Напишите нам

Поиск по сайту

Трансформация К- в К+, К+ в К~

McGinniss и соавт. [278] описали пациента, эритроциты которого К-к+ вследствие сепсиса приобрели K-подобный антиген и стали определяться как К+к+. Перелитые ему эритроциты К- также становились К+. Сепсис был вы­зван грамположительными бактериями Streptococcus faecium. Авторы обнару­жили^ что эритроциты К-, инкубированные in vitro с лизатом Streptococcus fae­cium, преобразовывались в К+. Трансформация не происходила, если использо­вали взвесь неповрежденных бактерий.

При аутоиммунной гемолитической анемии, вызванной анти-К-аутоанти-телами, последние блокируют К-антигенные участки на эритроцитах, делая их недоступными для тестовых реактивов. Одновременно с продукцией аутоантител снижается экспрессия антигена К на поверхности клеток. Оба фактора в совокуп­ности приводят к тому, что пациента К+ типируют как К-. В период ремиссии, когда аутоантитела исчезают и экспрессия антигена К восстанавливается, пациен­та вновь типируют как К+ (см. Аутоантитела к антигенам Kell).

Химические свойства

Kell-гликопротеин хотя и является трансмембранной структурой, большая часть его в противоположность антигенам резус представляет внемембранное образование, далеко выступающее над поверхностью эритроцита. Считается, что он состоит из двух протяженных разветвленных цепей, соединенных меж­ду собой дисульфидными мостиками. Экстрацеллюлярная часть Kell-протеина ковалентно присоединена к Кх-протеину мембраны эритроцитов также дисуль-фидной связью [322, 341].

Kell-гликопротеин имеет 15 цистеиновых остатков в экстрацеллюлярном до­мене (см. рис. 5.1), и дисульфидные связи между цистеиновыми остатками уси­ливают несущий каркас полипептида. Разрушение дисульфидных связей суль-фгидрильными реагентами приводит к инактивации всех 24 Kell- и napa-Kell-антигенов, в частности антигены Kell разрушаются 6 % АЕТ (2-аминоэтилизо-тиоурониумбромидом) при рН 8 [109, 263, 289,341], 100-2000 мМ ДТТ (дитио-трейтолом) [109]; меркаптоэтанол менее эффективен.

Обработка эритроцитов глицин-НС1-ЭДТА разрушает антигены Kell и Kell-антитела IgG (см. Judd [216]).

Антигены Jsa и Jsb инактивируются при существенно более низкой концентрации дитиотрейтола - 2 мМ (Branch и соавт. [109]), поскольку, как полагают Lee и соавт. [240], 2 цистеиновых остатка, разделяемых ДТТ, расположены непосредственно в участке аминокислотных замен, обусловливающих специфичность Jsa и Jsb

Отщепляя гликопротеин Kell от экзофациальной части мембраны эритроци­тов, сульфгидрильные реагенты существенно увеличивают выраженность анти­гена Кх на поверхности эритроцитов, что может быть использовано для моде­лирования фенотипа Ко.

Подобно натуральным Ко*эритроцитам искусственные Ко-клетки, полу­ченные после обработки АЕТ, имеют выраженную экспрессию Кх-антигена (Advani [85], Branch и соавт. [111]). Искусственные К -эритроциты применяют для дифференцировки антител анти-Kell и анти-Кх. Для скрининга антиэритро-цитарных антител, включая анти-Kell, их не используют, так как АЕТ разруша­ет антигены системы Lutheran, Cartwright, Dombrock, LW (Landsteiner - Wiener), Knops, JMH (Jhon Milton Hagen) и другие.

Обработка эритроцитов протеолитическими ферментами по-разному сказы­вается на серологической активности антигенов Kell.

В| Ферменты растительного (папаин, фицин, бромелин) и животного происхождения (трипсин) не только не уменьшают выраженность антигенов Kell, но, напротив, существенно ее усиливают (Branch и соавт. [Ill], Schenkel-Brunner [341], СИ. Донсков и др. [26]).                                                                                     ^ ^

По нашим наблюдениям [26], обработанные 0,5-1 % раствором фицина эри­троциты К1+ непосредственно агглютинировались в солевой среде поликло-нальными сыворотками, содержащими неполные IgG анти-К 1-антитела, подоб­но тому, как энзимированные эритроциты Rh+ агглютинируются под действием неполных Rh-антител. В контрольных тестах (без обработки ферментом) непол­ные анти-К 1-антитела не агглютинировали эритроциты К1 +.

Обработка эритроцитов трипсином в меньшей степени усиливала реакцию Kell-антител по сравнению с обработкой эритроцитов папаином.

Daniels [59], Judson и Anstee [218] отметили, что сочетанное воздействие на эритроциты смеси трипсина и а-химотрипсина или последовательная обработка эритроцитов одним ферментом, а потом другим (порядок не имеет значения) де­лает клетки нереактивными к антителам системы Kell. К такому же инактивиру-ющему Kell-антигены эффекту приводит сочетанная обработка эритроцитов ди-тиотрейтолом и папаином, активированным цистеином (реагент ZZAP) [ПО, 341].

Обработка эритроцитов только одним химотрипсином или только одной прона-зой давала различные результаты [142]. Осталось неясным, связаны ж вариации усиления или ослабления активности Kell-антигенов со свойствами использован­ных антител или со способом и интенсивностью энзимирования эритроцитов.

Parsons и соавт. [303] отметили, что некоторые моноклональные реагенты к антигенам системы Kell продолжали реагировать с энзимированными эритро­цитами, утратившими способность реагировать с человеческими поликлональ-ными антителами. Не исключено, что отдельные МКА анти-Kell могут одновре­менно проявлять слабую анти-Кх-активность.

Подобно большинству других мембранных белков Kell-протеин гликозили-руется. Как показали Redman и соавт. [321], дегликозилирование с помощью N-гликозидазы уменьшает его мол. массу до 79-80 кДа. О-гликаназа дает сла­бый эффект. Эти результаты свидетельствуют о том, что углеводная составляю­щая Kell-гликопротеина представлена N-гликанами.

 

Добавить комментарий




Тесты для врачей

Наши партнеры