Антигены Yt^a и Yt^b

Система Cartwright представлена двумя антигенами: Yt^a и У1^ь(табл. 13.1). Антитела анти-Yt⁸, открывающие часто встречающийся антиген Yt^a, обнаруже­ны в 1956 г. Eaton и соавт. [12] при проведении пробы на индивидуальную со­вместимость. Через 8 лет Giles и Metaxas [16] описали антитетичный антиген Yt^b, встречающийся относительно редко (с частотой Щ 8 %).

Таблица 13.1

Антигены системы Yt

Нулевой фенотип Yt(a-b-), как и молчащий ген, передаваемый по наслед­ству, в системе Yt неизвестен.

Антигенные различия Yt^a/Yt^b обусловлены заменой гастидина на аспарагин в по­зиции 353 (рис. 13.1). Локусы УТиАСНЕ (рис. 13.2) не зависят от генов других групп крови. Они расположены на хромосоме 7 в позиции 7q22.1 (Reid, Lomas-Francis [40]). В 1989-1991 гг. группа исследователей (Coghlan и соавт., Zelinski и соавт.) опублико­вала данные о возможной сцепленности локусов YT и KEL. Последний, как вскоре выяснилось, так же как и УГ, расположен на хромосоме 7. Однако последующие ис­следования не подтвердили существование указанной сцепленности.

Строение гликопро­теина, несущего антигены Yt.

Из 1568 доноров, обследованных Eaton и соавт. [12], Giles и соавт. [17] в Оксфорде, только 5 имели фенотип Yt(a-), остальные - Yt(a+). Таким об­разом, частота антигена Yt^a составила 99,8 %, гена Yt^a - 0,9559 (табл. 13.2). Установлено, что 8 % лиц белой расы имели фенотип Yt(b+). По результатам изучения частоты антигенов Yt^aH Yt^b рассчитана частота генотипов: Yt^a/Yt^a(0,8966), Yt^a/Yt^b (0,1006) и Yt^b/Yt^b (0,0028). Расчеты показали, что существова­ние третьего аллеля в системе Cartwright вряд ли возможно

Распределение антигенов Yt^a и Yt^bу различных народов

Примечание: « - » - нет данных.

Обследование лиц различной национальности показало, что среди ев­реев, арабов и друзов Израиля антиген Yt^b встречается относительно ча­сто (табл. 13.2). В то же время этот фактор не был выявлен у японцев, жите­лей Таиланда, а также у инков и других коренных жителей Южной Америки (Nakajima и соавт. [34], Mourant и соавт. [33]).

Giles и соавт. [17] установили среди 1399 обследованных 113 (8,1 %) лиц Yt(b+). Salmon и соавт. [42] выявили 608 человек Yt(b+) среди 7510 французов (8,1 %). Lewis и соавт. [28] обследовали 659 канадцев, из них 589 были Yt(a+b~), 70 Yt(a+b+), не было ни одного Yt(a-b+). Wurzel и Haesler [50] протестировали эритроциты 714 аме­риканских негров и обнаружили, что 60 из них (8,4 %) были Yt(b+). Эти данные по­казывают, что частота Yt* и Yt^b одинакова у негроидов и европеоидов.

Обращают на себя внимание две популяции, в которых частота антигенов Yt^a и Yt^b отличается от таковой в других сравниваемых группах. Так, Nakajima и соавт. [34] протестировали 5 тыс. японских доноров, из них 70 были протестированы анти-У^-сывороткой. Все японцы были Yt(a+), ни одного индивида Yt(b+) не об­наружено. Возможно, для японцев характерен исключительно фенотип Yt(a+b-).

Отмечена более высокая, чем ожидалась, частота анти-У1:^а-антител у израиль­тян. Когда появились тестовые анти-У1^ь-реактивы, было установлено, что часто­та этого антигена у жителей Израиля существенно выше, чем в других геогра­фических зонах. Повышенная частота антигена Yt^b в этом регионе привела к не­которому увеличению частоты фенотипа Yt(a-b+), что могло повлиять на часто­ту аллоиммунизации лиц Yt(a-b+). Из 1683 целенаправленно протестированных израильских евреев, арабов и друзов 26 имели фенотип Yt(a-b+). Иными слова­ми, среди этих народов лиц Yt(a-b+) обнаруживают с частотой 1 на 65. Частота встречаемости этого фенотипа среди англичан, французов и негров составляет примерно 1 на 500, то есть почти в 10 раз меньше.

Результаты двух посемейных исследований свидетельствовали о кодоминантном наследовании генов Yt^an Yt^b в соответствии с законом Менделя. Данных о суще­ствовании молчащего аллеля не получено (Giles и соавт. [17], Lewis и соавт. [28]).

С антигенными различиями Yt^a/Yt^b ассоциированы две нуклеотидные заме­ны внутри гена ACHE. Одна из них, С 1057 А в экзоне 2, кодирует замену гисти-дина на аспарагин в положении 353. Другая мутация, С 1432 Т в экзоне 3, фе-нотипически не проявляется. Третья замена нуклеотидов, в экзоне 5, также не проявляла себя в зрелом протеине (Battels и соавт. [3]).

Исследование АХЭ электрического ската Torpedo californica, наиболее изучен­ной формы этого фермента, показало, что лишь аминокислотная замена в пози­ции 353 приводит к формированию иммуногенного участка, способного стимули­ровать синтез специфических антител. Различия в антигенной структуре. АХЭ не влияют на ее активность (Masson и соавт. [30]).

Антиген Yt^a устойчив к действию трипсина, а-химотрипсин его разруша­ет. Обработка эритроцитов фицином и папаином дала разноречивые результа­ты, которые зависели от того, какими образцами анти-У^-антител проводили тестирование энзимированных эритроцитов (Eaton и соавт. [12], Vengelen-Tyler, Morel [48], Morton [32], Rouger и соавт. [41], Daniels [7]). В некоторых случаях об­работка указанными протеолитическими ферментами усиливала реакцию. К дей­ствию сиалидазы антиген Yt^a не чувствителен (Rouger и соавт. [41], Daniels [7]).

Антигены Yt^a и Yt^b разрушаются под воздействием дитиотрейтола, 2-ами-ноэтилизотиоурониумбромида (АЕТ), 2-меркаптоэтанола (Branch и соавт. [6], Levene, Harel [26], Shulman и соавт. [43]). Денатурация зависела от концентра­ции дитиотрейтола при обработке эритроцитов. Когда применяли 200 мМ пре­парата, как Yt^a, так и Yt^b денатурировались. При использовании 50 и 100 мМ растворов дитиотрейтола активность антигена Yt^a снижалась пропорционально повышению концентрации раствора ДТТ, но не подавлялась полностью.

Shulman и соавт. [43] показали, что антиген Yt^b денатурируется, когда эри-троцты обрабатывают 500 мМ раствором 2-меркаптоэтанола.

Уместно упомянуть, что применение АЕТ для создания искусственных эри­троцитов Kell_null подверглось критике, поскольку этот препарат разрушает и другие, не относящиеся к системе Kell, антигены. Однако, когда Levene и Harel [26] обработали АЕТ эритроциты Yt(a+), денатурация антигена Yt^a не была та­кой полной, как денатурация антигенов системы Kell. Девять из 15 сывороток aHTH-Yt^a не реагировали с эритроцитами, обработанными АЕТ, другие 6 все же реагировали, хотя не так сильно, как с необработанными эритроцитами.

Антигены Yt^a и Yt^b определяются на эритроцитах новорожденных: Yt^b выра­жен слабо, в то время как экспрессия Yt^a не отличается от таковой у взрослых. Giles и соавт. [17] установили, что экспрессия антигена Yt^b у новорожденных не изменена. Слабую экспрессию антигена Yt^a наблюдали у недоношенных (Eaton и соавт. [12], Ferguson и соавт. [14]); 8 из 10 образцов эритроцитов не реагирова­ли с анти-У1^ь-сывороткой, остальные 2 реагировали слабо (Gobel и соавт. [18]).

АХЭ присутствует в нервной и мышечной тканях и на эритроцитах (Taylor [46]). Данных о распределении этого фермента в других тканях мало. Антиген Yt^a не был выявлен на лимфоцитах, гранулоцитах и моноцитах при исследова­нии методом проточной цитофлюориметрии (Dunstan [11]).

Telen и соавт. [47] показали, что большинство образцов анти-У^-антител не реагирует с фракцией комплементчувствительных эритроцитов больных парок-сизмальной ночной гемоглобинурией (ПНГ), однако взаимодействует с фракци­ей эритроцитов, не чувствительных к комплементу. Установлено, что упомянутые комплементчувствительные эритроциты в значительной степени лишены глико-зилфосфатидилинозитола (ГФИ). У двух больных ПНГ комплементчувствитель­ные эритроциты были Yt(b+). Эти результаты интерпретированы авторами как указание на то, что эпитопы Yt^aH Yt^b несет ГФИ-ассоциированный гликопротеин.

В 1991 г. Spring и соавт. [45] показали, что антигены Cartwright на эритро­цитах несет ГФИ-ассоциированный гликопротеин АХЭ (см. рис. 13.1). Путем иммунопреципитации антителами aHTH-Yt^a и анти-Yt¹⁵ выделен субстрат с мол. массой 72 кДа. По электрофоретической подвижности он был идентичен веще­ству, выделенному с помощью моноклональных антител к АХЭ эритроцитов. Субстрат обладал ацетилхолинэстеразной активностью, о чем свидетельство­вали результаты экспериментов Petty [36] с иммобилизацией моно- и поликло-нальных антител анти-Yt³ и анти-Yt¹⁵.

АХЭ эритроцитов подвергается TV-гликозилированию. Как установили Spring и соавт. [45], обработка субстрата, выделенного посредством иммунопреципи­тации, N-гликаназой приводила к уменьшению его мол. массы с 72 до 63 кДа. С помощью МКА к АХЭ установлено, что один эритроцит несет 3-5 тыс. АХЭ-участков. При использовании для аналогичных исследований Fab-фрагментов указанных антител выявлено 7-10 тыс. участков связывания. Это дало основа­ния Spring и соавт. [45] полагать, что АХЭ присутствует в мембране эритроци­тов в форме димера.

Как указывалось выше, АХЭ играет важную роль в передаче нервных им­пульсов в исполнительные органы и ткани. Ацетилхолин обеспечивает переда­чу электроимпульсных сигналов от терминальных участков нервов в мышечные клетки. Затем ацетилхолин быстро разрушается АХЭ путем гидролиза для пре­кращения последующей передачи нейроимпульсов.

АХЭ присутствует в различных тканях в разных изоформах, обусловлен­ных альтернативным сплайсингом гена ACHE (Taylor [46], Li и соавт. [29]). Фрагменты кДНК гена ACHE обнаружены в библиотеке генов из клеток фе­тальной мышечной ткани и нервной ткани взрослых лиц (Soreg и соавт. [44]). Полная кодирующая последовательность гена установлена Li и соавт. [29] при анализе космидной библиотеки генома человека.

Три экзона кодируют сигнальный пептид и N-терминальный участок, состоя­щий из 535 аминокислот (рис. 13.3). За счет альтернативного сплайсинга следу­ющего экзона возникают структурные изменения в С-терминальном домене, по­зволяющие ГФИ присоединяться к эритроидным клеткам.

Аминокислотная последовательность протеина АХЭ

Следует отметить, что антитела к антигенам Yt^a и Yt^b находили у беременных или реципиентов. Они ни разу не описаны как антитела естественного происхо­ждения. Практически все образцы антител Yt были IgG с оптимумом реагирова­ния при температуре 37 °С в непрямой антиглобулиновой пробе. Большинство образцов относилось к субклассу IgGl, нередко в сочетании с IgG4. Некоторые образцы были представлены только субклассом IgG4. Ни в одном из случаев ан­титела не относились к субклассу IgG3 (Vengelen-Tyler, Morel [48], Pierse и со­авт. [37]). Некоторые образцы антител анти-Yt³ обладали способностью связы­вать комплемент (Bergvalds и соавт. [4]), в то время как у других такая способ­ность отсутствовала (Gobel и соавт. [18], Ballas, Sherwood [2]).

Антитела системы Yt не описаны ни разу в качестве причины ГБН, хотя в ряде случаев были выявлены у женщин Yt(a-), родивших детей Yt(a+) (Wurzel, Haesler [50], Gobel и соавт. [18], Bergvalds и соавт. [4], Bettigole и соавт. [5], Lavallee и соавт. [24], Davey, Simkins [9]). У одной женщины Yt(b-), имевшей анти-У^-антитела, родился ребенок Yt(b+) без признаков ГБН (Ferguson и со­авт. [14]). Антитела системы Yt считаются клинически значимыми в практике трансфузиологии. Антитела анти-Yt³ вызвали гемолитическую посттрансфузи-онную реакцию с летальным исходом у больного серповидно-клеточной ане­мией (Reed и соавт. [39]). Описаны посттрансфузионные реакции немедлен­ного типа, обусловленные антителами анти-Yt³ (Hadley и соавт. [19]). Вместе с тем у многих реципиентов, имевших анти-У^-антитела и получавших транс­фузии эритроцитов Yt(a+), признаков несовместимости не наблюдалось (Dobbs и соавт. [10], Eckrich и соавт. [13]). В одном случае антитела анти-Yt³ не вызва­ли посттрансфузионной реакции, несмотря на то, что в тестах in vitro проявля­ли гемолитические свойства, свидетельствовавшие об их трансфузионной опас­ности (AuBuchon и соавт. [1]). Из 18 реципиентов, имевших анти-У1^а-антитела, только у 3 наблюдалось уменьшение продолжительности жизни перелитых эритроцитов (Eckrich и соавт. [13]). По данным других исследователей, дли­тельность персистенции несовместимых эритроцитов в кровотоке реципиен­тов варьировала в широких пределах (Gobel и соавт. [18], Bettigole и соавт. [5], Dobbs и соавт. [10], Ballas, Sherwood [2], Davey, Simkins [9], Nance и соавт. [35], Kakaiya и соавт. [23]). Лишь в отдельных случаях имелись основания полагать, что перелитые эритроциты будут быстро элиминированы антителами из крово­тока (Gobel и соавт. [18], Bettigole и соавт. [5], Ballas, Sherwood [2]). В иссле­дованиях с использованием клеток, фагоцитирующих эритроциты, сенсибили­зированные антителами, также получены противоречивые данные (Gobel и со­авт. [18], AuBuchon и соавт. [1], Eckrich и соавт. [13], Levy и соавт. [27], Pierse и соавт. [37], Hadley и соавт. [19], Kakaiya и соавт. [23]). В связи с этим пред­ставляется очевидным, что каждый образец антител требует индивидуального исследования, по результатам которого можно прогнозировать степень несовме­стимости перелитых эритроцитов и, соответственно, безопасность и лечебную эффективность планируемой трансфузии.

При отсутствии совместимых эритроцитов Yt(a-) реципиенту, имеющему анти-У1^а-антитела, переливают эритроциты Yt(a+). При этом целесообразно отобрать эритроциты, дающие менее сильную реакцию in vitro с сывороткой реципиента.

Описаны анти-У^-антитела у реципиента Yt(a+). Эти антитела реагировали с эритроцитами Yt(a+) неродственных лиц и матери реципиента, но не реагиро­вали с эритроцитами самого реципиента и его Yt(a+) отца (Mazzi и соавт. [31]). Указанное наблюдение нельзя рассматривать как доказательство существования парциальных вариантов антигена Yt^a, поскольку анти-У1;^а-антитела, появившие­ся у реципиента на 9-й день после переливания 5 доз эритроцитов Yt(a+), через несколько месяцев исчезли.