Задолго до выделения гликопротеина Kidd, картирования и клонирования гена Ж было известно, что эритроциты, лишенные антигенов Kidd [Jk(a-b-)], не лизируются в 2М растворе мочевины, а эритроциты, содержащие антигены Kidd, лизируются указанным раствором. Уже тогда возникло предположение, что антигены Kidd участвуют в транспорте мочевины.
Используя нейлоновые мембраны с фиксированными к ним аффинно-очищенными IgG-антителами анти-Лса, анти-Лсь и анти-ЛсЗ, Sinor и соавт. [96] выделили из оболочки эритроцитов субстрат с мол. массой 45 кДа, несущий Jk-антигенную активность. Иммунопреципитат, выделенный с помощью антител анти-ЛсЗ из эритроцитов всех фенотипов Kidd, за исключением Jk(a-b-), представлял собой гликопротеин с мол. массой 46-60 кДа. После удаления N-гликана из гликопептида обработкой его N-гликаназой мол. масса уменьшилась до 36 кДа (Olives и соавт. [70]).
Электронная микроскопия эритроцитов, обработанных антителами IgG анти-Jkb, меченными ферритином, позволила установить, что эритроциты Jk(a-b+) несут около 14 тыс. антигенных участков Jkb на 1 клетку (Masouredis и соавт. [53]).
Maraiuzzu и соавт. [50] с помощью гидрофобных соединений ртути ингибировали транспорт мочевины и нашли, что количество участков, транспортирующих мочевину, т. е. участков, несущих антигены Jk, составляет около 32 тыс. на 1 эритроцит.
Olives и соавт. [72] исследовали кДНК эритробластов человека с помощью ПЦР с праймерами, сконструированными по аминокислотной последовательности кроличьего транспортера мочевины. Иммунопреципитацией антителами анти-Л<3 авторы выделили полипептид с мол. массой 36 кДа.
Методом иммуноблоттинга с кроличьими антителами был получен полипептид с мол. массой 46-60 кДа, который присутствовал в эритроцитах всех фенотипов Kidd, кроме Jk(a-b-) (Olives и соавт. [70]). Позднее было установлено, что ген HUT11 представляет собой аберрантный транскрипт или является артефактом клонирования (Sidoux- Walter и соавт. [93]). Другой ген - HUTU А, кодирующий ппотаминовую кислоту вместо лизина в положении 44 и 2 дипептида -валин и глицин - вместо 3 после позиции 227, производит гликопротеин Kidd и транспортер мочевины эритроцитов (Sidoux-Walter и соавт. [93], Irshaid и соавт. [37]). Продукт этого гена имеет мол. массу 43 кДа, содержит 389 аминокислот и на 63 % идентичен кроличьему транспортеру мочевины. Протеин содержит 10 трансмембранных доменов. Один из двух N-гликозилированных участков (Asn 211) расположен на третьем экстрацеллюлярном домене.
Ген Ж (SLC14A1) имеет величину 30 кб и состоит из 11 экзонов (Lucien и соавт. [48], Irshaid и соавт. [36]). Экзоны 1-3 и часть четвертого (табл. 11.1) представляют нетранслируемый У регион, экзоны 4-11 кодируют протеин.
Участок, инициирующий трансляцию, расположен на 335 пар выше стартового транслируемого кодона в экзоне 4. Область между нуклеотидами -837 и -336 содержит эритроидоспецифические участки транскрипции GATA-1 и SP1, а также ТАТА-бокс и инвертированный СААТ-бокс (Lucien и соавт. [48]).
Идентифицированы 2 эритроидных транскрипта величиной 4,4 и 2 кб. Последний (меньший из них) образуется за счет пропуска в считывании экзона 3 (Lucien и соавт [48]).Таблица 11.1
Организация гена JK
|
Экзон |
Количество пар оснований |
Позиция кодируемых аминокислот |
Размер интрона, кб |
|
|
* |
** |
|||
|
1 |
93 |
|
0,7 |
|
|
2 |
64 |
|
2,4 |
|
|
3 |
157 |
|
3,1 |
|
|
4 |
172 |
1-50 |
0,6 |
0,543 |
|
5 |
190 |
51-113 |
3,55 |
3,0 |
|
6 |
129 |
114-156 |
1,9 |
2,0 |
|
jjj 7 |
193 |
157-221 |
2,5 |
2,5 |
|
8 |
148 |
222-270 |
0,27 |
0,217 |
|
9 |
135 |
271-315 |
8,6 |
9,0 |
|
10 |
50 |
316-332 |
1,4 |
1,4 |
|
11 |
551 |
333-389 |
|
|
По Lucien и соавт. [48], **по Irshaid и соавт. [36].
