Целью молекулярно-биологических исследований было ответить на вопрос: находятся ли антигенные детерминанты D, С/с и Е/е на разных белковых структурах или же они присутствуют на одном и том же полипептиде? Другой целью этих исследований было установить молекулярную структуру вариантов Rh-антигенов и кодирующих их генов.
Эксперименты с использованием трансфекции фрагментов ДНК [196, 496, 618] показали, что детерминанты С/с и Е/е расположены на одном полипептидном продукте, a D - на другом. Дополнительные доказательства того, что антигены Сс и Ее могут находиться на одном и том же полипептиде, получены Avent и соавт. [145] в исследованиях с сыворотками анти-С, анти-с, анти-Е и анти-е, которые, как выяснилось, реагируют с разными участками одного и того же полипептида Rh.
Антигенные детерминанты Rh кодируются двумя похожими по структуре генами (Colin и соавт. [233], Агсе и соавт. [138]). Один из них (RHD) определяет наличие трансмембранного белка, придающего эритроцитам D-актив-ность. У лиц Rh+ этот ген представлен одной или двумя копиями. Как уже упоминалось, у большинства лиц Rh- ген, кодирующий субстрат D, отсутствует. Находящийся в прилежащем локусе ген RHCE определяет экспрессию антигенов С, с, Ей е.
Гены RH в каждом гаплотипе с большой точностью контролируют количество вырабатываемого антигенного вещества. У разных членов одной и той же семьи гаплотип RH кодировал продукцию одинакового количества каждого присутствующего в фенотипе антигена (Rosenfield, Kochwa [393, 576]).
Принцип идентификации генов, ответственных за продукцию Rh-антигенов, сводится к следующему:
- выделение несущего Rh-активность белка с помощью преципитации специфическими антителами;
- расшифровка аминокислотной последовательности иммунодоминантного белка, приготовление комплементарных молекулярных зондов и конструкций для идентификации кодирующей ДНК (кДНК);
- вживление (трансфекция) кДНК в клетки или плазмиды, не производящие аналогичного иммунодоминантного продукта;
- идентификация геномного продукта трансфектных клеток или плазмид;
- идентификация геномной ДНК (гДНК), представляющей собой собственно ген с кодовой записью иммунодоминантного продукта.