Методы определения

Эритроциты, сенсибилизированные in vitro протеином С4, непосредствен­но агглютинируются антителами анти-Ch и анти-Rg. Нативные эритроциты ре­агируют с указанными антителами только в непрямой антиглобулиновой пробе (Tilley и соавт. [92]). Эта особенность связана с низким уровнем адсорбции эри­троцитами протеина С4 in vivo (Atkinson и соавт. [2]).

Сенсибилизацию эритроцитов комплементом in vitro проводят посредством их инкубации со свежей нативной сывороткой в 10% сахарозе. При этом клетки могут быть сенсибилизированы как собственным комплементом, так и привне­сенным с плазмой другого АВО-совместимого лица (Giles [26], Tilley и соавт. [92]). Этот методический прием используют при определении группы Ch/Rg, а также при стандартизации антиглобулиновых реагентов (для выявления анти­комплементарных анти-С4-антител, которые считаются нежелательными при выполнении непрямой антиглобулиновой пробы).

Антигены Ch/Rg на нативных эритроцитах, не сенсибилизированных ком­плементом в 10% сахарозе, разрушаются трипсином, химотрипсином, папаином, фицином и проназой (Atkins [1], Longster, Giles [47], Middleton, Grookston [54], Nordhagen и соавт. [61], Tilley и соавт. [92]). Путем подсчета молекул C4d, связан­ных с эритроцитами, было показано, что их количество уменьшается в 2 раза по­сле обработки трипсином (Giles и соавт. [29]). Антигены Ch/Rg устойчивы к дей­ствию сульфгидрила и сиалидазы, однако эритроциты, обработанные сиалидазой, утрачивают способность адсорбировать комплемент в растворе сахарозы (Wilfert и соавт. [97]). На этом основании полагают, что связывание компонента С4 с эритроцитами отчасти зависит от сиаловых кислот. В эритроцитах лиц, имеющих редкие группы крови Еп(а-) и М^к по системе MN, содержание сиаловой кислоты низкое, и антигены Ch/Rg на них также слабо выражены (Tippett и соавт. [93]).

Отмечена низкая экспрессия указанных детерминант на эритроцитах пупо­винной крови, однако сыворотки крови новорожденных ингибировали антите­ла анти-Ch и анти-Rg так же активно, как и плазма взрослых людей (Atkins [1], Middleton, Crookston [54], Nordhagen и соавт. [61].

Существуют 4 основных серологических метода для определения фенотипа Ch/Rg (Daniels [15]).

• прямая агглютинация исследуемых эритроцитов реагентами анти-Ch и анти-Rg;
• нейтрализация активности стандартных реагентов анти-Ch и анти-Rg плазмой обследуемого лица с последующим учетом результатов по пас­сивной агглютинации стандартных эритроцитов;
• агглютинация эритроцитов, сенсибилизированных собственным ком­плементом;
• агглютинация аллогенных эритроцитов, сенсибилизированных компле­ментом обследуемого индивида.

Антигены Chi, Ch2 и Ch3 выявляют используя нативные эритроциты, без предварительной сенсибилизации комплементом (Atkins [1]).

Предложено несколько методов определения аллотипов С4: иммунофик-сация десиалилированной плазмы, электрофорез в полиакриламидном геле (SDS-PAGE), иммуноблоттинг с антителами анти-С4, анти-Ch и анти-Rg (Giles, Robson [35],

Добавить комментарий