Смешивание и разведение сывороток в практике серологических лабораторий применяют очень широко. Это делают с целью утилизировать сыворотки с относительно низким титром антител, повысить их активность и специфичность, увеличить объем серии. Кроме того, упрощается контроль серий стандартных сывороток, полученных из нескольких небольших порций исходного сырья.
В отношении смешивания изогемагглютинирующих сывороток мнения авторов расходятся. Так, В.Н. Краинская-Игнатова [72], Б.А. Вартапетов [23], Т.Г. Соловьева [102] считали, что при смешивании нескольких образцов сывороток конечный титр изогемагглютининов выше среднеарифметического. По данным P.M. Уринсон [118], титр смесей не повышается и равен среднеарифметическому.
В противоположность этому И. Мишенин и Г. Иванихенко [81] привели данные о том, что титр смесей снижается и быстро падает в процессе их хранения.
А.А. Тарасевич [107] на основании своих исследований пришла к выводу, что при смешивании изогемагглютинирующих сывороток титр смеси может соответствовать среднеарифметическому, быть выше или ниже его.
Большинство авторов сходятся во мнении о необходимости смешивания сывороток антирезус и их разведения (Л.В. Буренкова [22], P.M. Уринсон [119], А.Я. Ашкенази [10], Т.М. Сафронова [94], Ф.А. Траулько [109]).
С одной стороны, это позволяет повысить их активность и титр по сравнению с исходным, с другой - увеличить количество стандартной сыворотки (А.Я. Ашкенази [9]). Однако в этом есть свои особенности.
Многочисленные исследователи, применявшие для разведения сывороток антирезус плазму и сыворотку AB(IV), отмечают, что разные образцы плазмы и сывороток AB(IV) неодинаково активируют одну и ту же антирезусную сыворотку. Так, Spielmann [625] при титровании резус-антител в нескольких образцах изогемагглютинирующих сывороток получил разницу в титре на 4 ступени.
А.Я. Ашкенази [9,10] отметила, что титры резус-антител при разведении сыворотки антирезус разными сериями сывороток АВ могут колебаться от 1 : 4 до 1 : 1024.
Аналогичные результаты были получены также О.В. Успенской [123] и Т.Г. Соловьевой [104].
Таким образом, конглютинационные свойства сывороток-разводителей, чаще группы AB(IV), сильно колеблются.
Spielmann [625] связывает это с различной концентрацией белка в сыворотках. Особенно низкий титр автор получил при разведении сыворотки антирезус сывороткой больной, страдающей гипопротеинемией.
Однако вряд ли можно объяснить разницу в титре на 4-8 ступеней только разной концентрацией белка в сыворотках-разводителях. По-видимому, в этих случаях имеют место какие-то более тонкие механизмы, воздействующие на реакцию антиген - антитело, возможно, эндогенные ингибиторы антител.
Другая коллоидная среда - декстран - обладает более стабильными конглютинационными свойствами (ПЛ. Забалуева [54], Ф.А. Траулько [109], А.Я. Ашкенази [11], О.В. Успенская [123], А.Е. Скудицкий [1011]), поэтому его применяют вплоть до настоящего времени очень широко. Конглютинационная активность декстрана значительно выше, чем сывороток AB(IV), что позволило использовать декстран для получения большого количества тестовых сывороток антирезус их разведением (Ф.А. Траулько [109], О.В. Успенская [123], СИ. Донсков [36]).
Большим достижением в прикладной иммуносерологии явились исследования Eldon [273], который установил, что сыворотки антирезус, разведенные высокомолекулярным декстраном, могут быть использованы для определения резус-фактора на плоскости при комнатной температуре. До работ Eldon имму-носерологи полагали, что резус-антитела, будучи иммунными, имеют температурный оптимум реагирования 37 °С и по определению не могут реагировать при комнатной температуре, 20-22 °С
Дальнейшие исследования, проведенные в этом направлении Hrubicko, Hrabinska [354], СИ. Донсковым [36], показали, что определять резус-фактор и его разновидности можно при комнатной температуре, если в сыворотки антирезус добавить концентрированный раствор альбумина или полиглюкина.
Аналогичные результаты были получены Daszynski [250] и А.Я. Ашкенази [И] при использовании сывороток в комбинации с гепарином. Однако, как отмечает Daszynski, метод определения резус-фактора гепаринизированными сыворотками не достаточно чувствителен.
Таким образом, было положено начало способам приготовления тестовых сывороток, пригодных для определения резус-фактора на плоскости при комнатной температуре, и появилась перспектива разработки методов, которые позволяли объединить определение группы крови и резус-фактора в один процесс [36].