Система Р, GLOB и коллекция 209

Фенотип р и антитела анти-РР1Р^к

В 1951 г. Levine и соавт. [94] описали антитела, присутствовавшие у паци­ентки с карциномой желудка. Последние реагировали со всеми образцами эри­троцитов, за исключением собственных и эритроцитов сестры. Антитела были обозначены aHTH-Tj^a (Т - тумор, j - по имени больной). Ассоциацию антигена Tj^a с системой Р установила Sanger [142], обнаружившая 6 неродственных лиц с фенотипом Tj(a-), не содержавших антигенов Р. По предложению Sanger фено­тип Tj(a-) был переименован в р. Его возникновение интерпретировали как фе-нотипическое проявление гомозиготности по рецессивному аллелю локуса PL

Фенотип р встречается редко - 1 на 172 тыс. обследованных. По расчетам Race и Sanger [133], частота генар составляет 0,0024.

При обследовании более миллиона китайцев Гонконга он не найден ни разу (Lin и соавт. [98]), однако присутствовал среди японцев. Из 40 149 обследован­ных шведов 8 имели фенотип р (Cedergren [26]).

Посемейными исследованиями, в том числе в изолятах, показан рецессив­ный характер наследования гена р (Catino и соавт. [25], Miwa и соавт. [112], Salmon и соавт. [141], Yamaguchi и соавт. [174]). Родители лиц с фенотипом р часто оказывались кровными родственниками.

Полагают, что фенотип р обусловлен гомозиготностью по мутантному гену, ко­дирующему ОЬЗ-синтазу. Этот фермент обеспечивает превращение лактозилце-рамида в глобозид-3 (Furukawa и соавт. [50], Steffenson и соавт. [155]). Точковые мутации в различных участках экзона 2 (табл. 7.3) приводят к образованию Gb3-синтазы, лишенной трансферазной активности. Отмечена гетерогенность мутаций гена a4Gal-Ty японцев (Furukawa и соавт. [50]) и шведов (Steffenson и соавт. [155]).

В сыворотках крови всех без исключения людей с фенотипом р присутству­ют антитела, вызывающие агглютинацию и/или гемолиз всех образцов эритро­цитов, за исключением группы р. Как показала Sanger [142], двумя основными компонентами таких сывороток являются антитела анти-Р 1 и анти-Р. Их мож­но разделить адсорбцией эритроцитами Р₂, при этом удаляется фракция анти-Р-антител. Позднее был идентифицирован еще один компонент (анти-Р^к), вслед­ствие чего специфичность антител обозначена анти-РР1Р^к.

Адсорбция антител анти-РР1Р^к эритроцитами Р ^к устраняла активность анти-Р 1 и анти-Р , при этом фракция анти-Р в сыворотке оставалась в чистом виде (Matson и соавт. [108]). Фракцию анти-Р^к удавалось выделить не из всех сывороток. Tippett [156] проводила адсорбцию 47 таких сывороток, используя эритроциты Р,. Фракции анти-Р^к, как правило с низкой активностью, выделены менее чем в половине случаев.

Naiki и Kato [123] ингибировали антитела, полученные от лиц р, добавляя в сы­воротки различные гликосфинголипиды. Тестирование проводиж с помощью реак­ций агглютинации и связывания комплемента. После нейтрализации анти-Р-антител глобозидом оставшиеся в сыворотке антитела имели специфичность анти-Р 1Р^к. Антитела анти-Р 1Р^к были представлены преимущественно классом IgG (Naiki, Kato [123]), а анти-Р 1-антитела, выявляемые у лиц Р₂, в большинстве случаев классом IgM.

Используя аналогичные методы, Kato и соавт. [76] подтвердили, что одна фрак­ция анти-Р-антител у лиц р представлена IgM, которые перекрестно реагируют с ан­тигеном Форссмана; другая фракция - IgG, реагирующими с глобозидом. Фракция анти-Р^к-антител в таких сыворотках представляла собой IgG (Kato и соавт. [76]).

Rydberg и соавт. [140] с помощью радиоиммунного анализа установили, что ан­титела к факторам Р, Р1 и Р^к являются IgG и IgA. Анти-Р 1- и анти-Р^к-антитела были представлены также IgM. Почти все IgG-антитела относились к субклассу IgG3, ино­гда присутствовали фракции IgGl или IgG2, фракция IgG4 не обнаружена ни разу. Антитела субкласса IgGl перекрестно реагировали с А- и Н-группоспецифическими веществами, как полагают Rydberg и соавт. [140], за счет способности распознавать углеводородные группировки внутри олигосахаридных цепей.

Антитела анти-РР1Р^к способны вызывать внутрисосудистый гемолиз и могут иметь клиническое значение (Т.М. Пискунова, ТА. Ичаловская [1], Daniels [37]). Острые гемолитические реакции наблюдали Chandeysson и соавт. [27] после внутривенного введения 25 мл несовместимых эритроцитов. Указанные антитела являются одной из возможных причин привычных выкидышей на ранних сроках беременности.                                                                                                   

Как отмечено выше, фенотип р был впервые выявлен у женщины с карцино­мой желудка. Ей была проведена субтотальная резекция желудка и после этого в течение 22 лет не наблюдали признаков рецидива или метастазирования (Levine [93]). В отличие от эритроцитов больной клетки ее опухоли экспрессировали антигены Р и PI (Kannagi и соавт. [74]), что послужило основанием концепции «запретных антигенов», появляющихся в опухолях вопреки генотипу индивида, сфорсулированной Levine. По появлению этих антигенов можно судить о глуби­не трансформации нормальных клеток в процессе малигнизации. Levine выска­зал предположение, что антитела анти-РР1Р^к, имевшиеся у больной, предотвра­щали дальнейший рост опухоли.

Антиген LKE обнаружили Tippett и соавт. [159] в 1965 г. Сыворотка анти-LKE была получена от негра по имени Luke Р., страдавшего болезнью Ходжкина. Она напоминала известные к тому времени сыворотки анти-Р, поскольку не реагирова­ла с эритроцитами р и Р^к. Однако отрицательные реакции наблюдали также с неко­торыми образцами эритроцитов Р, и Р₂, что отличало анти-ЬКЕ-антитела от анти-Р.

В 1985 г. были получены моноклональные антитела к мышиному стадиоспецифическому эмбриональному антигену (SSEA-4) (Kannagi и соавт. [73]), специфичность которых практически совпадала со специфичностью антител сыворотки Luke (Tippett и соавт. [158]). Как показал биохимический анализ, структура, с которой реагировали указанные антитела, содержала терминальную группировку NeuAca2 —> 3Gaipi —$ 2GalNAc, сиаловую кислоту и галактозу, присоединенную к глобозиду. Именно эта структура распознается антителами анти- LKE и aHTH-SSEA-4.

Популяционные исследования среди англичан, проведенные Tippett и соавт. [158, 159] с использованием сыворотки Luke, а также МКА airra-SSEA-4, показали 98,84 % положительных результатов (LKE+); 1,16 % отрицательных (LKE-). Частота геноти­пов LKE ⁺/1КЕ⁺составила 0,7962; LKE ⁺/LKE~ - 0,1922; LKE'/LKE--0,0Ш.

Фенотип LKE- обнаружен у представителей различных расовых и этнических групп: англичан, шотландцев, итальянцев, французов, евреев, арабов, турок, негров.

Посемейные исследования показали, что ген LKE независим от локусов, контролирующих другие антигенные системы эритроцитов (MNS, PI, RH, LU, KEL, FY, XG), а также выделительство.

При проведении популяционных исследований отмечено, что экспрессия ан­тигена LKE варьировала в широких пределах. Фенотип LKEw (weak) встречал­ся чаще у лиц лиц Р₂, чем у лиц Р,, а также чаще среди лиц, имеющих группу крови Aj и А,В, по сравнению с людьми, имеющими группу крови О, В, А₂ и

2«ШРднако второй образец аллогенных анти-ЬЬСЕ-антител не показал каких-либо ассоциаций с группой Р и АВО (Daniels [37]).%

Антиген LKE хорошо выражен к моменту рождения (Bruce и соавт [22], Tippett и соавт. [158]). Он обнаружен в клеточных линиях тератомы человека (Kannagi и соавт. [73]), в ганглиозидах, выделенных из тромбоцитов (Cooling и соавт. [32]).

Экспрессия антигена LKE не зависела от наличия антигена Р. Лица LKE-присутствовали среди индивидов Pj и Р₂. Отмечена некоторая фенотипическая связь с антигеном Р^к. Последний лучше выражен на эритроцитах P+LKE-(Bruce и соавт. [22]).

Известно 5 образцов антител анти-LKE аллогенного происхождения. Первый из них найден у больного лимфомой, не получавшего гемотрансфузии (Tippett и соавт. [159]). В серологических реакциях антитела проявляли себя как агглюти­нины, выраженность реакций усиливалась по мере снижения температуры, такой же эффект давало энзимирование эритроцитов трипсином, фицином и папаином. Свежая сыворотка Luke вызывала гемолиз папаинизированных клеток. Антитела анти-LKE не интибировались жидкостью кист эхинококка или слюной лиц LKE+. Позднее было найдено еще 4 сыворотки указанной специфичности (Bruce и со­авт. [22], Moller, Jorgensen [114]), в одном случае анти-ЕКЕ-антитела сочетались с анти-Р ([114]). У новорожденных LKE+, родившихся от матерей с наличием анти-ЕЬСЕ-антител, проявлений ГБН не отмечено ([22,114]).

Антиген Р^к и антитела анти-Р^к

Антитела анти-Р^к и соответственно антиген Р^к открыты в 1959 г. Matson и соавт. [108] с помощью дифференциальной адсорбции сыворотки, содержавшей комбинированные антитела.

Особенностью лиц Р^к+ является то, что их эритроциты не содержат часто встречающегося антигена Р, а в сыворотке крови присутствуют анти-Р-антитела. Кроме того, сыворотки слабо реагируют с эритроцитами р (Kortekangas и соавт. [83], Tippett [156]).

Антиген Р^к одинаково хорошо экспрессирован в эритроцитах независимо от факторов Pj и Р₂.

Индивиды Р^к+ встречаются крайне редко, реже, чем лица с нулевым фе-НЩНПОМ р (Daniels [37]). Все они были выявлены благодаря неизменному присутствию в сыворотках их крови анти-Р-антител. Лица Р^к+ были выявлены,

в основном, среди финнов и японцев (Daniels [37], Race, Sanger [133]).

Обращало на себя внимание, что родители пробандов Р^к+ были Р^к-. Это да­вало основание полагать, что наследование гена Р^к имеет рецессивный характер (Moullec и соавт. [119], Nakagima и соавт. [126], Race, Sanger [133]). Родители 7 индивидов Р^к+ состояли в кровном родстве. Вместе с тем рецессивный харак­тер наследования может представлять собой только видимость, поскольку ве­щество Р^к является предшественником субстанции Р, и стандартные серологи­ческие методы позволяют выявить его только у лиц Р- (гомозигот Р^к/Р^к).

По результатам прямых серологических тестов создавалось впечатление, что антиген Р^к является очень редким. Однако Fellous и соавт. [42] обнаружили его на фибробластах всех лиц ?_{ и Р₂; фибробласты лиц р этот антигена не содержа­ли. Затем Naiki и Marcus [125] установили, что тригексозид церамида (Gb3) -один из основных мембранных гликолипидов эритроцитов - ингибирует актив­ность антител анти-Р^к. Naiki и Kato [123] указали на присутствие Р^к на эритро­цитах Pj и Р₂. Они высказали предположение, что ранее полученные результаты были ложноотрицательными, поскольку при адсорбции антител анти-Р 1Р^к эри­троцитами Pj (содержащими Gb3), помимо анти-Р 1-антител, из сывороток уда­лялась также и фракция анти-Р^к. Позднее присутствие антигена Р^к на эритроци­тах Р и Р₂ подтвердили с помощью МКА анти-Р^к. Слабую экспрессию антиге­на Р^к объяснили неполным превращением глобозида 3 в глобозид (антиген Р).

Антиген Р^к лучше экспрессирован на эритроцитах LKE-, чем LKE+ (см. Антиген LKE).

Антиген Р^к, идентифицированый как CD77, присутствует на лимфоцитах, гранулоцитах, моноцитах, тромбоцитах, клетках гладкой мускулатуры пищева­рительного и мочеполового тракта (Kasai и соавт. [75]), клетках злокачествен­ных опухолей (Bono и соавт. [15], Wiels и соавт. [170]) и считается информа­тивным при диагностике лимфомы Беркитта. Полагают, что CD77 участвует в апоптозе клеток зародышевых центров В-лимфоцитов (Khine и соавт. [80], Mori и соавт. [117]). Связывание CD77 и CD19 (специфический В-клеточный маркер) в дальнейшем приводит к апоптозу В-клеток (Mangeney и соавт. [104]).

Аллоиммунные антитела анти-Р^к присутствуют одновременно с анти-Р и анти-Р 1 в сыворотках крови лиц нулевого фенотипа р. Их выделяли из не­которых сывороток адсорбцией эритроцитами Pj (Race, Sanger [133], Tippett [156]). Такие антитела реагируют одинаково интенсивно с эритроцитами Р1 и Р2я?Активность антител анти-Р^к нейтрализуется жидкостью эхинококковых кист (Kortekangas и соавт. [84], Matson и соавт. [108]). Используя метод инги-биции анти-Р^к-антител различными фракциями эхинококковой жидкости и оли-госахаридами известной структуры, Watkins и Morgan [168] пришли к выво­ду, что антитела анти-Р^к имеют более широкую специфичность, чем анти-Р 1. Установлено, что дисахарид Galal —► 4Gal, выделенный из Pj ^специфичного дшкопротеина жидкости эхинококка, так же как Р1-специфический трисахарид и олигосахариды, имеющие группировку Galal Щ 4Gal, ингибирует активность антител анти-Р^к (Naiki и соавт. [123]).

Помимо аллоиммунных антител, описаны аутоиммунные анти-Р^к-антитела, которые находили у больных аутоиммунной гемолитической анемией и билиар-ным циррозом печени (Race, Sanger [133]).

Иммунизацией крыс клетками лимфомы Беркитта были получены монокло­нальные анти-Р^к-антитела (Wiels и соавт. [170]), реагирующие с Gb3. Эти ан­титела реагировали в высоком титре с клетками Р₂^к и Р₂^к, слабо реагировали с папаинизированными эритроцитами Р. и Р и давали отрицательные реакции с эритроцитами нулевого фенотипа р.

Другие образцы МКА анти-Р^к получены иммунизацией мышей синтетиче­скими гликопротеинами, содержащими Р^к-специфические компоненты, глобо-зидом 3, выделенным из эритроцитов свиней и клеточных линий плоскоклеточ­ной карциномы пищевода (Kasai и соавт. [75], Miyamoto и соавт. [113]).

Антиген Р ~ гликолипидный глобозид - имеется на всех эритроцитах за ис­ключением редких фенотипов р и Р\ Он одинаково экспрессирован на эритро­цитах Pj и Р₂ взрослых лиц. Этот антиген в отличие от антигена Р1 хорошо раз­вит к моменту рождения. Несколько слабее он выражен у новорожденных Р по сравнению с новорожденными Р.

Сведения об экспрессии антигена Р на других клетках крови противоречивы. С помощью метода проточной цитофлюориметрии Dunstan [39] выявил антиген Р на лимфоцитах, гранулоцитах и моноцитах; в своих экспериментах автор приме­нил аллогенные анти-Р-антитела. Напротив, von dem Bome и соавт. [163], исполь­зуя моноклональные анти-Р-антитела, не обнаружили указанный антиген на гра­нулоцитах и большинстве лимфоцитов периферической крови, хотя при этом он присутствовал на клетках эндотелия, тромбоцитах, мегакариоцитах и фибробла-стах. Другие авторы (Shevinsky и соавт. [149]), применив несколько образцов мо­ноклональных анти-Р-антител, не нашли фактора Р на лимфоцитах и фибробла-стах. Антиген Р выявлен в клетках злокачественных опухолей (Bono и соавт. [15], Kelus и соавт. [77], Shevinsky и соавт. [149], von dem Bome и соавт. [163]), в клет­ках печени и сердца плода, а также в плаценте (Spitalnik и соавт. [153]).

Анти-Р-антитела найдены в сыворотках лиц, имевших фенотип P^k. Kortekangas и соавт. [83], Matson и соавт. [108] выделили анти-Р-антитела из сьюороток лиц р, содержащих комбинированные антитела, адсорбцией эритроцитами или Р₂^к. Такие же антитела получили Watkins и Morgan [168], нейтрализуя сыворотку с комбинированными антителами жидкостью эхинококковых кист.

Большинство анти-Р-антител является смесью IgM и IgG (Lopez и соавт. [103], Soderstrom и соавт. [151], Yoshida и соавт. [176]) и иногда содержат фрак­цию IgA (Hansson и соавт. [55]). В присутствии комплемента анти-Р-антитела IgM вызывали гемолиз эритроцитов Р1 и Р2 (Adinolfi и соавт. [2]).

Помимо аллоиммунных анти-Р-антител встречаются аутоиммунные антите­ла такой же специфичности. Их обнаруживали у больных пароксизмальной хо-лодовой гемоглобинурией (Worlledge, Rousso [173]). Это один из вариантов ау­тоиммунной гемолитической анемии, развивающейся преимущественно у де­тей как осложнение перенесенной вирусной инфекции. Сыворотка крови таких больных содержит гемолизины, получившие название двухфазных гемолизинов Доната - Ландштейнера по имени авторов, впервые их описавших и предложив­ших соответствующую пробу для их определения. Проба Доната - Ландштейнера сводится к следующему: сыворотку выдерживают с эритроцитами при темпера­туре 4-8 °С (I фаза - сенсибилизация), затем экспонируют в термостате при тем­пературе 37 °С. При наличии в испытуемой сыворотке двухфазных гемолизинов эритроциты разрушаются (II фаза - гемолиз). Гемолиз происходит в присутствии комплемента, который содержится в исследуемой сыворотке.

В значительном числе случаев двухфазные гемолизины имеют анти-Р-специфичность, реагируют с эритроцитами Pj и Р₂, но не взаимодействуют с эритроцитами р и Р^к (Heddle [57], Levine и соавт. [95], van der Hart и соавт. [160]). Эти антитела относятся к классу IgG. Значительно реже встречаются двухфазные

аутоиммунные гемолизины со специфичностью анти-1, анти-i, анти-Pr (Sokol и

соавт. [152]) и анти-р (Engelfriet и соавт. [41], Issitt и соавт. [67]).

При проведении пробы Доната - Ландштейнера для усиления реакции эри­троциты обрабатывают папаином (Heddle [57], Sokol и соавт. [152]), сыворотки корригируют до слабокислого рН (Judd [70]).

Аутоиммунную гемолитическую анемию способны вызывать и однофазные аутоантитела анти-Р IgG-класса с температурным оптимумом между 20-32 °С (Lindgren и соавт. [99], Mensinger и соавт. [НО], Ries и соавт. [137]). Такие антите­ла выявляли только в среде с низкой ионной силой, тест Доната - Ландштейнера с ними был отрицательным (Cohen и соавт. [30], Judd и соавт. [71]).

Крысиные МКА анти-Р (МС631) к эмбриональному стадиоспецифическому мышиному антигену (SSEA-3) перекрестно реагировали с эритроцитами Р1 и Р2, но не реагировали с эритроцитами р и Р^к. Их активность угнеталась трисахари­дом GalNAcpl —> 3Galal —► 4Gal (Kannagi и соавт. [73], Tippett и соавт. [158]).

Мышиные МКА анти-Р IgM-класса, реагировавшие с очищенным глобо-зидом, вызывали сравнительно слабую холодовую агглютинацию, однако в присутствии комплемента наблюдали выраженный гемолиз эритроцитов Р+ (Rouger и соавт. [139], von dem Borne и соавт. [163]). Другой образец мышиных МКА, полученных иммунизацией экстрактом из Escherichia coli, в серологиче­ских реакциях также показал анти-Р-специфичность. Однако активность этих антител устранялась Т-специфическим иммуносорбентом (Gaipi —>3GalNAc-R) (Inglis и соавт. [66], Rouger и соавт. [139]).

Экстракты из лосося, форели и икры сельди реагировали с эритроцитами, содержащими антигены В, Р, Р1 или Р^к, но не агглютинировали эритроциты 0(1)р или A(II)p (Anstee и соавт. [7, 8], Voak и соавт. [161, 162]). Антитела не сепарируются по специфичности дифференциальной адсорбцией, поэтому цен­ность указанных экстрактов в качестве реагентов невелика.