Эритроциты, сенсибилизированные in vitro протеином С4, непосредственно агглютинируются антителами анти-Ch и анти-Rg. Нативные эритроциты реагируют с указанными антителами только в непрямой антиглобулиновой пробе (Tilley и соавт. [92]). Эта особенность связана с низким уровнем адсорбции эритроцитами протеина С4 in vivo (Atkinson и соавт. [2]).
Сенсибилизацию эритроцитов комплементом in vitro проводят посредством их инкубации со свежей нативной сывороткой в 10% сахарозе. При этом клетки могут быть сенсибилизированы как собственным комплементом, так и привнесенным с плазмой другого АВО-совместимого лица (Giles [26], Tilley и соавт. [92]). Этот методический прием используют при определении группы Ch/Rg, а также при стандартизации антиглобулиновых реагентов (для выявления антикомплементарных анти-С4-антител, которые считаются нежелательными при выполнении непрямой антиглобулиновой пробы).
Антигены Ch/Rg на нативных эритроцитах, не сенсибилизированных комплементом в 10% сахарозе, разрушаются трипсином, химотрипсином, папаином, фицином и проназой (Atkins [1], Longster, Giles [47], Middleton, Grookston [54], Nordhagen и соавт. [61], Tilley и соавт. [92]). Путем подсчета молекул C4d, связанных с эритроцитами, было показано, что их количество уменьшается в 2 раза после обработки трипсином (Giles и соавт. [29]). Антигены Ch/Rg устойчивы к действию сульфгидрила и сиалидазы, однако эритроциты, обработанные сиалидазой, утрачивают способность адсорбировать комплемент в растворе сахарозы (Wilfert и соавт. [97]). На этом основании полагают, что связывание компонента С4 с эритроцитами отчасти зависит от сиаловых кислот. В эритроцитах лиц, имеющих редкие группы крови Еп(а-) и Мк по системе MN, содержание сиаловой кислоты низкое, и антигены Ch/Rg на них также слабо выражены (Tippett и соавт. [93]).
Отмечена низкая экспрессия указанных детерминант на эритроцитах пуповинной крови, однако сыворотки крови новорожденных ингибировали антитела анти-Ch и анти-Rg так же активно, как и плазма взрослых людей (Atkins [1], Middleton, Crookston [54], Nordhagen и соавт. [61].
Существуют 4 основных серологических метода для определения фенотипа Ch/Rg (Daniels [15]).
- прямая агглютинация исследуемых эритроцитов реагентами анти-Ch и анти-Rg;
- нейтрализация активности стандартных реагентов анти-Ch и анти-Rg плазмой обследуемого лица с последующим учетом результатов по пассивной агглютинации стандартных эритроцитов;
- агглютинация эритроцитов, сенсибилизированных собственным комплементом;
- агглютинация аллогенных эритроцитов, сенсибилизированных комплементом обследуемого индивида.
Антигены Chi, Ch2 и Ch3 выявляют используя нативные эритроциты, без предварительной сенсибилизации комплементом (Atkins [1]).
Предложено несколько методов определения аллотипов С4: иммунофик-сация десиалилированной плазмы, электрофорез в полиакриламидном геле (SDS-PAGE), иммуноблоттинг с антителами анти-С4, анти-Ch и анти-Rg (Giles, Robson [35],