Напишите нам

Поиск по сайту

Антитела JMH

Лица JMH- были обнаружены исключительно благодаря присутствию в сы­воротках их крови анти-ХМН-антител. В анамнезе этих людей часто отсутство­вали указания на беременности и гемотрансфузии (Baldwin и соавт. [1], Moulds и соавт. [15]), что служит основанием относить эти антитела к естественным или аутоиммунным по происхождению.

Антитела JMH чаще представлены субклассом IgG4, описаны также анти- ^ тела субклассов IgGl и IgG2 (Baldwin и соавт. [1], Pope и соавт. [18], Tregellas и соавт. [23]), а также IgG3 (Geisland и соавт. [9]).

Имеются сообщения о переливании реципиентам, содержащим анти-JMH-антитела, несовместимых invitroэритроцитов JMH+. Трансфузии не сопровожда­лись трансфузионными реакциями (Sabo и соавт. [19], Whitsett и соавт. [24], Baldwin и соавт. [1], Tregellas и соавт. [23]). Одному из таких реципиентов в течение 10 мес. лечения перелили 20 доз эритроцитов JMH+ без реакций, при этом у него был до­стигнуто желаемое увеличение содержания гемоглобина (Tregellas и соавт. [23]).

Срок циркуляции эритроцитов JMH+ в кровяном русле больных, имев­ших анти-1МН-антитела, не был сокращен по сравнению с нормой (Sabo и со­авт. [19], Whitsett и соавт. [24], Tregellas и соавт. [23]). Некоторые анти-JMH-антитела проявляли себя invitroкак клинически значимые (Geisland и соавт. [9], Hadley и соавт. [10]).

Данные, позволяющие сделать заключение о возможном значении анти-JMH-антител в акушерстве, отсутствуют. В большинстве случаев женщи­ны, у которых выявляли эти антитела, были старше детородного возраста. Анамнестические сведения не были убедительными.

В одном случае женщина 26 лет, имевшая анти-ДМН-антитела, родила здоро­вую двойню, оба ребенка имели фенотип JMH-. Повторное обследование детей через 10 мес. показало, что один из них имел нормально выраженный антиген JMH, у другого он выявлялся слабо.

Моноклональные антитела, реагировавшие с гликопротеином CDwl08, од­новременно реагировали с антигеном JMH и квалифицировались как анти-JMH (Mudad и соавт. [16]).

Daniels и Knowles [7, 8] показали, что моноклональные aHra-CDwl08-антитела блокируют реакцию аллогенных анти-ЛУШ-антител, что свидетель­ствовало если не об идентичности, то об одинаковой специфической направлен­ности aHTH-CDwl08- и анти-ЛУШ-антител.

Локализация и строение антигенов JMH

Методом иммуноблоттинга и иммунопреципитации с аллогенными и моно-клональными антителами показано, что антигены JMH расположены на глико-протеине с мол. массой 76 кДа. Этот белок присутствует на эритроцитах JMH+, на эритроцитах JMH- он не найден (Bobolis и соавт. [3]). Гликопротеины, не­сущие антигены JMH, относятся к гликозилфосфатидилинозитол (ГФИ) связан­ным протеинам. Они отделяются от мембраны эритроцитов соответствующим ферментом - ГФИ-фосфолипазой С.

Гликопротеин JMH содержит 19 цистеиновых остатков и как полагают, име­ет дисульфидные связи. Доказательством этому может служить тот факт, что ан­тигены JMH разрушаются сульфгидрильными реагентами.

Yamada и соавт. [25], Lange и соавт. [14] определили структуру гликопроте-ина CDwl08 и выделили кодирующий его ген. Поскольку CDwl08 представля­ет собой белок Sema7A (H-Sema-L), относящийся к семафориновой группе гли-копротеинов (рис. 26.1), ген получил обозначение SEMA7A. Он представлен 13 экзонами (рис. 26.2). Продуктом гена является протеин, состоящий из 656 ами­нокислот (рис. 26.3). Он включает сигнальный пептид (46 аминокислот), мо­тив (19 аминокислот), связанный с ГФИ, большой домен (500 аминокислот) с 4 участками N-гликозилирования и иммуноглобулиноподобный домен С2 (70 аминокислот) с одним участком N-гликозилирования (см. рис. 26.1) (Yamada и соавт. [25], Lange и соавт. [14]).

Как показали Mudad и соавт. [16], гликопротеины JMH и CDwl08 являются одним и тем же белком и имеют одинаковою аминокислотную последователь­ность. Они отсутствуют на эритроцитах JMH-.

Описаны Л больных дизэритропоэтической анемией, эритроциты которых содержали слабый антиген JMH (Bobolis и соавт. [2]).

Секретируемые и мембранные семафорины выполняют функцию сигналь­ных белков (белков наведения), способствующих росту аксонов нервной клетки в нужном направлении {Вгоп и соавт. [5], Kolodkinи соавт. [13]), участвуют в межклеточных взаимодействиях (Tamagnone, Comoglio [21]).

Плексины - основные рецепторы семафоринов - участвуют в регуляции дея­тельности эндокринной, иммунной, сердечно-сосудистой, желудочно-кишечной и других важнейших систем организма (Yazdani, Terman [26]).

Гликопротеин CDwl08 экспрессирован преимущественно на активирован­ных лимфоцитах и содержит аминокислотную последовательность Arg-Gly-Asp (267-269), характерную для молекул клеточной адгезии. Большое количество РНК-транскриптов SEMA7Aвыявлено в плаценте, тестикулах, селезенке, низ­кое - в головном мозге и тимусе (Lange и соавт. [14], Yamada и соавт. [25]).

Утрата антигенов JMH (и обретение фенотипа JMH-) invivoможет быть об­условлена действием внутриклеточных протеаз (Bobolis, Telen [4]). Инкубация эритроцитов при 37 °С в течение 45 мин приводила к появлению в супернатанте серологически активного JMH-протеина с мол. массой 67 кДа. Отделение про­теина тормозилось ингибиторами протеаз. Высвобождение протеина JMH из изолированных мембран происходило только при добавлении цитоплазмы или нейтрофилов (Bobolis, Telen [4]).

Система JMH

Система JMH названа по имени человека, у которого впервые выявлены - John Milton Hagen. До 2006 г. система включала один антиген -JMH1, встречающийся у всех 100 % лиц во всех обследованных популяциях. В 2006 г. система пополнилась сразу 4 часто встречающимися антигенами -JMH2, 3, 4 и 5. Найдены JMH-нулевые фенотипы, являющиеся, как правило, приобретенными.

Антигены JMH связаны с протеином CDwl08, известным как семафорин.

Ген SEMA7A, кодирующий синтез CDwl08, картирован на хромосоме 15 в позиции 15q23-24.

Антигены JMH

Первое сообщение об обнаружении нового часто встречающегося антигена с помощью сыворотки JMH опубликовали в 1978 г. Sabo и соавт. [19]. Авторы вы­явили несколько образцов антител, причем последние обнаруживались преиму­щественно у пожилых мужчин и, по-видимому, были аутоиммунного происхо­ждения. Носители антител имели фенотип JMH-, который оказался приобре­тенным и нередко носил транзиторный характер.

Описаны 2 детей, у которых фенотип JMH- сменился на JMH+.

У некоторых носителей анти-ХМН-антител эритроциты содержали слабовы-раженный антиген JMH, который удавалось выявить с помощью антиглобули-новой пробы (Whitsett и соавт. [24]). В элюатах с сенсибилизированных эритро­цитов определялись анти-ЖН-антитела.

Описана семья, в которой в трех поколениях прослежена передача по на­следству аутосомного доминантного гена, обусловливающего фенотип JMH-(Kollmar и соавт. [12]). Ни у кого из JMH-отрицательных членов этой семьи не выявлено aHTH-JMH-антител, и их эритроциты давали отрицательные реакции в прямой антиглобулиновой пробе.

Обнаружено несколько образцов aHTH-JMH-антител, полученных от JMH-положительных лиц. Антитела проявляли выраженную гетерогенность и пе­рекрестную реактивность. Так, 4 сыворотки (RM, VG, GP и DW) давали пе­рекрестные реакции с эритроцитами носителей этих антител (Moulds и соавт. [15], Mudad и соавт. [17], Issitt и Anstee [11], Daniels и Knowles [7, 8]). Авторы шлагали, что у обладателей антител RM, VG, GP и DW содержались парциаль-тые антигены JMH и соответственно парциальные антиЛМН-антитела. Однако далее было установлено, что антитела, обозначавшиеся ранее как анти-JMH-подобные, не являются парциальными и имеют разную специфическую направ­ленность. Открываемые ими антигены получили обозначения JMHK, JMHL, JMHG и JMHM (табл. 26.1). Носителями антител к этим антигенам оказались лица, гомозиготные по точковым мутациям в различных участках гена SEMA7A(Daniels и соавт. [6], Seltsam и соавт. [20]).

Таблица 26.1 Антигены JMH

Обозначение

Частота, %

Замена

традиционное

ISBT

нуклеотидая

аминокислотная

JMH

JMH1

100

 

 

JMHK

JMH2

100

С619Т

Arg 207 Тгр

JMHL

JMH3

100

G620A

Arg 207 Gin

JMHG

JMH4

100

G1379 А

Arg 460 His

JMHM

JMH5

100

С 1381Т

Arg 461 Cys

Антигены JMH разрушаются папаином, трипсином, химотрипсином и дис-ульфидными редуцентами, но устойчивы к действию сиалидазы.

На эритроцитах новорожденных антигены JMH обычно экспрессированы слабо, их полное развитие происходит в первые годы жизни.

Онтогенез, распределение в тканях

На ранних гемопоэтических предшественниках антиген Ока выражен силь­нее, чем на зрелых эритроцитах. Экспрессия его снижается по мере созревания клеток (Bony и соавт. [2]).

Помимо эритроцитов, гликопротеин CD 147 представлен на лимфоцитах, гра-нудоцитах и других клетках организма, а также лейкемических клеточных ли-Ц$р&.человека (Spring и соавт. [14], Williams и соавт. [17], Mattes и соавт. [9], щсоавт. [7]).

CD 147 присутствует в разных количествах в веществе межклеточного про­странства.

Функции в организме

Гликопротеин CD 147 относится к семейству иммуноглобулинов, выполня­ющих роль рецепторов межклеточной адгезии. В эритроцитах он выполняет функцию транспортера монокарбоксилатов (лактатов и пируватов) к плазмати­ческой части мембраны (Halestrap и Price [6]).

У мышей блокада CD147 Р(аЬ')2-фрагментами моноклональных анти-С0147-антител препятствует выходу эритроцитов из селезенки в кровяное русло, что вызывает спленомегалию и анемию (Coste и соавт. [3]).

На лейкоцитах гликопротеин CD 147 активирует циклофилин А - белок, яв­ляющийся рецептором, через который внутрь клетки проникают вирусы СПИДа (HIV-1) (Pushkarsky и соавт. [12]).

На опухолевых клетках CD 147 инициирует продукцию коллагеназы и дру­гих экстрацеллюлярных металлопротеинов, способствующих метастазирова-нию опухоли (Biswas и соавт. [1]).

В здоровых тканях гликопротеин CD 147 усиливает регенерацию фибробла-стов, в травмированных - ускоряет заживление ран.

Часто встречающийся антиген RAPH, получивший обозначение MER2, впер­вые описали Daniels и соавт. [3] в 1987 г. Это был первый эритроцитарный ан­тиген, открытый с помощью моноклональных антител. Четыре образца поли-клональных сывороток анти-МЕ112 были найдены позднее (Daniels и соавт. [2]).

Статус системы RAPH получил в 1998 г., когда был картирован контролиру­ющий ее ген, находящийся на коротком плече хромосомы 11 в позиции lip 15.

Антиген MER2 (RAPH1)

Единственным антигеном системы RAPH является фактор MER2 (RAPH1), идентифицируемый антителами анти-МЕИ2. Частота этого антигена у европео­идов составляет 92 %, остальные 8 % людей его не содержат и являются MER2-(Daniels и соавт. [3])

Расчетная частота аллелей MER2+и MER2~0,72 и 0,28 соответственно. Обследование 103 семей показало, что указанные аллели передаются в соот­ветствии с законом наследования.

Титрование антигена MER2 в эритроцитах членов одной большой се­мьи (жителей о. Сардиния, Италия) анти-МЕ112-антителами показало, что ин-гибиторный ген In(Lu) (см. Lutheran) угнетает экспрессию антигена MER2. Выраженность агглютинации в каждом из разведений тестовых реагентов учи­тывали по 12-балльной шкале. Титр антигена составил от 0 до 15 (в среднем 6) у членов семьи, имеющих ген In(Lu), и 12-21 (в среднем 16) у членов семьи, ли­шенных указанного гена.

Антиген MER2 устойчив к действию папаина и сиалидазы, но разрушается трипсином, химотрипсином, проназой и сульфгидрильными реагентами.

Посредством иммунопреципитации специфическими антителами с после­дующим электрофорезом в геле выделен гликопротеин с мол. массой 40 кДа (Lucien и соавт. [4]).

Предпринимались попытки найти связь между антигеном MER2 и гликопро-теином CD44, который, так же как и MER2, контролируется геном, находящим­ся на хромосоме 11, и подвержен супрессии со стороны гена In(Lu). Уместно упомянуть, что CD44 несет антигены групповой системы Indian. Однако, как выяснилось, антиген MER2 не связан с гликопротеином CD44. Ahth-CD44-антитела одинаково реагировали с эритроцитами MER2+ и MER2-, а гены, дапролирующие системы Indian и RAPH, располагались в разных участках хромосомы 11. Полагали также, что антиген MER2 идентичен гликопротеину LYVE-1 (или HAR), гомологу CD44, контролируемому локусом 11р15. Однако последующие исследования показали, что MER2 и LYVE-1 отличаются распре­делением в тканях (Banerji и соавт. [1], Winkleman и соавт. [6]).

Анти-МЕК2-антитела

Daniels и соавт. [3] получили моноклональные анти-МЕ112-антитела серий ID 12 и 2F7 путем слияния спленоцитов мышей, иммунизированных клетками линии мелкоклеточной карциномы человека, с миеломными клетками. Скрининг антител проводили методом комплементзависимой цитотоксичности с использо­ванием гибридных клеток человек - хомяк, содержащих хромосому 11 человека. Эксперименты по блокированию генов этой хромосомы показали, что обе серии антител распознают эпитопы одного и того же антигена (Daniels и соавт. [3]).

В 1988 г. Daniels и соавт. [2] нашли 3 образца аллогенных анти-МЕ112-антител у евреев, выходцев из Южной Индии, проживающих в Израиле, 2 из которых оказались родственниками. У носителей антител была почечная не­достаточность, в связи с чем им проводили систематически гемодиализ и ге-мотрансфузии. Антитела во всех 3 образцах сывороток реагировали в непря­мой антиглобулиновой пробе. В 2 случаях антитела выявили до проведения ге­модиализа и гемотрансфузий. На протяжении многих лет больные получали трансфузии МЕ112-несовместимой крови, однако каких-либо реакций не было. Приживаемость перелитых эритроцитов invivoбыла нормальной.

При параллельном сравнительном исследовании эритроцитов 138 доноров с использованием поли- и моноклональных антител получены одинаковые ре­зультаты. Редкие исключения, когда поликлональные антитела давали поло­жительную реакцию, а моноклональные - отрицательную, были обусловлены присутствием примеси анти-В§а-антител (анти-НЬАВ7) во всех трех аллоген­ных сыворотках. Поликлональные антитела, инкубированные с эритроцитами MER2+, блокировали связывание моноклональных анти-МЕ112-антител. Это подтверждало ранее полученные данные о том, что поли- и моноклональные антитела реагируют с одними и теми же эпитопами.

Четвертый образец анти-МЕЯ2-антител нашли Verhoeven и соавт. [5] у доно­ра, женщины турецкого происхождения. Она имела 2 беременности, гемотранс­фузий не было.

Несмотря на относительно высокую вероятность аллоиммунизации лиц MER2- (92 % реципиентов MER2- получают кровь MER2+), известно все­го 4 случая обнаружения анти-МЕ112-антител. В 3 из них антитела присутство­вали у больных с хронической почечной недостаточностью, происходивших из одной небольшой этнической группы. На этом основании выказано предполо­жение, что у большинства лиц MER2- указанный антиген отсутствует только на эритроцитах, но имеется на других клетках. Это позволяет объяснить чрезвы­чайную редкость анти-МЕ112-антител. Возможно, у некоторых лиц, входящих в упомянутую этническую группу, имеются гены с делецией аллеля MER2, в свя­зи с чем в организме отсутствует соответствующий антиген. Возникло также суждение о возможной связи ХПН с системой RAPH. Однако какие-либо дан­ные, подтверждающие то или иное предположение, в литературе отсутствуют.

Антиген Ока

Антиген 0ка (OKI) - пока единственный из образующих эту систему. Он встречается практически у всех людей. Лица Ок(а-) обнаружены только среди японцев. Этот фактор расположен на иммуноглобулине CD 147. Ген BSG, коди­рующий вещество Ока, находится на хромосоме 19 (19pter-pl3.2). Редкий фено­тип Ок(а-) обусловлен аминокислотной заменой Glu 92 Lys.

Антитела анти-Ока обнаружены Morrel и Hamilton в 1979 г. [11] у жительни­цы небольшого японского острова. Женщина не имела беременностей, но, по данным авторов, перенесла трансфузию крови. Ее родители, оказавшиеся близ­кими родственниками, и 2 сибса были также Ок(а-). У ее сестры Ок(а-) было 5 детей, в том числе 2 Ок(а+), однако анти-Ока-антитела у нее не образовались. Других лиц с фенотпом Ок(а-) Morrel и Hamilton не обнаружили, обследовав с использованием указанной анти-Ока-сыворотки 1270 японцев (400 жителей это­го острова и 870 доноров других частей Японии), 3976 американцев азиатского происхождения, 1570 американских негров и 1378 мексиканцев.

По данным Spring и соавт. [14], известно 8 лиц с фенотипом Ок(а-) - все японцы.

Антиген Окане разрушается после обработки эритроцитов трипсином, химо-трипсином, папаином, проназой, сиалидазой, редуцентами дисульфидных свя­зей: АЕТ (2-аминоэтилизотиоурониумбромид).

Анти-Ока-антитела

Morrel и Hamilton [11] отметили, что аллоиммунные анти-Ока-антитела су­щественно укорачивали продолжительность жизни эритроцитов Ok(a+) invivo. Через 3 ч в кровотоке пробанда обнаруживалось лишь 10 % введенных клеток с радиоактивной меткой.

Второй случай обнаружения аллоиммунных анти-Ока-антител описали Yamaguchi и Okubo (цит. по Daniels [4]).

Williams и соавт. [17] нашли, что анти-Ока-специфичностью обладают моно-клональные антитела TRA-1-85, полученные путем культивирования спленоци-тов мышей, иммунизированных клетками тератокарциномы человека. Эти ан-ЗШеда относились к субклассу IgGl и были направлены к CD 147. Они реаги­ровали в непрямой антиглобулиновой пробе со всеми образцами эритроцитов,

за исключением эритроцитов Ок(а-). Антитела TRA-1-85 также реагировали с Лейкоцитами лиц Ок(а+), но не реагировали с лейкоцитами лиц Ок(а-) в ради­оиммунном методе.

Mattes и соавт. [9], Kasinrerk и соавт. [7, 8], Stokinger и соавт. [16] описали несколько других моноклональных антител к CD 147, однако ни одно из них не обладало анти-Ока-специфичностью.

Локализация и структура антигена Ока

Иммуноблоттинг субстрата, выделенного из мембран эритроцитов Ок(а+), с моноклональными мышиными анти-Ока- и аллогенными анти-Ока-антителами показал, что антигенные детерминанты Ока расположены на гликопротеине с мол. массой 35-68 кДа (Williams и соавт. [17]).

Spring и соавт. [14] использовали для очистки Ok-гликопротеина монокло-нальные антитела МА103, реагирующие с Ok-гликопротеином эритроцитов как Ок(а+), так и Ок(а-). При изучении выделенного гликопротеина оказалось, что его N-терминальный участок идентичен N-терминальному участку гликопроте­ина Мб (Kasinrerk и соавт. [7]). Этот гликопротеин известен как EMMPRIN (ин­дуктор матричной металлопротеиназы у человека), базигин (у мышей), ОХ-47 (у крыс), нейротелин (у кур). Общее его обозначение - кластер дифференци-ровки CD147 (Starrier, Stockinger [15]).

Miyauchi и соавт. [10] выделили ген CD147 из клеток костного мозга челове­ка, Kasinrerk и соавт. [7] - из Т- и В-лимфоцитов.

Клетки мышиной клеточной линии NS-0, трансфецированные геном CD147 лиц Ок(а+), экспрессировали антиген Ока. После трансфекции указанных кле­ток геном CD147 лиц Ок(а-) экспрессию антигена Ок(а+) не наблюдали (Spring и соавт. [14]).

Генный локус CD 147 включает 8 экзонов величиной 10,8 кб

Строение гена OK (EMPRIN) по Reid и Lomas-Francis

Строение гена OK (EMPRIN) по Reid и Lomas-Francis

Экстрацеллюлярная часть CD 147 организована в виде двух IgSF-доменов. Один из них (С) - константный, другой (V) - вариабельный. С константным до­меном связан один N-гликан, с вариабельным - два N-гликана (см. рис. 24.2). На долю указанных гликанов приходится около 50 % мол. массы гликопротеина CD 147 (Biswas и соавт. [1], Kasinrerk и соавт. [7]).

Поскольку лица Ок(а-) являются гомозиготными по мутации G 274 А, впол­не возможно существование антитетичного антигена Окь, и, как полагают перво­открыватели, обнаружение анти-Окь-антител в Японии не явится неожиданным.




Тесты для врачей

Наши партнеры