Аллоиммунизация как глобальный популяционный процесс

А_mos

Выявлены лица группы А, эритроциты которых проявляли мозаичный (mosaic - отсюда и обозначение) характер агглютинации со специфическими антителами. Эритроциты A_ms, будучи смешанными с реагентами анти-А, отли­чались от А₃ и А_х тем, что процент неагглютинированных клеток был постоян­ным и не зависел от активности анти-А-антител в тест-системе. Эритроциты, не вовлеченные в агглютинацию, не обладали способностью адсорбировать анти- А-антитела. Активность сывороточных А-трансфераз у лиц A_mos снижена.

Возникновение варианта A_mos связывают с соматическими мутациями в от­дельных клонах гемопоэтических клеток (Marsh и соавт. [151]), в результате чего наряду с эритроцитами, содержащими антиген А, продуцируются эритро­циты, лишенные этого антигена.

 А_т

Фенотип А , описаный Gammerlgaard в 1942 г., сначала был обозначен им как А_х, но, поскольку найденный вариант отличался от А , вновь открытую под­группу переименовали в А_т. Эритроциты А_т реагируют очень слабо и не со все­ми образцами антител анти-А и анти-А,В. Присутствие антигена А в эритро­цитах устанавливают с помощью адсорбции - элюции. У лиц А выделителей количество вещества А и Н в секретах приближается к норме. Сыворотки их крови, как правило, не содержат антител анти-А_г При посемейных исследо­ваниях установлено, что ген А^т передается по наследству как редкий аллель АВО. Среди французов данный фенотип встречался с частотой 1 на 150 тыс. (Damborough и соавт. [88]), среди китайцев Тайваня - 1 на 400 тыс. (Daniels [87], Damborough и соавт. [88]). Несмотря на редкость фенотипа А_т, удалось идентифицировать 2 его разновидности с помощью детального анализа свойств сывороточных а-1,3 -ТУ-галактозаминилтрансфераз. Активность этих фермен­тов отличалась по кинетическим характеристикам при определенных значени­ях pH. В целом активность А-трансфераз у лиц подгруппы А_ю ниже, чем у лиц Aj. Найдены лица группы А_щВ. Посемейные исследования не позволили уста­новить наследственную передачу А_т-фенотипа.

Ау

Подгруппа А_у напоминает А_т, однако имеет отличия:

-элюаты анти-А-антител, снятые с эритроцитов А_у, менее активны по сравнению с элюатами, снятыми с эритроцитов А_т;

-  слюна лиц А_у выделителей содержит существенно меньше вещества А по сравнению с лицами А_т;

h -- сыворотка крови людей А_у содержит следовое количество А-трансферазы, а у индивидов А_т этот фермент отчетливо выявляют (Drozda и соавт. [92], Issitt, Anstee [122], Reid, Lomas-Francis [186]).

Полагают, что фенотип А_у не передается по наследству, а возникает в резуль­тате мутации зародышевых клеточных линий в пределах одной и той же семьи.

A_ei

Подгруппа А_е1 (elution) названа так по методу, с помощью которого удается обнаружить присутствие антигена А на эритроцитах. Антитела анти-А и анти- А,В Не агглютигнируют эритроциты А_е1, однако адсорбируются на их поверхно­сти, что подтверждают методом адсорбции - элзоции. В сыворотках крови лиц А_е1 А-трансфераза не выявляется, содержание Н-трансферазы снижено.

Фенотип А_е1 встречается редко: 1 на 100 тыс обследованных, преимущественно среди монголоидов (Solomon и соавт. [197], Sturgeon и соавт. [208]). Посемейными наследованиями показана передача гена A^el как редкого аллеля локуса АВО.

Эти варианты антигена А отличаются крайне слабой экспрессией (Mohn и соавт. [157], Nevanlinna и соавт. [168], Sturgeon и соавт. [208]), поэтому и обо­значены как «end».

Антиген А . практически не реагирует с антителами анти-А,В лиц группы О, не взаимодействует с антителами анти-А лиц группы В. Некоторое количе­ство группового вещества А выявляют в слюне.

Подгруппа найдена всего дважды среди 150 тыс. французских доноров.

Другой, несколько отличающийся от A_end, вариант был описан у финнов, в связи с чем и получил обозначение A_finn. Его находили с частотой 1 на 1000— 6000 обследованных в различных районах Финляндии (Mohn и соавт. [157]). Агглютинация эритроцитов A_finn с антителами анти-А и анти-А,В различима лишь при микроскопировании. В одном поле зрения насчитывают от 2 до 10 агглютинатов, каждый из которых состоит из 4-6 эритроцитов (Mohn и со­авт. [157]). Слюна выделителей содержит вещество Н, вещество А отсутству­ет. Экстраагглютинины анти-Aj выявлены в сыворотках крови всех лиц A_finn. Этим подгруппа A_finn отличается от других вариантов A_end. Issitt и Anstee [122] считают выделение подгруппы A_finn в качестве самостоятльной недостаточно обоснованным.

Еще один вариант A _d, получивший обозначение Аbantu, выявлен в Южной Африке у негроидов банту с частотой 4-8 % (Nevanlinna и соавт. [168], Sturgeon и соавт. [208]). Эритроциты A_bantu реагируют с антителами анти-А несколько ин­тенсивнее, чем А .. Сыворотки крови некоторых лиц A_bantu содержали экстрааг­глютинины анти-А_г Посемейные исследования подтвердили, что аллель Аbantu передается по наследству. Высказано предположение, что в негроидной попу­ляции этот ген появился сравнительно недавно вследствие миграции населения Африки в южном направлении. Он практически отсутствует среди негроидов Западной Африки и их потомков, проживающих в настоящее время в Америке.

A_inc

Название антигена «1ае» происходит от аббревиатуры слов «лектин», «ад­сорбция», «элюция».

Вариант А_1ае описан Schuh, Vyas, Fudenberg в 1972 г. у 9 членов одной француз­ской семьи. Присутствие антигена А в эритроцитах А_1ае было установлено с помо­щью адсорбции и элюции лекгина анти-Aj из Dolichos biflorus. В слюне субстанция А отсутствовала. Сыворотки крови лиц А_1ае реагировали с эритроцитами А,, \ и В.

Считается, что указанный фенотип это результат действия редкого гена в локусе АВО.

Вариант А_1ае является, по-видимому, первым промежуточным субстратом между антигенами О и А. Об этом свидетельствует тот факт, что эритроциты OCad+, так же как А, , способны, хотя и в меньшей степени, адсорбировать лектин Dolichos biflorus.

А_раc

Обозначение «рае» также представляет собой аббревиатуру: р - лектин из белковых желез улитки Helix pomatia, с помощью которого антиген А выявляют на эритроцитах, ае - метод детекции: адсорбция, элюция.

Подгруппа А_рае была обнаружена в 1987 г. Stemps и соавт. сразу в 3 семьях. Предполагают, что фенотип А является вариантом подгруппы А_х и А_Ье.

По мнению классиков клинической трансфузиологии (Mollison и соавт. [159]), гемолитические посттрансфузионные реакции в таких случаях могут иметь место, но их выраженность невелика по сравнению с другими иногрупп- ными трансфузиями, и они легко купируются. Эритроциты А,, несущие неболь­шое количество А-эпитопов, менее чувствительны к повреждающему действию специфических антител. Клинически значимый гемолиз in vivo развивается лишь в тех случаях, когда анти-А-антитела в сыворотке крови реципиента име­ют высокую активность и титр (1 : 1000 и выше), что встречается редко.

С начала 2000-х годов некоторые специалисты службы крови поднимают во­прос о необходимости учета подгрупп А при переливании эритроцитсодержащих компонентов крови. Распространяются реагенты для идентификации подгрупп и рекомендации переливать лицам А₂ только эритроциты А₂, а лицам А₂В - эритро­циты А₂В. Указанные рекомендации не имеют научного обоснования.

За последние 50 лет в Российской Федерации выполнено не менее 30 млн трансфузий эритроцитов группы А реципиентам группы А, из которых 12 % (согласно статистике) имели подгруппу А₂. Ни одного случая посттрансфузион- ного осложнения, обусловленного различием донора и реципиента по подгруп­пе А, не зафиксировано.

Эритроциты А(П) с пониженными агглютйнационными свойствами впервые описали Dungem и Hirszfeld в 1911 г. [94]. Landsteiner и Levine [133] подразделили фенотип А на подгруппы.

Около 88 % лиц группы А относятся к подгруппе А₁ 12 % - к подгруппе А^. Среди лиц AB(IV) 80 % Afi, 20 % А₂В. Ранее полагали, что лица А₁ имеют ан­тигены А и А_р а лица А₂ - только антиген А. Клетки и А₂ несут различное количество антигенного вещества, имеющего в то же время и некоторые каче­ственные отличия. Так, сыворотки анти-А лиц, имеющих группу крови В(111), содержат 2 фракции анти-А-антител: одна фракция (анти-А) реагирует с эри­троцитами Aj и А₂, другая (анти-Aj) - только с эритроцитами к_х (Wiener и со­авт. [225, 227]). Адсорбция сывороток анти-А эритроцитами А₂ позволяет по­лучить реактив, который не реагирует с эритроцитами А₂, но сохраняет высо­кую активность по отношению к эритроцитам и может быть использован для дифференцировки образцов эритроцитов А на А_ги А₂(Р.М. Уринсон [61]).

Для определения подгрупп А используют экстраагглютинины и а₂, специ­ально отобранные моноклональные антитела анти-А, а также лектины Dolichos biflorus и Ulex europaeus. Первый из них реагирует с эритроцитами А₁ второй - с эритроцитами А₂.

У лиц Aj с частотой примерно 1 на 10 ООО встречаются экстраагглютинины о^. Лица А₂ и А₂В содержат экстраагглютинины cL с частотой 1 на 50 и 1 на 5 со­ответственно.

Гены А¹ и А² передаются по наследству. Лица А¹ А² имеют фенотип А_г

Возникновение 2 или более популяций эритроцитов, несущих различное ко­личество А-эпитопов, обусловлено А-трансферазами, модифицировавши ви­русами или сформировавшимися под влиянием атипичных 50-аллелей.

Агглютинационные свойства эритроцитов различных подгрупп А, а также число А-эпитопов весьма вариабельны.

Как уже отмечалось, большинство антител анти-А лиц группы В не агглю­тинирует эритроциты А_х. Сыворотки крови лиц В, иммунизированных группо­вым веществом А, напротив, обладают такой способностью. Моноклональные реагенты анти-А выявляют подгруппу А_х, однако в некоторых случаях эти тест- системы взаимодействуют также и с антигеном В.

Эритроциты А_х очень редки - 1 : 40 000-77 ООО (Reid, Lomas-Francis [186]).

Специфическая А-трансфераза обычно отсутствует в сыворотках крови и на эритроцитах лиц подгруппы А , активность Н-трансферазы снижена.

Результаты посемейных исследований противоречивы. В некоторых се­мьях удавалось проследить наследование подгруппы А_х как фенотипическо­го проявления редкого аллеля А . В других семьях пробанды А_х имели ро­дителей О (Beckers и соавт. [73], Valdes и соавт. [214], Van Loghem и соавт. [215]). Ducos и соавт. [93] наблюдали детей А_х в семьях, где один из родите­лей имел группу А₂В.

Дифференцировать подгруппы А₂/В и А_х/В можно по отсутствию в сыво­ротке крови лиц А_х/В A-специфической трансферазы.

Как отмечают Issitt и Anstee [122], некоторые производители моноклональ­ных антител предъявляют повышенные требования к своим реактивам и ис­пользуют для оценки их качества эритроциты А .

в 96-луночных планшетах с отмытыми эритроцитами 0(1), А(П) и В(Щ), Класс моноклональных антител устанавливали по флюоресценции сенсибилизи-IgG, нейтрализовались группоспецифическими субстанциями, существенно от­личает их от классических иммунных антител и позволяет выделить их в осо­бую группу - иммунные IgG-антитела термолабильные легко нейтрализуемые. К этой же группе могут быть отнесены перекрестно реагирующие антитела лиц 0(1), имеющие идентичную иммуносерологическую характеристику - IgG тер­молабильные. Их происхождение (иммунное или естественное) остается неяс­ным. Не исключено, что они так же, как МКА анти-АВ, являются иммунными.

Обработка эритроцитов В(Ш) протеолитическими ферментами, специфиче­ски разрушающими антиген В, лишала эритроциты групповых свойств. После такой обработки эритроциты В(Ш) в отличие от обработанных глутаровым аль­дегидом приобретали свойства эритроцитов 0(1) группы и не агглютинирова­лись сыворотками анти-В. Одновременно исчезала их способность взаимодей­ствовать с перекрестно реагирующими антителами МКА анти-АВ, а также пе­рекрестно реагирующими антителами лиц 0(1).

По характеру реагирования полученные МКА анти-АВ вряд ли можно от­нести к анти-А и анти-В. По-видимому, это одно, маскирующееся под анти-А и анти-В антитело, реагирующее с общей для эритроцитов А(П) и В(Ш) антиген­ной детерминантой. По своим свойствам эти антитела близки к перекрестно ре­агирующим антителам сывороток лиц 0(1), описанным выше. Сам факт получе­ния антител анти-АВ в ответ на иммунизацию эритроцитами как А, так и В слу­жит веским аргументом в пользу того, что оба антигена наряду с существенны­ми серологическими различиями имеют идентичный эпитоп С, в равной мере являющийся сильным иммуногеном.

Таким образом, имеются все основания полагать, что групповая система АВО представлена не двумя агглютиногенами - А, В и двумя агглютининами - а, Р, а тремя агглютиногенами - А, В, С и тремя агглютининами - а, р и С.

Антиген С выявляют с помощью перекрестно реагирующих сывороток лиц О_ар(1) [184, 229]. Именно фракция перекрестно реагирующих агглютининов представляет собой антитела анти-С. Последние можно удалить из сыворотки указанных лиц адсорбцией как А, так и В эритроцитами. При рутинном иссле­довании антиген С маскируется присутствием антигена А и/или В. Антитела анти-С в обычных методах исследования проявляют себя подобно несепари- руемой комбинации а- и Р-агглютининов. У лиц, имеющих группу крови А и В,  агглютинины анти-С отсутствуют.

Не исключено, что антитела анти-С могут встречаться в чистом виде. Однако отличить их от анти-А и анти-В обычными методами не представляется воз­можным. У плодов 0(1) от матерей 0(1) находят антитела со свойствами анти-С, у плодов А(Н) и В(Ш) от матерей А(Н) и В(Ш) таких антител не находят.

Owen (цит. по Wiener [229]) получил чистую фракцию анти-С-агглютининов адсорбцией сывороток 0^(1) эритроцитами опоссума и кролика, которые, со­держат парциальный антиген В и, по-видимому, не содержат антигена С. После такой обработки оставшиеся в сыворотке антитела анти-С реагировали с эритроцитами А и В, и их можно было удалить эритроцитами А или В в ад- <юрбционной пробе. Однако для окончательного доказательства того, что С-, о- и Р-агглютинины являются самостоятельными независимыми друг от друга ан­тителами, не достает эксперимента, в котором антигены А и В были бы разру­шены ферментативно (не реагировали бы с сыворотками анти-А и анти-В), но при этом сохранили бы антиген С (продолжали бы агглютинироваться анти-С- сывороткой или элюатом аР). Только в том случае, если эритроциты не агглю­тинируются а и р, но продолжают агглютинироваться анти-С-антителами, мож­но не только с достаточной степенью уверенности констатировать существова­ние антигена С, но и с помощью такого реактива изучить закономерности на­следования этого антигена, возможные его разновидности и комбинации. В на­ших экспериментах ферментативное разрушение В-антигена приводило одно­временно к утрате их способности реагировать с МКА анти-АВ. Иными слова­ ми разрушение В-антигена влекло за собой разрушение антигена С. Однако, не­ смотря на отрицательный результат этого эксперимента, полученные нами дан­ные в целом со всей очевидностью свидетельствуют о наличии третьего антиге­на в системе АВО, существование которого блестяще предсказал Wiener. глютинации

Изогемагглютинины анти-А и анти-В отсутствуют в крайне редких слу­чаях: у больных врожденной гипо- и агаммаглобулинемией, а также при Х-ассоциированном синдроме Вискотта - Олдриджа. Такие лица не способны синтезировать антитела к полисахаридным, но не белковым антигенам.

Изогемагглютинины отсутствуют при истинном химеризме, наблюдаемом у ди- зиготных близнецов. В период внутриутробного развития между близнецами может происходить обмен кроветворными клетками, в результате чего после рождения у каждого из близнецов в кровотоке присутствуют 2 популяции эритроцитов с различ­ными фенотипами. Описаны химеры, когда 90 % циркулирующих эритроцитов име­ли группу О, а остальные 10 % - группу А. У таких индивидов в плазме крови обна­руживали только анти-В-антитела, анти-А отсутствовали (см. Кровяные химеры).

В очень редких случаях изогемагглютинины отсутствовали у здоровых лиц без признаков гипогаммаглобулинемии или какой-либо другой патологии. По данным Dobson и Ikin, изогемагглютинины отсутствовали у 0,01 % здоровых лиц. Авторы связывали это с соматическими мутациями, приводящими к инактивации клонов В-клеток, запрограммированных на синтез соответствующих антител. Интересно, что родители, братья и сестры пробандов содержали изогемагглютинины, харак­терные для соответствующей группы крови. Возможно, синтез АВО-антител кон­тролируется широко встречающимся доминантным геном и его редко встречаю­щимся рецессивным молчащим аллелем. Лица без изогемагглютининов являются гомозиготными по указанному рецессивному аллелю.