) |
71 |
0,5 |
|
5 |
2IgSF(V) |
95 |
0,09 |
|
6 |
2IgSF(V) |
185 |
0,53 |
|
7 |
3 IgSF(C2) |
137 |
0,31 |
|
8 |
3IgSF(C2) |
157 |
3,5 |
|
9 |
4 IgSF(C2) |
116 |
0,1 |
|
10 |
4 IgSF(C2) |
142 |
0,17 |
|
11 |
5 IgSF(C2) |
137 |
0,15 |
|
12 |
5 IgSF(C2) |
145 |
0,09 |
|
13 |
Трансмембранный и 19 позиций цитоплазматического |
145 |
0,97 |
|
14 |
Цитоплазматический |
118 |
0,09 |
|
15 |
Один аминокислотный остаток в цитоплазматическом (для изоформы 85 кДа) |
498 |
|
Ген LU состоит из 15 экзонов размером 12,5 кб (см. рис. 8.1, табл. 8.2). Экзон 1 кодирует сигнальный пептид, экзоны 2-12 кодируют 5 доменов; вариабельный ^Н^Е кодируется экзонами 4, 5 и 6. Экзон 13 кодирует трансмембранный домен.
обеих изоформ гликопротеина LU; экзоны 14 и 15 - терминальный участок, состоящий из 40 аминокислот (см. табл. 8.2). Терминальный участок присутствует только в изоформе с мол. массой 85 кДа (El Nemer и соавт. [51], Parsons и соавт. [104]). Выделены два транскрипта гена LU. Один из них, величиной 2,5 кб, кодировал гликопротеин с мол. массой 85 кДа, другой гликопротеин, величиной 4,0 кб, кодировал гликопротеин 78 кДа (Rahuel и соавт. [115]). Транскрипты отличались альтернативным сплайсингом интрона 13. В транскрипте 2,5 кб интрон 13 отсутствовал, экзоны 14 и 15 кодировали С-терминальный участок из 40 аминокислот.
