Достижения последних лет

Система MN

Система MN пополнилась еще одним часто встречающимся антигеном -ENDA (MNS44). Антитела IgM, открывающие его, были найдены в сыворотке крови англичанки, имевшей фенотип M+s+Mur+DANE+M(g-). С помощью молекулярно-генетических методов исследования у женщины выявлен новый гибридный гликофориновый аллель GYP(A-B-A), кодирующий антиген DANE. Вторая хромосома несла аллель М^к. Авторы пришли к заключению, что амино­кислотная замена Не 46 на гликофорине А на Asn 45 на гликофорине GP.Dane не является обязательным условием для экспрессии антигена DANE (Velliquette и соавт. [72]).

Системы Р и GLOB

Описано 20 индивидов с редким фенотипом р, у всех найдена нонсенс-мутация 2911 > Т в гене галактозилтрансферазы -A4GALT. Тем самым установ­лен еще один вариант генетических нарушений, приводящих к появлению ред­кого фенотипа р (Hellberg и соавт. [27]).

Система Rh

Новые публикации, касающиеся системы Rh, посвящены двум аспектам. Все больше сведений о новых вариантах гена RHD, обусловливающих фенотипи-ческую мозаику этой системы. К настоящему времени общее число вариантов приближается к 170. Носители парциального или слабовыраженного антигена D подвержены анти-О-аллоиммунизации. В серии других сообщений приводят­ся случаи необычной сенсибилизации реципиентов к часто встречающимся ан­тигенам Rh.

Marechal и соавт. [46] исследовали нуклеотидные последовательности гена BHD, пирующего вещество D, у 333 французских доноров и выявили 12 но­вых вариантов аллеля Д при которых определение резус-принадлежности се­рологическими методами было затруднено. Носители мутации Leu 214 Phe оказались способными продуцировать анти-Б-антитела после перелива­ния им D-положительных эритроцитов. Авторы полагают, что молекулярно-генетические исследования крови лиц с необычными вариантами антигена D позволят уменьшить риск развития аллоиммунизации при проведении гемо-трансфузионной терапии (Marechal и соавт. [46]).

Esteban и соавт. [22] установили, что среди испанцев наиболее частой из пар­циальных антигенов D является категория D^VI. При детальном изучении 20 об­разов эритроцитов категории D^V1 обнаружен ранее неописанный гибридный ген RHD-Ce(3-5)-D. Происхождение экзона 2 в этом гене установить не удалось. Гибрид был представлен гаплотипом CDe, продуцирующим редко встречаю­щийся антиген BARC (Rh52).

Flegel и соавт. [25] также нашли новые варианты гена RHD. Антиген, ко­дируемый аллелем DCS-1, содержал две аминокислотные замены: Т 667 G и G 676 С, вызванные мутациями в экзоне 5. Проведено сравнение DCS-1 с ва­риантами DFV и DCS-2 с соответствующими одиночными аминокислотными заменами: F 223 V и А 226 Р. Все указанные варианты сочетались с гаплоти­пом cDE. Плотность антигенных эпитопов D составила приблизительно 3000 на один эритроцит для категории DCS-1, 800 - для категории DCS-2 и 9300 - для DFV. На эритроцитах DCS-1 и DCS-2 отсутствовали некоторые эпитопы D, вы­являемые моноклональными анти-Б-антителами. Эритроциты DFV экспресси-ровали почти нормальный антиген D, в этом образце крови выявлены аллоим-мунные антитела anti-LW^a системы LW.

Описана 28-летняя женщина из Ливана, группа крови которой при ру­тинном исследовании определена как A(II)D-. Она имела анти-Б-антитела, в анамнезе - две неразвившиеся беременности из-за внутриутробной гибе­ли плодов. Отец женщины и два ее брата были D-. Солгасно результатам молекулярно-генетического исследования, пациентка и ее упомянутые род­ственники оказались D+, поскольку содержали значительные фрагменты гена RHD. При последующием анализе с использованием РНК-ПЦР выявлено 5 транскриптов гена RHD, при этом самым длинным оказался транскрипт, в котором отсутствовали нуклеотидные последовательности экзона 8, за­мещенные нуклеотидными цепями из интрона 7. Секвенирование ДНК по­зволило выявить делецию большого участка величиной 995 пар нуклеоти-дов, которая затронула часть интрона 7, весь экзон 8, а также интрон 8 гена RHD. Данный аллель RHD(delEx8) кодировал слабый антиген D, выявляе­мый только адсорбцией - элюцией. Таким образом, пациентка, ее отец и бра-Цр имели фенотип/

Аллель с делецией большого участка гена RHDнашли Richard и соавт. [62]. Lomas-Francis и соавт. [45] описали два случая полиаллоиммунизации у ре­ципиентов негроидов. Негритянка, больная Р-талассемией, имела фенотип D+, в сыворотке ее крови ранее были выявлены антитела анти-пг^в, анти-Е, анти-М, а также тепловые поливалентные аутоантитела. Во время операции ей были пе­релиты по жизненным показаниям 4 дозы эритроцитов, 2 из которых были се­рологически несовместимы. Одновременно были предприняты усилия по поис­ку доноров D+hr^B- и -D-. Когда позднее они были найдены, в пробах с сыво­роткой крови больной клетки указанных редких фенотипов давали положитель­ные реакции. Дальнейшее детальное изучение специфичности антител показа­ло, что у больной в дополнение к ранее имевшимся образовались анти-D-ан­титела. Другой реципиент, мужчина, больной серповидно-клеточной анемией, был D+ и имел антитела анти-hr⁸, анти-С, анти-Е и анти-К. После трансфузий серологически совместимых эритроцитов в дополнение к перечисленным анти­телам образовались анти-Б-антитела.

Эритроциты обоих лиц содержали парциальный антиген D категории Dili а, встречающийся среди негроидов с частотой около 4 %. Эритроциты этой категории дают отчетливо выраженные положительные реакции с реа­гентами анти-D, поэтому таким пациентам переливают Rh-положительные эритроциты, которые им противопоказаны. У негроидов нередко образуют­ся антитела анти-пг^в. После их идентификации гемотрансфузионную те­рапию обычно продолжают с использованием эритроцитов ccDEE, так как эритроциты этой группы являются одновременно е- и пг^в-отрицательными. Это приводит к образованию у некоторых больных антител к другому ча­сто встречающемуся антигену - Hr^B (Rh34) в сочетании с анти-Е-антителами или без последних. Реципиентам, имеющим такие антитела, можно пере­ливать эритроциты только от доноров Rh_null и с некоторыми делениями, по­скольку только они не содержат антиген Hr^B (Rh34). Авторы публикации указывают на высокую частоту парциальных антигенов D среди негроидов, в связи с чем у некоторых D-положительных реципиентов могут образовать­ся антитела анти-D.

Win и соавт. [80] наблюдали 2 женщин с генотипом DIIIce/Cce^s(одна ла­тиноамериканского происхождения, другая - негритянка), у которых после нескольких родов появились антитела анти-пг^в (Rhl9) и анти-Нг^в (Rh34). У одной из женщин выработались также анти-О-антитела в сочетании с анти-Се. Эритроциты новорожденных давали положительную прямую ре­акцию Кумбса, однако клинических проявлений гемолитического заболева­ния у них не отмечалось. Указанные антитела относятся к клинически зна­чимым, поэтому для женщин были зарезервированы эритроциты чрезвычай­но редких доноров - ccddEE и Rhafc, однако трансфузии женщинам не пона­добились.

Опубликованы данные о распределении вариантов гена RHDу жителей Африки. Так, в Конго (Браззавиль) среди ПО лиц, представителей народности теке, эритроциты которых давали отрицательные реакции с анти-О-антителами, 7 были отнесены к слабому DIV-типу по результатам ПЦР. Среди остальных 103 выявлены лица с делецией RHD, наличием Д#£>-псевдогена и гибридного аллеля RHD-CE-D. Среди лиц D+ идентифицированы аберратные RHD, DAU, DIV^a, слабый DIV³-Tnn. Идентифицирован новый, характерный для негроидов, вариант RHD, получивший обозначение DAU-7. Среди D- преобладали лица с делецией RHD(Touinssi и соавт. [69]).

Среди жителей Западной Индии парциальные антигены D встречаются с ча­стотой 0,15 %. Из известных категорий в указанной популяции наиболее часто представлен антиген DFR (Kulkarni и соавт. [37]).

Ye и соавт. [84] провели молекулярно-генетический анализ аллеля RHDу ки­тайцев D- (лица D_d из выборки исключены). Выявлено 8 вариантов. Один из них проявлялся точковой мутацией, другой представлял собой гибрид RHD/CE. Чаще присутствовал гибридный аллель RHD(l)-CE(2-9)-D(10) и ранее описан­ный RHD(711 delC).

Другая группа китайских исследователей (Yan и соавт. [82]) провели обшир­ные популяционные исследования. Среди 305 672 обследованных 99,94 % были D+, остальные 0,06 % - D~, 37 человек имели варианты антигена D, среди ко­торых преобладал слабый D, встречались также парциальные антигены D^³ и D^v. Выявлено 3 новых аллеля, обусловленных единичными нуклеотидными за­менами. Авторы отметили, что у китайцев по сравнению с европейцами и не­грами имеются существенные отличия в отношении как частоты антигена D, так и его химической структуры.

Polin и соавт. [59] исследовали с помощью ПЦР кровь 23 300 лиц, кото­рые по результатам первичного обследования были тестированы как резус-отрицательные. У 94 обнаружены RHD-специфические маркеры экзонов 4, 7 и 10, свидетельствующие о том, что эти лица в действительности являют­ся резус-положительными. Слабые антигены D (п=55) и фенотип D_el (n = 19) идентифицированы в 74 образцах. Такие лица как реципиенты входят в груп­пу повышенного риска аллоиммунизации антигеном D, а как доноры представ­ляют опасность, если их кровь будет перелита резус-отрицательным реципиен­там. Авторы предлагают ввести ПЦР-генотипирование в рутинную практику для всех доноров, эритроциты которых в серологических реакциях оказывают­ся D-отрицательными.

Немецкие исследователи (Duscher и соавт. [21]) нашли, что полимор­физм гена RHCEстоль же выражен, как и полиморфизм гена RHD. При ДНК-вдютипировании 122 доноров с измененной экспрессией антигенов С, с, Е и е Шявлено 34 аллеля гена RHCE. Постоянно определялись три аминокислотные «щены: Met 167 Lys, Gly 96 Ser и Leu 12 Arg.

Другая группа немецких авторов (Bugert и соавт. [10]) также провели ис­следования в этом направлении. Генотипирование и секвенирование 10 эк-зонов гена RHCEу 43 лиц с ослабленной экспрессией антигенов С, с, Е и е позволили выявить 22 аллеля, 10 из которых ранее не были известны. Преобладали одиночные аминокислотные замены, выявлены также гибрид­ные аллели RHCE-D-CEс участием различных сегментов экзона 5 гена RHCE. Установлено, что указанные варианты встречаются в Северной Германии с ча­стотой 0,012 - 0,2 %.

На молекулярном уровне исследована регуляция функции генов RH(Denomme и соавт. [20]). Так, в проксимальных участках генов RHDи RHCEидентифицированы промоторные 5'-фланкирующие регионы величиной 1246 пар нуклеотидов. Последние регулируют экспрессию пептидов RhD и RhCE в i/ис-положении. В указанном регионе промоторную функцию выполняют уча­сток величиной 105 пар нуклеотидов и мотив (55 пар), участвующий в транс­крипции.

Отмечен полиморфизм локуса RHCEу жителей Карибского бассейна (Noizat-Pirenne и соавт. [50]). Обнаружены парциальные антигены hr' (с), а так­же редкий аллель RHCE*ceAR, свойственный негроидам, который кодирует парциальный антиген hr" (e). На эритроцитах лиц, гомозиготных по этому ред­кому аллелю, отсутствует часто встречающийся антиген Hr^s (Rhl8).

Peyrard и соавт. [54] описали 21-летнюю женщину, больную талассемией, с фенотипом B(III)CcDeekk. В сыворотке ее крови выявлены антитела анти-с, анти-се, анти-Fy¹¹, анти-Jk³ и анти-S. Антитела анти-с + се, выделенные путем адсорбции - элюции, реагировали с эритроцитами лиц ceAR/ceEK, ceEK/ceEKи  ceAR/ceBI.  С  эритроцитами лиц  ceAR/ceAR,  сеМО/сеМО и  се^s(340)/ ce^s(340) эти антитела не реагировали. Известно, что эритроциты лиц, имею­щих какой-либо из 6 перечисленных генотипов, содержат парциальные анти­гены hr' (с). Таким образом, установлено, что редкий аллель RHCE*ceARна­ряду с парциальным антигеном hr" (e) кодирует парциальный антиген hr' (с). Авторы высказали предположение, что на эритроцитах лиц, имеющих геноти­пы ceAR/Ce, ceAR/ceAR, сеМО/сеМО и ce^s(340)/ce^s(340), отсутствует эпитоп, свойственный нормальному антигену hr' (с) и некоторым парциальным анти­генам hr' (с).

Описан 40-летний негроид с серповидно-клеточной анемией, которому многократно производили гемотрансфузии (Pham и соавт. [55, 56]). Больной имел фенотип DCcee, при этом антигены С, с, е и се на его эритроцитах были нормально выражены и выявлялись как с использованием поликлональных, так и моноклональных антител. На основании серологических и генетиче­ских исследований установлен генотип больного - (C)ce^s/DCe. Сыворотка фт крови содержала антитела к антигенам D, с, Е, е, V, Js^a и S. Фракция I специфичностью анти-с была выделена адсорбцией - элюцией. Антитела реагировали интенсивнее с эритроцитами с+се+, чем с+се-. Отрицательные реакции были получены с эритроцитами лиц, гомозиготных по гену (C)ce^s. Таким образом, было показано, что упомянутый аллель (С)се\ свойствен­ный негроидам, кодирует парциальный антиген hr' (с) и другие слабовыра-женные антигены системы резус у негроидов. Авторами выявлены два вари­анта аллеля (C)ce^s, кодирующих слабые варианты антигена hr" (e) и других антигенов.

Среди негроидов часто встречался парциальный антиген rh' (С) (Tournamille и соавт. [70]), кодируемый аллелями (C)ce^sи R^N. Среди 177 слу­чайно отобранных лиц у 49 выявлены необычные варианты антигена С. Среди больных серповидно-клеточной анемией, имеющих парциальный антиген С, 50 % содержали анти-С-антитела, появившиеся после повторных гемотранс-фузий. Авторы указывают на необходимость идентификации парциально­го антигена С у больных серповидно-клеточной анемией и переливания им С-отрицательных эритроцитов во избежание развития аллоиммунизации к этому антигену.

Получены убедительные доказательства качественных различий антиге­нов Нг^ви hr^B (Pham и соавт. [57]). В частности, у Нг^в-отрицательных лиц вы­явлены антитела анти-hr⁸, а у пг^в-отрицательных - анти-Нг^в. Среди сенси­билизированных были как гомозиготы, так и гетерозиготы по редкому алле-лю (C)ce^s.

Hue-Roye и соавт. [29] уточнили молекулярную основу антигена Ве^а (Berrens, Rh36). В середине 1950-х годов этот антиген был включен в систему Rh из-за его связи с ослабленной экспрессией антигенов с, е и f. Молекулярно-генетическое обследование 4 Ве^а-положительных членов одной семьи со сла-бовыраженным антигеном hr' (с) выявило мутацию F 668 G в экзоне 5 гена RHCE*ce. Последняя приводила к замене пролина на аргинин в положении 221 протеина Rhce. Авторы высказали предположение, что такая замена ока­зывает влияние на пространственную структуру и электрически заряд данно­го участка протеина Rhce, что ослабляет экспрессию антигенов с, е и f (се) у лиц Ве(а+).

Убедительно показана принадлежность антигена Crawford к системе Rh (Flegel и соавт. [24]). Этот антиген обусловлен аллелем ceCF, кодирующим полипептид RHce с аминокислотными заменами Тгр 17 Cys, Gin 233 Glu и Leu 245 Val. Авторы считают его одним из вариантов гена се\ свойственного негроидам. Фенотип ceCF встречается у них с частотой 0,056 % .

Вариант гена се, кодирующий выработку некоторого количества D-эпитопов, найден Chen и соавт. [11] в Швейцарии у 11 доноров и 1 больного с фенотипом cde. Эритроциты этих лиц, обработанные бромелином, давали положительные ©еаздии с некоторыми моноклональными анти-Б-антителами. Фенотип, полу-чдаший обозначение ceSL (по аллелю ceSL), встречался с частотой 1 : 675 среди окрестностей г. Берна. У жителей других районов Швейцарии, а также в Южной Германии он не выявлен.

Описан вариант аллеля се, получивший обозначение ceRA(Noizat-Pirenne и соавт. [50, 52]). Этот генный комплекс кодирует слабый антиген hr" (e), при этом отсутствует ассоциированный с ним антиген hr^s (Rhl9). При молекулярно-генетических исследованиях выявлены мутации G 50 и G 540 в экзонах 1 и 4 гена RHCE. Последние приводят к аминокислотным заменам Тгр 16 Cys и Gly 180 Arg во внутримембранном домене RHCE-полипептида с выраженными изменениями экспрессии антигенов, которые на нем распо­ложены. Антиген hr" (e) не выявлялся на эритроцитах пробанда многими об­разцами анти-е-антител даже при проточной цитофлюориметрии. Авторы по­лагают, что именно аминокислотная замена Gly 180 Arg обусловливает по­вышенный риск аллоиммунизации антигеном hr" (e). Они рекомендуют учи­тывать это при подборе эритроцитов реципиентам, особенно негроидам с серповидно-клеточной анемией.

Группой исследователей из Аргентины (Cotorruelo и соавт. [14]) проведе­ны молекулярно-генетические исследования у 148 лиц, унаследовавших га-плотип Dee. С помощью ПЦР исследованы экзоны 1 и 5, а также интрон 2 гена RHCE. Установлено присутствие нуклеотидов С 48 в экзоне 1 и G 733 в экзоне 5 RHCE. Авторы считают важным присутствие определенных нукле­отидов в положении 48 в экзоне 1. Ими идентифицированы варианты алле­ля RHceв виде гаплотипов Dee(С 48), Dce^s(G 48), Dee(G 48) и Dce^s(С 48). Присутствие G в позиции 733 экзона 5 коррелировало с появлением антиге­на VS (Rh20), свойственного негроидам. Авторы объясняют присутствие ал­лелей Dce^s(G48) и Dce^s(С 48) среди жителей Аргентины метисацией с не­гроидами.

Продолжены молекулярно-генетические исследования редкого антигена JAL (Rh48), открытого более 30 лет назад. Последний найден как среди евро­пеоидов, так и среди негроидов. Позднее JAL-положительные индивиды об­наружены среди жителей Карибского бассейна. Hustinx и соавт. [31], Westhoff и соавт.  [78] провели молекулярно-генетические исследования крови 17 JAL-положительных лиц. Оказалось, что у европеоидов антиген JAL являет­ся продуктом гена Се, тогда как у представителей других рас - продуктом локуса се. У всех обследованных в экзоне 3 имелась мутация 374>Т, веду­щая к аминокислотной замене Arg 114 Тгр в RhCE-полипептиде. У африкан­цев в гене се обнаружена точковая мутация 735>G, обусловливающая ами­нокислотную замену Leu 245 Val. Этот аллель оказался сцепленным с нор­мальным геном RHDи парциальным вариантом RHD*DAU. Авторы выска­зали предположение, что в результате аминокислотной замены Arg 114 Тгр участок полипептидной цепи протеина RHCE утрачивает пространствен-ipo жесткость в области аминокислот, определяющих С- и с-специфичность.