Redman и соавт. [320, 325] с помощью иммунопреципитации выделили из мембраны меченных радиоактивным йодом эритроцитов гликопротеины с мол. массой 93 кДа. Для этого авторы адсорбировали на эритроцитах антитела анти-К, анти-к, aHTH-Jsb и анти-К22, после чего оболочку эритроцитов растворяли тритоном Х-100. Далее белковый субстрат и адсорбированные на нем антитела разделяли. Выделенные гликопротеины оказались гликопротеинами Kell, поскольку содержали Kell-антигены. Аналогичные гликопротеины выделили Wallas и соавт. [389], добавляя анти-К-антитела к растворенным тритоном Х-100 мембранам эритроцитов К+.
При электрофорезе редуцированного (сульфгидрированного) иммунопреципи-тата в полиакриламидном геле (ПААГ) Redman и соавт. наблюдали полосу, меченную радиоактивным йодом, образованную субстратом с мол. массой 93 кДа. При электрофорезе в ПААГ нередуцированного иммунопреципитата авторы получили несколько полос, образованных субстратами с мол. массой 85-90 кДа, 115-130 кДа и еще более высокомолекулярным субстратом, который не проникал в 7,5 % ПААГ. Вырезав каждую из этих полос и повторно подвергнув электрофорезу субстрат в редуцирующих условиях, авторы показали, что каждая полоса содержала компонент 93 кДа. Результаты эксперимента указывали на то, что белок Kell связан дис-ульфидными связями с другим белком, имеющим мол. массу около 40 кДа. Когда Redman и соавт. [326] установили, что белок Кх имеет мол. массу 37 кДа, было высказано мнение, что Кх ковалентно связан с бежом Kell, и это вскоре было подтверждено исследованиями Parsons и соавт. [303], Jaber и соавт. [210], Khamlichi [224], которые испожзоваж для иммунопреципитации наряду с пожклональными человеческими антителами моноклонажные мышиные Kell-антитела.
Kell-гликопротеины отсутствовали в иммунопреципитатах из эритроцитов К при использовании различных пож- и моноклональных Kell-антител, в том числе антител, полученных иммунизацией мышей и кроликов очищенным Kell-гжкопротеином [211,320].
Kell-антитела слабо реагировали с изолированным Kell-гликопротеином в иммуноблоттинге, хотя мышиные и кроличьи моноклональные антитела, полученные иммунизацией животных Kell-гликопротеином, выявляж гликопротеин с мол. массой 93 кДа [211,310].
Далее было показано, что все Kell-антигены, за исключением К24, располагаются на Kell-гликопротеине [210,213,215,269,307, 310].
Другой из выделенных гликопротеинов был охарактеризован как Кх-протеин. Последний тесно связан в мембране с Kell-гликопротеином и преципитируется вместе с ним в виде гетерожмера [224]. Оба белка соединены дисульфидными связями через цистеин 72, расположенный на Kell-гликопротеине и ожовременно занимающий позицию 347 на Кх-протеине [111,333] (см. рис. 5.1). вМагеп и Redman [268], Redman и соавт. [323] предположили, что Kell-антигены размещаются на гликопротеине с N-гликанами, поскольку обработка Kell-гликопротеина N-гликаназой редуцировала Kell-гликопротеин до 79 кДа, отщепляя от него цепь с мол. массой около 15 кДа. В то же время О-гликаназа практически не редуцировала Kell-гликопротеин.
В иммуноблотгинге К-активный гликопротеин мигрировал быстрее, чем k-активные гликопротеиновые молекулы. Считается, что первый субстрат менее гликозилирован, чем второй. Этим различием в гликозилировании объясняют более сильную иммуногенность К по сравнению с другими антигенами системы Kell [141].
Carbonnet и соавт. [120, 121] отметили, что Kell-гликопротеины фосфорили-руются, но не пальмитируются. Примерно 12 % массы Kell-гликопротеина составляют углеводы - N-связанные олигосахариды, размещающиеся на экстра-целлюлярной части гликопротеина [210]. О-связанные олигосахариды практически отсутствуют. Остальная часть Kell-гликопротеина представлена белком.