Напишите нам

Поиск по сайту

Изомеры гликопротеина удалось выделить из мембраны эритроцитов по­средством иммунопреципитации моноклональными антителами анти-Ьиь, а также анти-ЬиЗ, -Lu4, -Lu6, -Lu8, -Lul2, -Aua, -Aub (Daniels и соавт. [33, 38], Parsons и соавт.[106]). Указанные компоненты отсутствовали в цитоскелете эри­троцитов LunuU.

Отмечено некоторое снижение мол. массы гликопротеинов после обработ­ки сиалидазой (Daniels и соавт. [38]). Гликопротеины разрушались сульфидре-дуцентами, что указывало на наличие в их структуре дисульфидных связей. Обработка мембран эритроцитов эндогликозилазой-F приводила к появлению 2 компонентов с мол. массой 73 и 66 кДа, что было связано с утратой части jV-связанных олигосахаридных цепей (Parsons и соавт. [106]).

Parsons и соавт. [105], изучив аминокислотную последовательность полипеп­тида LU, создали олигонуклеотидные праймеры и с помощью ПЦР выделили клон ДНК (2417 пн) из библиотеки ДНК плаценты человека. Кодируемый про­теин с мол. массой 85 кДа состоял из 597 аминокислот; 518 из них составляли экстрацеллюлярные домены, 19 - трансмембранный домен, 59 - цитоплазмати­ческий. Цитоплазматический участок протеина непосредственно связан с цито-скелетом (Gane и соавт. [55]).

Изомер с мол. массой 78 кДа лишен части цитоплазматического домена (Parsons и соавт. [105]). Позднее было показано, что антиген эпителиального рака (В-САМ) также представляет собой изоформу гликопептида с мол. массой 78 кДа (Campbell и соавт. [18], Rahuel и соавт. [115]).

Гликопротеины LU отсутствуют на лейкоцитах, но в то же время имеются на многих других клетках в виде нескольких повторяющихся экстрацеллюляр-ных доменов, имеющих высокую гомологию с иммуноглобулинами. Подобно последним они имеют вариабельные (V) и константные (С1 и С2) домены.

Каждый из доменов состоит приблизительно из 100 аминокислот и структури­рован в виде двух р-цепей, связанных между собой дисульфидными мостиками. Считается, что эти гликопротеины выполняют функцию молекул межклеточной адгезии и участвуют в передаче межклеточных сигналов (Barclay и соавт.[7], Williams, Barclay [147]). Экстрацеллюлярный домен гликопротеинов LU состо­ит из двух вариабельных и трех константных доменов (см. рис. 8.1). Имеется 5 потенциальных участков JV-гликозилирования: один - в домене 3, остальные - в домене 4. Рядом с веществом LU на мембране эритроцитов присутствуют дру­гие гликопротеины, также являющиеся рецепторами межклеточной адгезии: LW, CD147 (групповая система Ok), CD47 и CD58 (LFA-3).

Parsons и соавт. [104] сконструировали кДНК с делениями, при которых глико­протеин LU синтезировался без одного, двух, трех или четырех доменов. Образцы таких дефицитных гликопротеинов авторы исследовали в проточной цитофлюо-рометрии с антителами анти-LU разной специфичности, что позволило устано­вить локализацию антигенных эпитопов на том или ином домене (см. рис. 8.1).

Таблица 8.2

Организация гена LU

Экзон

Кодируемый домен

Число кодонов

Размер интрона, кб

1

5'UT + лидер-пептид

105

2,0

2

1IgSF(V)

122

0,7

3

1 IgSF(V)

229

0,09

4

2IgSF(V)

71

0,5

5

2IgSF(V)

95

0,09

6

2IgSF(V)

185

0,53

7

3 IgSF(C2)

137

0,31

8

3IgSF(C2)

157

3,5

9

4 IgSF(C2)

116

0,1

10

4 IgSF(C2)

142

0,17

11

5 IgSF(C2)

137

0,15

12

5 IgSF(C2)

145

0,09

13

Трансмембранный и 19 позиций цитоплазматического

145

0,97

14

Цитоплазматический

118

0,09

15

Один аминокислотный остаток в цитоплазматическом (для изоформы 85 кДа)

498

 

Ген LU состоит из 15 экзонов размером 12,5 кб (см. рис. 8.1, табл. 8.2). Экзон 1 кодирует сигнальный пептид, экзоны 2-12 кодируют 5 доменов; вариабельный ^Н^Е кодируется экзонами 4, 5 и 6. Экзон 13 кодирует трансмембранный домен.


обеих изоформ гликопротеина LU; экзоны 14 и 15 - терминальный участок, со­стоящий из 40 аминокислот (см. табл. 8.2). Терминальный участок присутствует только в изоформе с мол. массой 85 кДа (El Nemer и соавт. [51], Parsons и соавт. [104]). Выделены два транскрипта гена LU. Один из них, величиной 2,5 кб, коди­ровал гликопротеин с мол. массой 85 кДа, другой гликопротеин, величиной 4,0 кб, кодировал гликопротеин 78 кДа (Rahuel и соавт. [115]). Транскрипты отличались альтернативным сплайсингом интрона 13. В транскрипте 2,5 кб интрон 13 отсут­ствовал, экзоны 14 и 15 кодировали С-терминальный участок из 40 аминокислот.

 

Старые материалы

Добавить комментарий




Тесты для врачей

Наши партнеры