Напишите нам

Поиск по сайту

Задолго до выделения гликопротеина Kidd, картирования и клонирования гена Ж было известно, что эритроциты, лишенные антигенов Kidd [Jk(a-b-)], не лизируются в 2М растворе мочевины, а эритроциты, содержащие антигены Kidd, лизируются указанным раствором. Уже тогда возникло предположение, что антигены Kidd участвуют в транспорте мочевины.

Используя нейлоновые мембраны с фиксированными к ним аффинно-очищенными IgG-антителами анти-Лса, анти-Лсь и анти-ЛсЗ, Sinor и соавт. [96] выделили из оболочки эритроцитов субстрат с мол. массой 45 кДа, несущий Jk-антигенную активность. Иммунопреципитат, выделенный с помощью анти­тел анти-ЛсЗ из эритроцитов всех фенотипов Kidd, за исключением Jk(a-b-), представлял собой гликопротеин с мол. массой 46-60 кДа. После удаления N-гликана из гликопептида обработкой его N-гликаназой мол. масса уменьши­лась до 36 кДа (Olives и соавт. [70]).

Электронная микроскопия эритроцитов, обработанных антителами IgG анти-Jkb, меченными ферритином, позволила установить, что эритроциты Jk(a-b+) не­сут около 14 тыс. антигенных участков Jkb на 1 клетку (Masouredis и соавт. [53]).

Maraiuzzu и соавт. [50] с помощью гидрофобных соединений ртути ингибировали транспорт мочевины и нашли, что количество участков, транспортирующих мочеви­ну, т. е. участков, несущих антигены Jk, составляет около 32 тыс. на 1 эритроцит.

Olives и соавт. [72] исследовали кДНК эритробластов человека с помощью ПЦР с праймерами, сконструированными по аминокислотной последователь­ности кроличьего транспортера мочевины. Иммунопреципитацией антителами анти-Л<3 авторы выделили полипептид с мол. массой 36 кДа.

Методом иммуноблоттинга с кроличьими антителами был получен полипеп­тид с мол. массой 46-60 кДа, который присутствовал в эритроцитах всех фено­типов Kidd, кроме Jk(a-b-) (Olives и соавт. [70]). Позднее было установлено, что ген HUT11 представляет собой аберрантный транскрипт или является арте­фактом клонирования (Sidoux- Walter и соавт. [93]). Другой ген - HUTU А, коди­рующий ппотаминовую кислоту вместо лизина в положении 44 и 2 дипептида -валин и глицин - вместо 3 после позиции 227, производит гликопротеин Kidd и транспортер мочевины эритроцитов (Sidoux-Walter и соавт. [93], Irshaid и соавт. [37]). Продукт этого гена имеет мол. массу 43 кДа, содержит 389 аминокислот и на 63 % идентичен кроличьему транспортеру мочевины. Протеин содержит 10 трансмембранных доменов. Один из двух N-гликозилированных участков (Asn 211) расположен на третьем экстрацеллюлярном домене.

Ген Ж (SLC14A1) имеет величину 30 кб и состоит из 11 экзонов (Lucien и соавт. [48], Irshaid и соавт. [36]). Экзоны 1-3 и часть четвертого (табл. 11.1) представляют нетранслируемый У регион, экзоны 4-11 кодируют протеин.

Участок, инициирующий трансляцию, расположен на 335 пар выше стартового транслируемого кодона в экзоне 4. Область между нуклеотидами -837 и -336 содержит эритроидоспецифические участки транскрипции GATA-1 и SP1, а также ТАТА-бокс и инвертированный СААТ-бокс (Lucien и соавт. [48]).
Идентифицированы 2 эритроидных транскрипта величиной 4,4 и 2 кб. Последний (меньший из них) образуется за счет пропуска в считывании экзона 3 (Lucien и соавт [48]).Таблица 11.1

Организация гена JK

Экзон

Количество пар оснований

Позиция кодируемых аминокислот

Размер интрона, кб

*

**

1

93

 

0,7

 

2

64

 

2,4

 

3

157

 

3,1

 

4

172

1-50

0,6

0,543

5

190

51-113

3,55

3,0

6

129

114-156

1,9

2,0

jjj 7

193

157-221

2,5

2,5

8

148

222-270

0,27

0,217

9

135

271-315

8,6

9,0

10

50

316-332

1,4

1,4

11

551

333-389

 

 

По Lucien и соавт. [48], **по Irshaid и соавт. [36].

 

Старые материалы

Добавить комментарий




Тесты для врачей

Наши партнеры