Banks и соавт. [1], Spring и соавт. [42, 43] посредством перекрестной имму­нопреципитации показали, что антигенные детерминанты Do^a, Gy^a, Ну и Jo^aрасположены на одном и том же экстрацеллюлярном гликопротеине (рис. 16.1), имеющем мол. массу 46,75-57,5 кДа. Обработка эритроцитов эндогликозила-зой F приводила к уменьшению мол массы гликопротеина до 11 кДа, что свиде­тельствовало о N-гликозилировании изучаемого субстрата. Вместе с тем проте­ин Dombrock не подвергался О-гликозилированию.

Строение гликопротеина Dombrock.

В процессе иммунопреципитации предположительно выделялись также ди-меры указанных соединений.

В экспрессии антигенов Gy^a и Ну участвуют дисульфидные связи. При об­работке сульфгидрильными реагентами мол. масса гликопротеина уменьшалась до 40-50 кДа и он быстрее мигрировал в полиакриламидном геле в присутствии додецил-сульфата.

Gubin и соавт. [9] провели скрининг базы данных, включающих около 5000 нуклеотидных последовательностей хромосом, полученных из диффе­ренцирующихся эритроидных клеточных линий. Оказалось, что синтез ГФИ-ассоциированных протеинов кодируют гены, расположенные на хромосоме 12.

Идентифицирован фрагмент ДНК, который, по-видимому, и является геном Dombrock. Трансфекция этого фрагмента в эритролейкемические клетки К562 приводила к экспрессии на их поверхности антигенов Do^a, Gy^a, Ну и Jo^a (Gubin и соавт. [9]).

Локус DO имеет величину 14 кб, состоит из трех экзонов (рис. 16.2) и коди­рует синтез протеина, состоящего из 314 аминокислот (рис. 16.3). Экзон 1 ко­дирует аминокислоты в позиции 1-45, экзон 2 - в позиции 49-285, экзон 3 - в позиции 286-314, включая ГФИ-ассоциированный фрагмент из 17 аминокислот (Reid, Lomas-Francis [35]).

Аминокислотная последовательность гликопротеина Dombrock.

Обследование индивидов Do(a+) и Do(a-) с использованием молекулярно-генетических методов показало, что антигенные различия Do^a/Do^b обусловлены нуклеотидной заменой А 793 G в экзоне 2 гена DO (Gubin и соавт. [9], Rios и соавт. [36]). Последняя приводит к аминокислотной замене Asn 265 Asp (табл. 16.4). Два других замещения нуклеотидов, приводящие к появлению аминокислотных остат­ков Туг 126 и Leu 208, также связаны с различиями Do^a/Do^b. Антигенные различия Ну+/Ну- и Jo(a+)/Jo(a-) обусловлены заменами Gly 108 Val и Thr 117 Не.

РНК-транскрипты гена DO обнаруживали в селезенке, лимфатических узлах, костном мозге и эмбриональной печени; в тимусе и лейкоцитах пери­ферической крови они отсутствовали (Gubin и соавт. [9]). Они не выявлялись в течение первых 4 дней культивирования клеток периферической крови чело­века в присутствии эритропоэтина

Молекулярная основа антигенов Dombrock

Биологическая функция

Продукт аллеля Do^b содержит аминокислотную последовательность Arg -Gly - Asp, характерную для молекул клеточной адгезии. Аллель Do" кодирует в том же участке фрагмент с другой последовательностью аминокислот, Arg -Gly - Asn, что может повлиять на адгезивную способность субстрата.

Экзон 2 локуса DO содержит участок, характерный для генов, контролирующих синтез аденозиндифосфатрибозилтрансферазы (АДФ-трансферазы) (Koch-Nolte, Haag [16]). Возможно, гены Dombrock способны модифицировать этот фермент и таким образом влиять на его функциональную активность (Gubin и соавт. [9]).

Spring и соавт. [42, 43], Telen и соавт. [47] наблюдали у больных пароксиз-мальной холодовой гемоглобинурией две популяции эритроцитов, одна из кото­рых была лишена ГФИ-ассоциированных протеинов и не содержала антигенов Dombrock. Эти эритроциты были более чувствительны к комплементу.

Антигены Scianna расположены на гликопротеине, известном как HERMAP (human erythroid membarne associated protein - протеин, ассоциированный с мембраной эритроидных клеток человека). Синтез этого гликопротеина контро­лирует ген ERMAP, картированным на коротком плече хромосомы 1 в позиции 1р34.1. Ген ERMAP включает 11 экзонов протяженностью 19 пн.

Протеин HERMAP состоит из 475 аминокислот (рис. 15.2) и представлен экстрацеллюлярным, трансмембранным и интрацеллюлярным доменами, включающими соответственно 157, 20 и 198 аминокислот

Последовательность протеина HERMAP

Молекулярная основа нулевого фенотипа Scianna разнородна (см. табл. 15.4). В результате мутаций или делеций генетического материала у лиц с нулевым фенотипом (Sc:-1,-2,-3) синтезируемый протеин HERMAP утрачивает анти­генные эпитопы, распознаваемые антителами Scianna. Фенотипически это про­является в отсутствии всех без исключения антигенов указанной системы. Как уже отмечено выше, лица с фенотипом Sc „ могут быть аллоиммунизированы часто встречающимся антигеном Sc3.

До 1995 г. к системе Dombrock (Домброк) относили два антитетичных анти­гена - Do^aH Do^b. В 1995 г. Banks и соавт. [1] установили, что у лиц, лишенных антигенов Do⁸ и Do^b, отсутствуют также еще три антигена - Gy^a, Ну и Jo^a - и они имеют фенотип Do(a-b-)Gy(a-)Hy-Jo(a-). Столь очевидная фенотипи-ческая связь позволила расширить систему Dombrock до пяти единиц. В нее были включены часто встречающиеся антигены Gy^a (Gregory), Ну (Holley) и Jo^a(Joseph), получившие обозначения D03, D04 и D05 в номенклатуре ISBT. Антигены Do^aH Do^b получили обозначения D01 и D02 (табл. 16.1).

Таблица 16.1

Антигены Dombrock

Антигены Do^a, Do^b и Jo^a полностью развиты к моменту рождения (Swanson и соавт. [45], Molthan и соавт. [23], Laird-Fryer и соавт. [18], Jensen и соавт. [14]). Антигены Gy^a и Ну, наоборот, на эритроцитах новорожденных выражены слабо (Clark и соавт. [6], Moulds и соавт. [26]).

Обработка эритроцитов папаином или фицином повышает серологическую активность антигенов Dombrock, поэтому антиглобулиновый тест с клетками, предварительно обработанными указанными ферментами, является оптималь­ным, особенно при определении антигенов Do^a и Do^b.

Вещество Dombrock разрушается трипсином, химотрипсином, проназой и сульфгидрильными редуцентами. Сиалидаза подобного эффекта не оказывает (Banks и соавт. [1], Brown [4], Spring и соавт. [42,43]).

Антигены Dombrock расположены на гликопротеине, связанном с гликозил-фосфадитилинозитолом (ГФИ). Этот пептид относится к группе аденозинди-фосфатрибозилтрансфераз.

Генный локус DO картирован на хромосоме 12 в позиции 12р13.2-12.1

Do^a и Do^b

В 1965 г. Swanson и соавт. [45] обнаружили у европейки по фамилии Dombrock антитела, реагирующие с эритроцитами примерно 64 % произвольно выбранных доноров. Авторы показали, что антиген, обозначенный ими Do^a, не связан с другими антигенами эритроцитов и может быть отнесен к новой, ранее неизвестной системе.

В 1973 г. Molthan и соавт. [23] нашли антитела, открывающие антитетичный антиген - Do^b.

Данные о частоте антигенов Dombrock у различных народов неполны, поскольку получены, в основном, с использованием сывороток анти-Оо^а. Чаще всего антиген Do^a встречается у европеоидов и негроидов, реже - у монголоидов (табл. 16.2, 16.3). Полученная на основе этих данных расчетная частота генотипов Do ^a/Do ^а, Do ^a/Do ^bnDo ^b/Do^b составила соответственно 0,1764; 0,4872 и 0,3364.

Таблица 16.2

Частота антигена Do^a и генов Do^a и Do^b у разных народов

Исследование эритроцитов более 2500 членов канадских, израильских, япон­ских, негритянских и других семей с помощью сывороток анти-Оо^а показало, что во всех случаях независимо от расовой принадлежности ген Do^a проявлял себя как аутосомно-доминантный признак (Tippett и соавт. [48, 49], Lewis и со­авт. [19], Polesky, Swanson [30]). У родителей Do(a+) х Do(a-) частота ожидае­мых и частота фактических фенотипов детей по антигену Do^a совпадали.

Частота фенотипов Dombrock

Примечание: « + » - антиген присутствует; « - » - антиген отсутствует; сл - антиген слабо выражен.

Gy-

Позднее было установлено, что антиген Jo^a отсутствует на эритроцитах лиц Hy-Gy(a-) и Hy-Gy(a+^W), что свидетельствовало о фенотипической связи этих антигенов и возможной принадлежности к одной групповой системе. Вместе с тем все лица, имевшие анти-1о^а-антитела, были Gy(a+)Hy+Jo(a-) (Laird-Fryer и соавт. [18], Weaver и соавт. [51], Brown и соавт. [4]). Тем самым было показано, что антигены Gy^a, Ну и Jo^a полностью различаются между собой.

Антиген Ну несколько отличался от антигена Jo^a. Если антиген Jo^a отсут­ствовал на эритроцитах Hy-Gy(a-) и обнаруживался только на эритроцитах Hy+Gy(a+), то антиген Ну присутствовал на эритроцитах и Gy(a+)Jo(a+), и Gy(a+) Jo(a-) (Spring и соавт. [43]).

Weaver и соавт. [51] нашли 4 человек Hy-Gy(a-)Jo(a-). Banks и соавт. [1] выявили пять человек Jo(a-)Do(a+^wb+^w) негров, одного испанца Jo(a-)Do(a+^wb-).

Антигены Sc5, Sc6 и Sc7

Антитела, полученные от лиц с нулевым фенотипом Sc:-l,-2,-3, и фенотипа­ми Sc:—1,2, 3 и Sc:l,-2,3, проявляли очевидную гетерогенность и перекрестную реактивность с эритроцитами разных фенотипов, в том числе трех перечислен­ных. Выявляемые с помощью этих антител антигены различались между собой. Усилиями молекулярных генетиков удалось установить, что все лица, выработав­шие антитела к антигенам Scianna, были гомозиготами по точковым мутациям в разных участках гена ERMAP (табл. 15.4) (Flegel и соавт. [9] и Hue-Roye и соавт. [12]. Таким образом, система Scianna пополнилась сразу тремя антигенами.

Данные о клиническом значении антител affra-Sc5, airra-Sc6 и amn-Sc7 в литературе не представлены.

Свойства

Антигены Scianna устойчивы к действию большинства протеолитических ферментов, используемых в иммуносерологии: папаина, трипсина, бромели-на, химотрипсина (Daniels [4]). Обработка эритроцитов проназой, а также сме­сью трипсина и химотрипсина уменьшает выраженность этих антигенов. Резкое снижение экспрессии антигенов Scl и Sc2 отмечалось после обработки эритро­цитов сульфгидрильными редуцентами (Spring и соавт. [36]). Это свидетель­ствовало о присутствии в структуре антигенов Scianna одной или более дисуль-фидных связей. Эндогликозилаза F, расщепляющая JV-гликаны, несколько угне­тала связывание антител анти-Sc 1 с соответствующим антигеном. При этом свя­зывание антител amn-Sc2 полностью устранялось. По-видимому, аминокислот­ная замена, определяющая специфичность антигенов Scl и Sc2, каким-то обра­зом связана с iV-гликозилированием протеина Scianna. Обработка эритроцитов сиалидазой уменьшала мол. массу гликопротеина Scianna, изменяла его элек-трофоретическую подвижность.

Антитела системы Scianna

Антитела к антигенам Scianna встречаются редко. Они представлены, как пра­вило, иммуноглобулинами G, лучше выявляются в антиглобулиновой пробе, не связывают комплемент. Описаны агглютинирующие антитела системы Scianna.

Четыре образца анти-8с2-антител выявлены у доноров - добровольцев, им­мунизированных с целью получения реактивов анти-D. Один из доноров, эри­троциты которого использовали для иммунизации, имел фенотип D+Sc2+ (Seyfried и соавт. [34]).

По данным Mollison и соавт. [24], из 19 добровольцев с фенотипом D-Sc2-, получивших по две и более инъекции эритроцитов D+Sc2+, у 8 образовались анти-Б-антитела и только у одного - анти-8с2-антитела.

В пяти случаях анти-8с4-антитела вызвали легкую форму ГБН, толь­ко одному из новорожденных потребовалось обменное переливание крови (Rausen и соавт. [32]).

DeMarco и соавт. [6] привели описание одного случая легкой формы ГБН, обусловленной анти-8с2-антителами.

В другом случае у новорожденного была зарегистрирована положительная пря­мая проба Кумбса, обусловленная антителами анти-Sc 1 субкласса IgG3, однако проведения лечебных мероприятий при этом не потребовалось (Кауе и соавт. [14]).

Антитела системы Scianna не вызывали гемолитических осложнений после гемотрансфузии. Однако исследование приживаемости радиоактивно мечен­ных эритроцитов в организме больного, имеющего антитела анти-8сЗ, показа­ло относительно быстрое выведение эритроцитов из кровяного русла (МсСгеагу и соавт. [22]). Интересно, что антитела также вскоре исчезли из плазмы крови реципиента. Попытка стимулировать их последующий синтез путем инъекции эритроцитов Sc:l,-2 эффекта не дала.

Антитела анти-8сЗ у упомянутой выше меланезийской девочки исчез­ли после спленэктомии и не появлялись даже после трансфузии крови Sc:l,-2 (Woodfield и соавт. [38]). Три образца антител Scianna описали Devine и соавт. [7], об одном из них они сообщили как о причине замедленной гемолитической трансфузионной реакции.

Описано несколько случаев выявления аутоантител анти-Sc 1 (Tregellas и соавт. [37], McDowell и соавт. [23], Owen и соавт. [28], Pierse и соавт. [30]). У 2 больных, имевших ослабленные антигены Scianna, помимо фиксированных на эритроцитах аутоантител, присутствовали свободно циркулирующие аутоантитела, которые находили в сыворотке крови, но не обнаруживали в плазме (McDowell и соавт. [23]).

У одного ребенка аутоиммунная гемолитическая анемия, вызванная аутоанти-телами анти-Sc 1, не поддавалась лечению кортикостероидами. Положительный лечебный эффект получен только после удаления селезенки (Owen и соавт. [28]).

Peloquin и соавт. [29] выявили аутоантитела aHTH-Sc3 в сыворотке крови 2 больных (с лимфомой и болезнью Ходжкина). Экспрессия антигенов Scl и Sc3 на их эритроцитах была снижена. Аутоантитела реагировали слабее с эритроци­тами Sc:-1,2, чем Sc:l,-2.