Как указывалось выше, антитела против антигенов М и N впервые были по­лучены иммунизацией кроликов эритроцитами людей. Позднее были найдены антитела анти-М и анти-N аллогенного происхождения (А. Майский, Л. Кучера [5], А.А. Михайлова, Т.А. Ичаловская [6], А.Е. Скудицкий [8], Alperin и соавт. [13], Ballas и соавт. [20], Beattie и соавт. [22], Chapman и соавт. [39], Duguid и со­авт. [65], Furlong и соавт. [73], Immel и соавт. [ПО], Као и соавт. [128]).

В 1947 г. Walsh и соавт. [257] описали антитела к антигену, связанному как с фактором М, так и N. Антитела получили обозначение анти-S от названия го­рода, где были обнаружены - Сидней, Австралия. Четыре года спустя, в 1951 г., Levine и соавт. [145] нашли сыворотку с антителами к антигену, антитетично­му антигену S. Она реагировала положительно со многими образцами эритро­цитов, но S-отрицательные клетки неизменно давали положительную реакцию. Так был открыт фактор s, обозначенный строчной буквой из-за его антитетич­ной связи с антигеном S.

При обследовании представителей различных рас и этнических групп выяв­лены особенности в распределении антигенов М, N, S и s (табл. 6.2). В боль­шинстве изученных популяций частота гена Мсоставила 50-60 %, N- 40-50 %. Частота гена М оказалась выше среди жителей стран Балтии и европейской ча­сти России [2-4, 7, 9, 43, 45, 173, 191, 219-222]. Этот ген реже выявляли (около 2 %) среди островитян Тихого океана и австралийских аборигенов. Частота гена S оказалась низкой среди жителей Дальнего Востока и у австралийских абори­генов (Mourant и соавт. [173]).

Посемейные исследования показали, что антигены MN и Ss фенотипически и генетически связаны между собой и являются продуктами двух частично сце­пленных генных локусов - MN и Ss (Cleghorn [43, 45], Mourant и соавт. [173], Race, Sanger [191], Sanger и соавт. [220]).

В рандомизированных выборках чаще встречается генный комплекс Ns, не­сколько реже - Ads, а комплекс MS - еще реже. Наиболее редким был гаплотип NS. Эти 4 генных комплекса найдены у представителей практически всех изу­чавшихся популяций (Mourant и соавт. [173]).

Распределение фенотипов MNS

Серологически выявляемая М-антигенная активность обусловлена присут­ствием серина в позиции 1 и глицина в позиции 5 на экстрацеллюлярном до­мене гликофорина A (Dahr и соавт. [55]). На N-положительных клетках в этих позициях находятся лейцин и глютаминовая кислота соответственно (рис. 6.1). В экспрессии антигенов важную роль играют О-гликаны и сиаловые кислоты. Позиции 2-4 пептидной цепи гликофорина А гликозилированы (Dahr и соавт. [55], Issitt, Anstee [113], Schenkel-Brunner [223]).

Строение терминальных участков гликофорина А.

В отечественной литературе имеется 2 сообщения об аллоиммуниза­ции антигеном М в результате беременности. Выраженных клинических про­явлений ГБН при этом не наблюдали (А.А. Михайлова, ТА. Ичаловская [6], А.Е. Скудицкий [8]).

Антитела анти-М обнаруживали у детей и взрослых, перенесших бактери­альные инфекции (Као и соавт. [128]). Антитела выявляли у беременных, дети которых, как позже выяснилось, не имели антигена М. Анти-М-антитела ино­гда сопутствовали другим антителам (Rh, Kell, Kidd, Duffy) у гематологиче­ских больных, получивших многочисленные переливания компонентов крови (А. Майский, Л. Кучера [5], Gales и соавт. [77]).

Помимо естественных и аллоиммунных антител описаны аутоантитела анти-М и анти-N (Chapman и соавт. [39], Garratty и соавт. [79], Immel и соавт. [ПО], Sacher и соавт. [215]). В некоторых случаях течение аутоиммунной гемо­литической анемии, обусловленной этими антителами, было тяжелым (Garratty и соавт. [79], Immel и соавт. [ПО]).

Различают рН-зависимые и глюкозозависимые антитела анти-М и анти-N (Beattie и соавт. [22], Reid и соавт. [200]). В отличие от обычных антител, для которых кислотность среды не столь существенна, рН-зависимые анти-М и анти-К-антитела наиболее активно реагируют с эритроцитами, несущими соот­ветствующий антиген, при значении рН 6,5. Глюкозозависимые антитела прояв­ляют свое действие лишь с эритроцитами, инкубированными в растворе глюко­зы. Установлено, что активность некоторых образцов антител анти-М и анти-N ингибируется растворами мальтозы и маннита, но остается неизмененной в присутствии фруктозы, рибозы, галактозы, лактозы и сахарозы. Такие антитела выявляли главным образом у больных сахарным диабетом.

У больных почечной недостаточностью, находившихся на гемодиализе, об­наруживали особые антитела анти-N, реагирующие с эритроцитами, обработан­ными формальдегидом (Dzik и соавт. [66], Howell и соавт. [96], McLeish и со­авт. [157], Sandler и соавт. [218], White и соавт. [259]). Такие антитела были обозначены как aHra-N_form. Дальнейшие исследования показали, что anra-N_f -антитела образовались в результате модификации мембраны эритроцитов боль­ных следами формальдегида в гемодиализной системе (стерилизацию систем для гемодиализа проводили с использованием формальдегида).

AHTH-N-подобную специфичность имеют лектины растительного происхо­ждения - Vicia graminea (А.К. Туманов, В.В. Томилин [9], Prigent [190]).

К настоящему времени получено большое количество образцов моно­клональных антител анти-М и анти-N (Lisowska [149], Reid и соавт. [201]). Последние с успехом используют для фенотипирования эритроцитов, одна­ко некоторые из них, в частности анти-М, не строго специфичны и в высоких концентрациях реагируют с эритроцитами M-N+, т. е. диспецифичны. Для при­дания им анти-М-специфичности прибегают к их разведению, что вполне при­емлемо для рутинного анализа, но не для метода адсорбции - элюции. На ак­тивность моноклональных анти-М- и анти-К-антител влияют рН среды и тем­пературные условия постановки реакции. Поликлональные антитела анти-М и анти-N алло- и ксеногенного происхождения менее зависимы от этих условий.

Протеолитические ферменты, применяемые в практике иммуносерологи-ческих лабораторий (папаин, фицин, бромелин, протеаза), разрушают антиге­ны М и N, в связи с чем энзимные пробы при работе с антителами анти-М и анти-N не используют (Hirsch и соавт. [93], Issitt, Anstee [113], Race, Sanger [191], Reid и соавт. [201]).  

Гликофорин А - одно из наиболее представительных в количественном отно­шении веществ в структуре эритроцитной мембраны (Chasis и соавт. [40], Dahr [54]). В его состав входит 131 аминокислота. На экстрацеллюлярный участок, N-домен, приходится 72 аминокислоты, на гидрофобный трансмембранный до­мен - 23 аминокислоты, на терминальный цитоплазматический, или С-домен, -36 аминокислот.

Гликофорин В имеет меньшую массу (72 аминокислоты). Он также пред­ставлен тремя доменами: экстрацеллюлярным, N-терминальным, имеющим 44 аминокислоты; гидрофобным трансмембранным, имеющим 20 аминокислот, и коротким терминальным цитоплазматическим С-доменом, состоящим из 8 ами­нокислот (Chasis и соавт. [40], Daniels [56]).

Экстрацеллюлярные домены обоих гликофоринов, А и В, интенсивно глико­зилированы.

Молекула гликофорина А содержит один N- и от 15 до 21 О-гликанов, при этом О-гликаны представлены разветвленной цепью тетрасахаридов, состоящей из сиаловой кислоты, галактозы и N-ацетилгалактозамина (Chasis и соавт. [40], Issitt, Anstee [113]).

Степень гликозилирования гликофоринов у разных лиц неодинакова. Строение О-гликанов гликофорина А во многом сходно с таковым гликофори­на В. Так, первые 26 аминокислотных остатков в экстрацеллюлярном домене гликофорина А с N-серологической активностью такие же, как и на гликофо-рине В (Blumenfeld и соавт. [29], Booth [31], Chasis и соавт. [40], Dahr [54], Schenkel-Brunner [223]). Этим объясняется N-антигенная активность гликофо­рина В, которую обозначают как ^fN^f для ее дифференциации от антигена N, на­ходящегося на молекуле гликофорина A (Issitt, Anstee [113], Judd и соавт. [127]). Трансмембранные домены гликофоринов А и В также практически идентичны между собой (Chasis и соавт. [40], Daniels [56], Schenkel-Brunner [223]).

Антигены М и N несет гликофорин А, антигены S и s расположены на гли-кофорине В (Schenkel-Brunner [223]). Количество молекул гликофорина А на 1 эритроцит составляет 800 тыс.-1 млн, гликофорида В 1170-250 тыс. (Schenkel-Brunner [223]).

Специфичность антигенов S и s обусловлена заменой одной амин&кислоты в экстрацеллюлярной части гликофорина В, в позиции 29 (Chasis и соавт. [40], Dahr [54]). На цепях, несущих S-антигенную активность, эту позицию занимает метионин, на цепях, несущих s-антигенную активность, - треонин. Полагают, что важную роль в экспрессии указанных антигенов играет гликозилирование цепей гликофорина В в позициях 25, 34 и 35. Вместе с тем S- и s-антигенную активность связывают с терминальными пентапептидными участками гликофо­ринов А и В (Daniels [56], Issitt, Anstee [113], Reid, Lomas-Francis [202]).

Антитела анти-S и анти-s встречаются реже по сравнению с анти-М- и анти-N-антителами. Они имеют, как правило, аллогенное происхождение (Sanger [191]). Их обнаруживают у лиц, подвергавшихся гемотрансфузиям, и у женщин, имевших беременности. Описан также случай естественных анти-8-антител (Constantoulis и соавт. [47]).

Большинство образцов антител к антигенам S и s относится к классу IgG, некоторые содержат фракцию IgM (Garratty [78]). Антитела непосредствен­но вызывают агглютинацию эритроцитов S+ нередко при температуре ниже 37 °С. В отличие от антител к антигенам М и N агглютинины анти-S эффектом дозы не обладают. Отдельные образцы анти-8-антител рН-зависимы и реагиру­ют наиболее интенсивно при рН 6,0. Многие образцы анти-S содержали так­же специфические антитела к редким антигенам эритроцитов других группо­вых систем: анти-Wr*, анти-Sw^a и др., отнесенных в настоящее время к системе Diego. Большинство из описанных в литературе образцов антител анти-s были IgG, они проявляли активность при 37 °С и лучше всего выявлялись непрямой антиглобулиновой пробой (Beck и соавт. [23]). Естественные aHra-s-антитела крайне редки (Lalezari и соавт. [135]).

Протеолитические ферменты, обычно применяемые в иммуносерологии, разрушают антигены S и s.

Антиген S разрушается следовым количеством хлора (Long и соавт. [151]). Известен способ обработки эритроцитов гипохлоритом натрия с целью ингиб-и S-антигенной активности. Его используют для дифференциации ан­тител aHT№-S с антителами другой специфичности (Judd [124]).

Антитела анти-S и анти-s часто выявляют как сопутствующие одновремен­но с антителами другие групповых систем: анти-D, анти-Е, анти-с, анти-С™, анти-К, анти-Ру^а и анти-Jk³ (Gales и соавт. [77]). Описаны аутоантитела анти-S (Fabijanska-Mitek и соавт. [68], Johnson и соавт. [122]).

Антитела к антигенам S и s относят к клинически значимыми (Drachmann и соавт. [64], Giblett и соавт. [81], Levine и соавт. [144]). Описаны случаи тяжелой ГБН, обусловленной антителами анти-S и анти-s, с летальным исходом (Giblett и соавт. [81]). Поиск совместимых доноров затруднен из-за высокой частоты антигенов S и s. Одновременное присутствие у реципиента других ан­тител еще более осложняет подбор.