Гликопротеин Fy и ген Fy

Moore и соавт. [115], используя методы иммунопреципитации, установи­ли, что антиген Fy^a присутствует на 3 протеинах, имеющих мол. массу 39, 64 и 85 кДа. Иммуноблоттинг с антителами анти-Fy* позволил выявить структу­ры с мол. массой 35 - 43 (Hadley и соавт. [60]) и 40-50 кДа (Tanner и соавт. [156]). Субстрат, выделенный электроэлюцией из протеинов 35-43 кДа, ингиби-ровал антитела анти-Fy³ [60]. Аналогичные результаты получили Nichols и со­авт. [124], Riwom и соавт. [140], использовавшие иммуноблоттинг с монокло-нальными антителами анти-Руб.

Обработка эритроцитов эндо-Р-гликаназой, N-гликаназой и сиалидазой сни­жала мол. массу выделяемых с помощью иммуноблоттинга Fy-гликопротеинов до 4 кДа (Hadley и соавт. [60], Tanner и соавт. [156]).

Riwom и соавт. [140] и Wasniowska и соавт. [172] выделили низкомолеку­лярные фракции из очищенных Fy-гликопротеинов и третичных структур, по­лученных из них. Указанные исследования свидетельствовали о том, что Fy-гликопротеины N-гликозилированны и слабо О-гликозилированы. Разная сте­пень N-гликозилирования, вероятно, и обусловливает колебания мол. массы Fy-гликопротеинов в широком диапазоне (Chaudhuri и соавт. [30]).

Chaudhury и соавт. [30] посредством иммунопреципитации моноклональны-ми антителами анти-Руб выделили Fy-гликопротеин с мол. массой 36-43 кДа вместе с олигомерами большей мол. массы, последние также реагировали с ука­занными антителами. Другие из сопутствующих протеинов не реагировали в реакции иммунного окрашивания с антителами анти-Руб. Картирование пепти­дов, выделенных из эритроцитов Fy(a+b-) и Fy(a-b+), существенных различий не выявило (рис. 10.2).

Chaudhury и соавт. [28], изучив последовательность аминокислот в очи­щенных Duffy-гликопротеинах, сконструировали олигонуклеотидные прай-меры и с помощью ПЦР изменили кодирующий участок ДНК, полученной от лиц Fy(a-b+). Затем этот продукт был использован для выделения кодирующей ДНК из библиотеки ДНК костномозговых клеток человека. В результате иссле­дования получен пептид из 338 аминокислот с мол. массой 35,7 кДа (рис. 10.3).

Neote и соавт. [123] установили, что Fy-гликопротеин структуриро­ван в виде а-спиралей, 7 раз пересекающих мембрану эритроцитов, имеет экстрацеллюлярный N- и цитоплазматический С-домены (см. рис. 10.1). Такое строение свойственно хемокиновым рецепторам (Л и соавт. [81], Murdoch, Finn [120]). Экстрацеллюлярный домен, состоящий из 65 аминокислот, име­ет 3 участка N-гликозилирования - позиции 16, 27 и 33. Антитела анти-Руб реагировали с синтетическим пептидом, представляющим собой фрагмент N-терминального домена Fy-гликопротеина.

Первая из полученных образцов Duffy кДНК была представлена одним эк-зоном (Chaudhuri и соавт. [29], Iwamoto и соавт. [79], Tournamille и соавт. [160]).

Позднее Iwamoto и соавт. [77] показали, что в неэритроидных тканях пре­обладают транскрипты, состоящие из двух экзонов, разделенных 479 пара­ми кодонов. Первый экзон кодирует семь N-терминальных аминокислот Fy-гликопротеина, включая инициирующий трансляцию метиониновый кодон. Терминальный участок молекул Fy-гликопротеина представлен последователь­ностью MGNCLHRAEL (Iwamoto и соавт. [77]).

В регионе 5^! гена FY нет ТАГА- и СААТ-боксов, однако имеется несколько участков SP1 и GATA, препятствующих транскрипции (Iwamoto и соавт. [79], Tournamille и соавт. [160]).

Добавить комментарий